四妙勇安汤提取物抑制巨噬细胞NF-κB活化和MMP-9分泌的初步研究

目的探讨四妙勇安汤提取物对巨噬细胞核转录因子-κB(NF-κB)活化和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)分泌的作用,为开发抗不稳定型心绞痛中药的研发提供基础实验数据。方法以LPS损伤小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,ELISA法检测上清液中MMP-9的含量;同时,采用NF-κB-RE基因转染细胞,通过荧光素酶检测试剂检测细胞内NF-κB的变化,采用高通量筛选技术筛选出提取物的有效组分。结果在一定浓度范围内,1、2、3、4、6号提取物能够明显降低LPS作用后MMP-9的分泌,并具有浓度依赖关系;1、2、3、4、6、7号提取物对NF-κB信号通路具有阻断作用。结论四妙勇安汤部分提取物可抑制LPS刺激后巨噬细胞NF-κB信号通路,同时减轻MMP-9的分泌,这一作用可能与其抗冠心病不稳定心绞痛的作用相关。

高水平胰岛素对大鼠系膜细胞NF-κB活化及细胞外基质合成的影响

探讨高水平胰岛素对系膜细胞NF κBp6 5活化及细胞外基质合成的影响。用高水平的胰岛素刺激系膜细胞后 ,用免疫组化染色观察系膜细胞NF κBp6 5活化 ,放免法测定系膜细胞培养上清液中Ⅳ型胶原及层粘蛋白 (LN)水平。并以无胰岛素刺激为正常对照组。结果显示胰岛素刺激后 ,系膜细胞内NF κBp6 5核移位阳性率 (PR)、平均光密度 (ALD)以及上清液中Ⅳ型胶原、LN在一定浓度范围内呈剂量和时间依赖性增加 ,表明胰岛素可促进系膜细胞的NF κBp6

低剂量电离辐射诱导转录因子NF-κB活化及其信号通路的实验研究

目的 研究低剂量电离辐射对转录因子NF κBDNA结合活性的影响 ,探讨NF κB结合活性信号传导通路的机理。方法 采用凝胶电泳移动变化分析及免疫组织化学的方法检测了X射线照射后EL 4细胞NF κBDNA结合活性的时程变化及p65核转位、IκBα水平的变化 ,同时用脂质体介导的瞬时转染法将空质粒和NF κB 荧光素酶表达质粒转染到NIH3T3细胞内 ,并用PKC信号通路阻断剂CalphostinC处理 ,检测受照后其荧光素酶的表达变化。结果 0 0 75GyX射线照射可诱导NF κB、p50 p65和p50 p50活性增强 ,而前者活性增强更明显。这种转录激活能力的增强 ,涉及到辐射诱导的p65核转位和IκBα水平的变化 ,表现为受照后p65亚基核阳性率明显升高 ,而IκBα水平的变化正相反 ,在照后 4h分别达到峰值和低谷。而且PCK信号通路阻断剂CalphostinC可降低 0 0 75Gy照射对NF κB的活化效应。结论 低水平照射诱导NF κB的迅速活化 ,而且可能通过PKC通路 ,进而调节细胞因子等特异基因的表达 ,促使免疫功能增强 ,这可能是低剂量辐射兴奋效应的机理之一。

护骨素与骨质疏松症

护骨素是近年发现的肿瘤坏死因子家族的新成员,具有抑制破骨细胞分化及骨吸收活性的一种分泌型糖蛋白。护骨素与NF-κB受体活化因子配体和NF-κB受体活化因子之间竞争性结合机制是调控破骨细胞分化、增殖、凋亡及发挥作用过程中最重要的信号通路。护骨素是偶联成骨细胞、基质细胞和破骨细胞分化、活化与生物活性的主要细胞因子,对骨形成和骨吸收起重要调节作用,对骨质疏松的发病机制和治疗有着重要影响。

周期性张、压应力作用下人牙周膜干细胞RANKL/OPG的变化

目的:对周期性张、压应力作用下人牙周膜干细胞(h PDLSCs)RANKL、OPG及RANKL/OPG比值的变化进行初步探讨。方法:用3 000μstrain,0.5 Hz的周期性张、压应力对h PDLSCs分别加载0(对照组)、3、6、12、24 h。Western blotting检测RANKL和OPG的变化,计算RANKL/OPG比值的变化。结果:周期性张应力作用3 h,RANKL/OPG比值达到最低点(0.902±0.196),显著低于对照组水平(P=0.000),此后开始上升,但直到24 h,仍低于对照组水平。周期性压应力作用3 h,RANKL/OPG比值达到最高点(1.058±0.147),显著高于对照组水平(P=0.000),6 h(0.996±0.103)回落到对照组水平(P=0.152),此后直到24 h(0.8449±0.041),显著低于对照组水平(P=0.000)。结论:周期性张、压应力都可以上调h PDLSCs的RANKL和OPG表达。在周期性张应力加载的最初24 h,h PDLSCs不能促进破骨细胞分化;而周期性压应力加载的最初6 h,h PDLSCs可以促进破骨细胞分化,此后转而抑制破骨细胞分化。

金属离子刺激小鼠成骨细胞骨保护素及其配体表达的实验研究

目的在人工全髋关节翻修术中发现假体周围大量金属离子聚集和NF-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κBligand,RANKL)表达的增加,通过观察Co2+、Cr3+对小鼠成骨细胞RANKL、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响,探讨金属离子与假体无菌性松动关系。方法取浓度为1×105个/mL体外培养的小鼠成骨细胞,根据培养基不同分两组:实验组采用含10mg/L CoCl2及150mg/L CrCl3溶液的培养基;对照组采用不含金属离子的培养基。培养24、48h,采用RT-PCR和ELISA法检测RANKL、OPG mRNA及蛋白表达。结果RT-PCR检测示培养24、48h两组均见RANKL、OPGmRNA的表达,实验组表达量较对照组高,以RANKL增加显著,差异有统计学意义(P<0.05);培养24、48h,实验组RANKL/OPG mRNA的比值分别为0.860、1.232,较对照组0.695、0.688明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测显示,实验组RANKL、OPG蛋白表达量较对照组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Co2+、Cr3+可刺激小鼠成骨细胞RANKL、OPG mRNA的表达并促进其蛋白的分泌,以RANKL增加显著,从而促进破骨细胞的形成与活化以及假体无菌性松动的发生。

不同分期乳腺癌中RANKL和RANK表达变化规律研究

目的探讨RANKL和RANK蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系。方法采用免疫组化法检测83例乳腺癌组织中RANKL和RANK蛋白的表达,分析RANKL和RANK蛋白表达与病理类型、肿瘤大小和腋窝淋巴结转移情况之间的关系。结果 RANK蛋白阳性表达率为100%(83/83),不同分期及病理类型的乳腺癌组织均表达RANK。RANKL蛋白阳性表达率为25.30%(21/83),其阳性表达与病理类型和肿瘤大小无关,但在不同淋巴结转移情况的病例间阳性表达差异具有统计学意义(P<0.05),随腋窝淋巴结转移数目的增加,RANKL蛋白阳性表达下降。结论乳腺癌组织普遍表达RANK蛋白。RANKL蛋白在乳腺癌组织中的表达与淋巴结转移情况相关,与病理类型及肿瘤大小无关。