NF-κB“decoy”寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞IL-10表达的影响

目的 :探讨NF -κB“decoy”寡核苷酸 (ODNs)对脂多糖 (LPS)诱导小鼠巨噬细胞株J774 .1表达IL - 10的影响。方法 :通过体外细胞培养技术 ,观察转染NF -κB“decoy”ODNs对LPS刺激巨噬细胞产生IL - 10及其表达的影响。结果 :在LPS刺激的巨噬细胞中转染NF -κB“decoy”ODNs对抗炎介质IL - 10的合成表达无影响。结论 :NF-κB“decoy”ODNs不抑制抗炎介质IL - 10的表达 ,可能由于NF -κB在IL - 10转录机制中不占主导地位。

阳离子脂质体介导NF-κB“decoy”ODNs转染巨噬细胞条件的优化

目的 :观察 NF- κB“decoy”ODNs在阳离子脂质体 lipofectin介导下转染小鼠巨噬细胞 J774 .1的优化参数以及在细胞内的分布。 方法 :改变 ODN与 lipofectin比率、转染时间 ;用流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度和摄取率评价转染效率 ;荧光显微镜观察细胞内荧光分布 ;测定细胞上清乳酸脱氢酶 (L DH)观察细胞损伤情况。 结果 :lipofectin介导转染显著提高 J774 .1细胞对 NF- κB“decoy”ODNs的摄取 ;在 2 4孔培养板中 ,NF- κB“decoy”ODNs与 lipofectin比率 (W/ W)为 1∶ 5、转染 6 h时 ,转染效率最佳而细胞毒性相对较低 ;lipofectin介导转染 6 h后 ,细胞内荧光物质主要聚集于细胞核和部分细胞质中 ,而直接转染时荧光物质多分布于细胞质。结论 :lipofectin可增加 NF-κB“decoy”ODNs的细胞摄入并改变其细胞内分布 ;NF-κB“decoy”ODNs与 lipofectin比率 (W/ W)为 1∶ 5、转染 6 h时可获得最佳转染效率。

NF-κB decoy寡核苷酸联合阿霉素诱导裸鼠肝癌细胞HepG_2凋亡

目的:探讨NF-κB decoy寡核苷酸协同阿霉素对裸鼠肝癌细胞HepG2的作用及机制。方法:接种传代培养的人肝癌细胞HepG2于裸鼠皮下,局部注射NF-κB decoy寡核苷酸和/或阿霉素进行治疗。观测裸鼠瘤体大小变化,计算抑瘤率;HE染色观察肝癌组织结构和细胞形态改变;TUNEL法检测细胞凋亡。结果:NF-κB decoy寡核苷酸联合阿霉素治疗组裸鼠肝癌细胞的生长受到明显抑制,抑瘤率为80.52%;肿瘤重量、体积明显小于单用NF-κBdecoy寡核苷酸、阿霉素治疗组及对照组;联合组癌组织凋亡增加,凋亡指数为(39.8±1.6)%,与其余3组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:NF-κB decoy寡核苷酸协同阿霉素能抑制NF-κB活性,促进肝癌细胞凋亡,增加其对化疗药物的敏感性。

NF-κB decoy寡核苷酸对人结肠癌细胞株SW480/ADM耐药性的逆转作用

目的探讨核转录因子κB(NF-κB)decoy寡核苷酸对人结肠癌细胞株SW480/阿霉素(ADM)耐药的逆转作用。方法应用脂质体转染方法将NF-κB decoy寡核苷酸质粒转入SW480及SW480/ADM细胞株并证实基因转入成功,MTT法检测SW480及SW480/ADM对ADM的药物敏感度并观察NF-κB decoy寡核苷酸对耐药的逆转程度。结果构建NF-κB decoy寡核苷酸有效,能降低核内NF-κB表达;核内NF-κB表达可以导致SW480耐药细胞株药物敏感度增高,并与剂量和时间相关。结论 NF-κB decoy寡核苷酸对人结肠癌细胞株SW480/ADM耐药有明显的逆转作用。

Fucose-appended dendrimer/α-cyclodextrin conjugate as a novel NF-κB decoy carrier to Kupffer cells infulminant hepatitis mice induced by lipopolysaccharide

Fulminant hepatitis is a serious, life-threatening disorder and is associated with inflammatory cytokines produced by Kupffer cells. However, a number of clinical trials for the treatment of fulminant hepatitis did not show enough substantial benefits. Since NF-κB is a key mediator of inflammatory response in Kupffer cells, NF-κB decoy would be an attractive candi-datefor the treatment of fulminant hepatitis.

NF-κB靶向性哑铃形“圈套”ODNs抑制大脑皮质神经元氧糖剥夺／复氧后TNF-α的表达

目的设计合成靶向哑铃形寡核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODNs)圈套,检测其对大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后TNF-α表达的抑制效应。方法原代大脑皮质神经元体外培养,建立氧糖剥夺/复氧模型,以正常组、OGD4h/R6h组、NF-κB decoy ODNs组、无关decoy ODNs组、脂质体组为实验组,采用Western blot检测NF-κB p65蛋白表达,分别采用免疫细胞化学和逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测TNF-α蛋白和mRNA表达。结果Westernblot检测显示NF-κB decoy ODNs组NF-κB P65蛋白表达明显低于OGD4h/R6h组、脂质体组、无关decoy ODNs组(P<0.05),与OGD4h/R6h组、脂质体组、无关decoy组相比NF-κB decoy ODNs组TNF-α蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05);而脂质体组、无关decoy ODNs组对NF-κB P65蛋白、TNF-α蛋白和mRNA表达未见抑制(P>0.05)。结论靶向性NF-κB的哑铃形圈套ODNs可有效抑制大脑皮质神经元OGD/R后炎症因子TNF-αmRNA及蛋白的表达。

NF-κB decoy对人脐静脉内皮细胞组织因子表达及凝血因子Ⅶ激活抑制作用研究

目的 用decoy策略调控核因子κB(NF κB)调节组织因子 (TF)表达及相应的因子Ⅶ(FⅦ )活化 ,探讨冠心病新的防治方法。方法 用流式细胞术检测NF κBdecoy对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的转染效率 ,用凝胶迁移率改变竞争实验证实NF κBdecoy的作用机制 ,用RT PCR检测组织因子 (TF)mRNA ,流式细胞术检测HUVEC表面TF抗原 ,重组组织因子一期凝血法检测与HUVEC共孵育的血浆中活化因子Ⅶ (FⅦa)活性。结果 decoy能成功地转染入HUVEC内 ,能与TF启动子的κB位点顺式作用元件竞争性结合转录因子NF κB ,明显抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)刺激的HUVECTFmRNATF抗原表达及相应的FⅦa活性。结论 NF κBdecoy能通过抑制TF表达而抑制FⅦ的激活 ,为冠心病的防治提供新的思路。

脂质体转染NF-κB诱捕物寡核苷酸抑制大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的探讨转染NF-κB诱捕物寡核苷酸(decoy ODN)对肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法制作20只肝脏缺血再灌注SD大鼠模型,无序ODN对照组、decoy ODN实验组各10只。阻断肝脏血流后,实验组行脂质体包裹的NF-κBdecoy ODN溶液门静脉注射转染,对照组行脂质体包裹的无序ODN门静脉注射。开放肝脏血流后3h取出肝脏,应用病理学、EMSA和RT-PCR分别检测移植肝脏病理改变、肝脏组织NF-κB转录活性和TNF-αmRNA表达情况。结果实验组肝脏损伤减轻,肝细胞NF-κB转录活性、TNF-α mRNA表达较对照组明显减小或减少(均P<0.01)。结论 NF-κBdecoy ODN可有效抑制肝脏细胞NF-κB的激活从而抑制肝脏缺血再灌注损伤。

诱骗寡聚脱氧核苷酸在疾病治疗中的研究进展

诱骗寡聚脱氧核苷酸(decoy oligodeoxynucleotide,decoy ODN)通过与目的基因启动子上的转录因子结合位点(trascription factor binding site,TFBS)竞争性地结合转录因子,从而影响转录因子调控的靶基因表达。近年来,越来越多的研究者证实通过识别各种疾病相关的信号通路与转录因子,设计相应的decoy ODN,可以对一些疾病起到治疗效果,这其中包括运用STAT3 decoy ODN治疗恶性肿瘤和运用NF-κB decoy ODN治疗炎症纤维化疾病和心血管疾病。本文将总结分析近5年decoy ODN策略在疾病研究中的运用,为治疗肿瘤、纤维化、心脑血管病等疾病提供新的思路。

核因子-κB“圈套”策略对子痫前期大鼠模型母胎界面炎症的作用

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)"圈套"寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleitides,ODN)对子痫前期大鼠模型母胎界面炎症反应的影响。方法:①NF-κB"圈套"寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)的设计、合成及转染;②研究NF-κB decoy ODN对子痫前期大鼠模型母胎界面的作用:Wistar孕鼠100只,随机分成正常对照组、子痫前期组、ODN组、脂质体组、错配ODN组,检测母胎界面的NF-κB表达和炎症反应。结果:子痫前期大鼠母胎界面NF-κB的表达明显增强,同时炎症反应较重。NF-κB decoy ODN能有效抑制母胎界面的炎症反应,而错配ODN却没有该效果。结论:NF-κB decoy ODN能有效抑制NF-κB介导的各类炎症因子的表达和合成,减轻子痫前期母胎界面的炎症反应。