NF-κB p50、NF-κB p65在甲状腺癌中的表达及意义

目的探讨NF-κB p50、NF-κB p65蛋白在甲状腺癌、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿、正常甲状腺组织中的表达及二者与甲状腺癌的浸润、转移的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测NF-κB p50和NF-κB p65蛋白在甲状腺癌组(60例乳头状癌、20例滤泡癌和20例髓样癌)及非甲状腺癌组(30例健康者、30例甲状腺腺瘤、30例结节性甲状腺肿)的甲状腺组织的表达,并检测NF-κB p50和NF-κB p65蛋白的表达的相关性。结果 NF-κB p50蛋白在甲状腺癌、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及健康者甲状腺组织中的阳性率分别为73.00%、30.00%、33.33%及6.67%。NF-κB p50蛋白在甲状腺非癌组织的阳性率明显低于癌组织。NF-κB p65蛋白在甲状腺癌、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及健康者甲状腺组织中的阳性率分别为74.00%、36.67%、40.00%及10.00%。NF-κB p65蛋白在甲状腺非癌组织的阳性率明显低于癌组织。NF-κB p50蛋白在肿瘤直径≥1.0 cm组及<1.0 cm组的阳性率分别为79.41%和56.25%,差异均有统计学意义(P<0.05);NF-κB p65蛋白在肿瘤直径≥1.0 cm组及<1.0 cm组阳性率分别为94.12%和81.25%,差异均有统计学意义(P<0.05)。NF-κB p50蛋白和NF-κB p65蛋白在淋巴结转移组的阳性率分别为85.19%和87.04%;在无淋巴结转移组的阳性率分别为56.52%%和69.57%。差异均有统计学意义(P<0.05)。NF-κB p50蛋白和NF-κB p65蛋白的表达呈正相关关系(r=0.712,P<0.05)。结论 NF-κB p50蛋白和NF-κB p65蛋白参与甲状腺癌的表达,并于甲状腺癌的发生、发展过程中发挥着重要的协同作用。

甲状腺癌中NF-κB p50、NF-κB p65的表达及其与临床特征的关系

目的探讨甲状腺癌组织中NF-κB p50、NF-κB p65的表达及其与临床特征的关系。方法选取73例甲状腺癌患者作为研究对象。采用免疫组化SP法检测所有患者甲状腺癌组织的NF-κB p50、NF-κB p65表达情况,并分析其与临床特征的关系。结果 (1)NF-κB p50表达阳性组与NF-κB p50表达阴性组之间性别、年龄、病理类型相比,差异无统计学意义(P>0.05);NF-κB p50表达阳性组肿瘤直径、淋巴结转移显著高于NF-κB p50表达阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)NF-κB p65表达阳性组与NF-κB p65表达阴性组之间性别、年龄、病理类型相比,差异无统计学意义(P>0.05);NF-κB p65表达阳性组肿瘤直径、淋巴结转移显著高于NF-κB p65表达阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)甲状腺癌组织表达NF-κB p50与NF-κB p65呈显著正相关(γs=0.653,P<0.05)。结论甲状腺癌组织表达NF-κB p50、NF-κB p65与肿瘤直径、淋巴结转移密切相关,两者可能在甲状腺癌发生发展、淋巴结转移过程中发挥协同作用。

大脑皮质神经元氧糖剥夺／复氧后NF-κB P50及c-Rel蛋白的表达

目的:探讨Wistar大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后不同时间点NF-κB亚基P50及c-Rel蛋白表达情况。方法:体外培养原代大脑皮质神经元,采用免疫细胞化学鉴定神经元,建立氧糖剥夺/复氧模型,以正常组、OGD 4h组、OGD 4h/R2h组、OGD 4h/R6h组、OGD 4h/R12h组、OGD 4h/R24h组为实验组,采用免疫细胞化学、Western印迹检测NF-κB亚基P50及c-Rel蛋白表达。结果:(1)免疫细胞化学(神经元烯醇化酶相关抗原及β-tubulin 3)鉴定所培养的细胞为神经元;(2)免疫细胞化学、Western印迹结果显示OGD 4h组NF-κB P50蛋白表达开始增加明显高于正常组(P<0.05),OGD 4h/R2h组、OGD 4h/R6h组NF-κB P50蛋白表达持续性升高,并在复氧后6h达高峰(P<0.01),此后逐渐下降,至OGD 4h/R 12h时与正常组有显著差异(P<0.05),OGD 4h/R 24h NF-κB P50蛋白表达降低与正常组比较无统计学差异(P<0.05);(3)NF-κB c-Rel蛋白表达OGD 4h组与正常组无差异(P>0.05),OGD 4h/R 2h至OGD 4h/R 12h表达持续增加,并在复氧后12h达高峰(P<0.01),OGD4h/R24h仍未恢复到正常水平(P<0.05)。结论:大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后激活了NF-κB P50及c-Rel蛋白的表达,并具有时间相关性。

转录因子NF-κB p50基因的克隆、表达及抗p50抗体的制备

利用ＤＮＡ重组技术，将转录因子ＮＦ－κＢｐ５０基因片段插入ｐＧＥＸ－２Ｔ质粒载体，经ＤＮＡ序列分析证明克隆的正确性．将重组的ｐＧＥＸ－２Ｔ／ｐ５０转化入大肠杆菌ＪＭ１０９，表达出ｐＧＥＸ－２Ｔ／ｐ５０融合蛋白．经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测证实表达产物对抗ｐ５０ｃ的抗体呈特异性反应，表明克隆的正确性，并成功地应用纯化的ｐ５０蛋白制备了免疫血清．

基于PbTiO_(3)表面原位纳米酶的生物传感平台用于NF-κB p50检测

该文介绍了一种通过将K_(4)Fe(CN)_(6)配位到PbTiO_(3)表面获得原位纳米酶的新策略。利用脱氧核糖核苷5′-单磷酸(dNMP)在PbTiO_(3)表面的结合,阻止K_(4)Fe(CN)_(6)在PbTiO_(3)表面原位形成纳米酶,构建了基于纳米酶的生物传感平台。当NF-κB p50存在时,dNMP难以产生,K_(4)Fe(CN)_(6)得以顺利结合到PbTiO_(3)表面,并在其表面自发形成纳米酶,催化TMB氧化以定量检测NF-κB p50。实验表明,该方法对NF-κB p50的检测线性范围为3.0 pmol/L~10 nmol/L,检出限(S/N=3)为1.2 pmol/L,对实际样品的加标回收率为99.1%~102%,相对标准偏差不大于5.3%。该方法为NF-κB p50的检测提供了一种无标记、无固定且具有信号放大作用的新策略,不仅灵敏度高、选择性好、操作简便,且在实际样品检测中具有潜在的应用价值。

黄芪生脉饮对模拟运输应激大鼠肺脏组织TLR4和NF-κB p50 mRNA表达的影响

为了探讨模拟运输应激对大鼠肺脏组织TLR4和NF-κB p50 mRNA表达的影响及黄芪生脉饮的调控作用,本文将30只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和中药组,给中药组大鼠连续灌服黄芪生脉饮7 d,对照组、模型组灌服等量生理盐水,然后将模型组和中药组大鼠每日置于35℃、60 r/min的水平摇床摇晃2 h,连续3 d,模拟运输过程中的摇晃、高温、拥挤等因素,构建大鼠运输应激模型,实时荧光定量PCR法测定大鼠肺组织TLR4和NF-κB p50 mRNA表达的变化。结果表明:模型组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达量显著低于对照组和中药组(P<0.05),中药组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05),模型组大鼠肺组织NF-κB p50 mRNA表达量显著低于对照组和中药组(P<0.05),且对照组和中药组NF-κB p50 mRNA表达量无显著差异(P>0.05)。因此,黄芪生脉饮可通过降低大鼠肺脏组织中TLR4 mRNA的表达、增强NF-κB p50 mRNA表达来达到抑制TLR4-NF-κB信号通路的激活,进而控制下游的炎性信号通路及炎性细胞因子的表达,起到抑制运输应激大鼠肺组织炎症的作用。

FAT10、NF-κB p50在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义

目的探讨双泛素(FAT10)和核因子-κB p50(NF-κB p50)在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法应用Max VisionTM免疫组织化学法,检测112例乳腺浸润性导管癌组织和53例癌旁组织中FAT10与NF-κB p50的表达,并分析两者表达的相关性及其与乳腺癌临床病理特征的关系。结果 FAT10和NF-κB p50在乳腺浸润性导管癌中的阳性表达率分别为77.68%(87/112)和81.25%(91/112),明显高于癌旁组织的39.62%(21/53)和45.28%(24/53),差异均有统计学意义(P<0.001)。FAT10、NF-κB p50在乳腺浸润性导管癌中的表达与淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关(P<0.05),而与患者的年龄、肿瘤大小及分子分型无关(P>0.05)。FAT10与NF-κB p50在乳腺浸润性导管癌中的表达呈显著正相关(r=0.624,P<0.001)。结论 FAT10、NF-κB p50的表达与乳腺浸润性导管癌的恶性程度及侵袭转移密切相关,两者可能共同促进肿瘤的发生发展。

NF-κB p50和NF-κB p65在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨NF-κB p50及NF-κB p65在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者各临床病理参数之间的关系并探讨其与胃癌患者预后的关系。方法 建立组织芯片，通过免疫组织化学SP法检测129例无术前放、化疗史的胃癌患者手术标本和101例癌旁组织中NF-κB p50及NF-κB p65的表达情况，并对随访患者进行生存分析。结果 NF-κB p50在胃癌组织中阳性表达率为84.5%，在癌旁组织表达率为32.7%，2组差异有统计学意义（P〈0.01）; NF-κB p50阳性表达与肿瘤TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关（P〈0.05）。NF-κB p65在胃癌组织中阳性表达率为79.1%，在癌旁组织表达率为27.7%，2组差异有统计学意义（P〈0.01）；NF-κB p65阳性表达与肿瘤TNM分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）。Kaplan-Meier生存分析结果显示，NF-κB p50和NF-κB p65阳性表达均与胃癌不良预后有关（P值均〈0.01），并且通过联合检测结果显示，NF-κB p50-/NF-κB p65-表达组和NF-κB p50±/NF-κB p65？表达组的生存时间均比NF-κB p50＋/NF-κB p65＋表达组的生存时间长（P〈0.01）。经Cox比例风险回归模型分析显示，NF-κB p50、NF-κB p65、肿瘤TNM临床分期和淋巴结转移与患者预后有关，且NF-κB p50可作为独立的预后因素。结论 NF-κB p50和NF-κB p65在胃癌组织中均高表达，NF-κB p50阳性表达与肿瘤TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关；NF-κB p65阳性表达与肿瘤TNM分期和淋巴结转移有关。NF-κB p50和NF-κB p65阳性表达均与胃癌患者不良预后相关，且NF-κB p50可作为胃癌患者独立的预后因素。同时联合检测发现NF-κB p50＋/NF-κB p65＋表达组患者的生存时间最短，因此联合检测NF-κB p50和NF-κB p65可能有助于胃癌的早期诊断及预后分析，并进一步提示NF-κB p50和NF-κB p65可能在胃癌发生、发展中起重要作用。

NF-κBp50参与IL-4在THP-1细胞中诱导DC-SIGN的表达(英文)

树突状细胞表面特异的胞间黏附分子3捕获非整合素(DC-specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing nonintegrin,DC-SIGN)是树突状细胞表面特异的蛋白,在抗原呈递过程中起关键作用.这种特异性的表达和DC-SIGN的调节机制有关.到目前为止,DC-SIGN表达调控的机制还不是很清楚.IL-4是诱导DC-SIGN表达的最重要的细胞因子之一,而NF-κB是调控细胞信号转导的一个重要调控因子,两者都和DC-SIGN的表达调节相关.研究了IL-4和NF-κB对DC-SIGN启动子活性、对DC-SIGN表达的影响以及IL-4和NF-κB之间相互作用的关系.发现:DC-SIGN启动子中NF-κB位点缺失可以使DC-SIGN启动子活性下降大约50%,NF-κBp50可以促进DC-SIGN在THP-1细胞的表达,IL-在THP-1细胞诱导DC-SIGN表达的同时,也促进了NF-κBp50的表达.这些结果显示,在THP-1细胞中NF-κBp50参与IL-4诱导的DC-SIGN表达.

TSA抑制NF-κB/p50而减轻缺血性脑损伤

目的:研究曲古菌素A(TSA)对缺血再灌注性脑损伤小鼠的保护作用及其可能的分子学机制。方法:小鼠侧脑室立体定位注射TSA;插线法制备局灶性大脑中动脉缺血再灌注模型;神经功能评分进行行为学研究;TTC染色检测脑梗死面积;Western blot测定COX-2、iNOS、NF-κB/p50的表达。结果:小鼠缺血再灌注损伤脑可出现明显的神经功能缺失,并出现较大面积的梗死灶,TSA能明显改善脑缺血再灌注损伤后的神经功能,减小脑梗死面积。缺血再灌注损伤脑组织COX-2、iNOS炎症蛋白和NF-κB亚单位p50蛋白表达增加,应用TSA后可显著抑制上述蛋白的表达。结论:TSA可通过抑制炎症反应对脑缺血再灌注损伤小鼠具有脑保护作用,此作用可能由NF-κB/p50途径介导。

NF-κB p50亚基在原发结内的非特指型外周T细胞淋巴瘤中的表达

目的探讨原发结内的非特指型外周T细胞淋巴瘤（PTCL-U）核转录因子（NF-κB p50）的表达与其复杂的生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学方法，检测51例经病理确诊的原发结内PTCL-U患者病理组织的NF-κB p50、p170糖蛋白的表达情况，分析其与临床特征、治疗效果、预后的关系。结果51例患者中NF-κB p50和p170糖蛋白的阳性表达率分别为21．6％（11／51）和60．8％（31／51）。NF-κB p50和p170糖蛋白的表达和一般行为状态差（PS〉2分）及首程治疗不能完全缓解显著相关（Spearman相关系数=0．459、0．313、0．284；P=0．001、0．025、0．044）。NF-κB p50表达阳性组总的生存率经Log-Rank检验显著低于阴性组（P=0．0451）。多因素生存分析显示：一般行为状态差（PS〉2分）、Ki-67高表达为PTCL-U的独立预后不良因素，NF-κB p50尚不能作为独立预后因素。结论NF-κB p50的表达和原发于结内的PTCL-U的耐药性和不良预后有关。

子宫内膜癌患者CerbB-2、NF-κB P50、MIF和IκBα蛋白表达水平与疾病严重程度的相关性研究

目的探讨子宫内膜癌患者原癌基因Cerb B-2(Cerb B-2)、核因子κB(NF-κB) P50、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和核因子κB的抑制蛋白α(IκBα)表达水平与疾病严重程度的相关性。方法选取2015年8月至2019年3月间营口市妇产儿童医院收治的行手术切除治疗的93例子宫内膜癌患者的子宫内膜癌标本组织为观察组,另选取同期行宫腔镜检查的30例健康人群子宫内膜标本为对照组,比较两组受试者Cerb B-2、NF-κB P50、MIF、IκBα的mRNA蛋白表达水平和Cerb B-2、NF-κB P50、MIF、IκBα蛋白阳性率。结果观察组Ⅲ期组患者Cerb B-2、NF-κB P50、MIF和IκBα的mRNA相对表达量高于Ⅱ期组,Ⅱ期组高于Ⅰ期组,Ⅰ期组高于对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。观察组Ⅲ期组患者Cerb B-2、NF-κB P50、MIF和IκBα蛋白表达水平高于Ⅱ期组,Ⅱ期组高于Ⅰ期组,Ⅰ期组高于对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。Ⅲ期组Cerb B-2、NF-κB P50、MIF和IκBα蛋白阳性率高于Ⅰ期组和对照组,Ⅱ期组和Ⅰ期组Cerb B-2和MIF蛋白阳性率高于对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论 Cerb B-2、NF-κB P50、MIF和IκBα蛋白表达水平与子宫内膜癌患者疾病严重程度呈正相关,可作为判断子宫内膜癌病情的参考指标。

大肠癌组织中NF-κB/p 50、Bcl-2的表达及相关性研究

目的研究NF-κB/p 50和Bcl-2在大肠癌组织中的表达,分析二者在大肠癌发生、发展进程中的作用及意义。方法运用免疫组化S-P法检测NF-κB/p 50和Bcl-2在42例大肠癌及5例正常粘膜组织中的表达。结果NF-κB/p50和Bcl-2在大肠癌组织中的阳性表达率为61.9%和52.4%,明显高于正常粘膜,差异有统计学意义(P=0.008;P=0.026)。NF-κB/p 50的表达与患者年龄、性别、肿块大小、Ducks分期、组织分化程度、淋巴结转移等临床病理参数均无统计学意义(P>0.05);Bcl-2的表达与Dukes分期和淋巴结转移差异有统计学意义(P=0.031;P=0.002);大肠癌中NF-κB/p50和Bcl-2的表达呈正相关(r=0.332,P=0.032)。结论NF-κB/p50的高表达很可能促进了大肠癌的发生;NF-κB/p 50可能通过调节Bcl-2基因来抑制肿瘤细胞的凋亡。

NF-κB亚基p50在病毒诱导的IFN-β表达中的作用研究

目的探究核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)家族成员p50的缺失对不同类型病毒诱导的IFN-β(interferonbeta)表达的影响。方法建立小鼠病毒感染模型观察p50-/-小鼠(knockout,KO)和野生小鼠(wild type,WT)生存率;酶联免疫吸附法检测病毒感染后小鼠血清以及骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)上清IFN-β水平。免疫印迹检测IFN-β产生过程中重要转录因子干扰素调节因子(interferon regulatory factor,IRF)的表达和活化。结果致死剂量的病毒感染后,p50-/-小鼠和野生小鼠生存率没有差异;p50的缺失导致病毒感染后小鼠血清和BMDMs培养上清中IFN-β水平轻微降低,IRF7的诱导表达和IRF3的活化在病毒感染早期略有下降。结论NF-κB家族成员p50促进病毒诱导的IFN-β表达,但作用较小。

前列消汤对EAP湿热证模型前列腺内NF-κB表达的影响

目的通过观察前列消汤对实验性自身免疫性前列腺炎(EAP)(湿热证)小鼠模型前列腺组织核转录因子-κB(NF-κB)P65和P50表达的影响,探讨前列消汤干预EAP模型前列腺内NF-κB的作用机制。方法建立EAP(湿热证)模型,用Western Blot和荧光定量PCR法、免疫组化法检测前列消汤对NF-κB P65和P50表达的影响。结果Western Blot结果显示,模型组与正常组比较,前列腺组织内NF-κB P65和P50的表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,前列消高、中剂量组NF-κB P65的表达显著下降(P<0.05),前列消高、低剂量组NF-κB P50的表达显著下降(P<0.05)。荧光定量PCR结果显示,模型组与正常组比较,前列腺组织内NF-κB P65和P50的表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,前列消高、中、低剂量组NF-κB P65的表达显著下降(P<0.05),前列消高剂量组NF-κB P50的表达显著下降(P<0.05)。免疫组化法显示,模型组与正常组比较,前列腺组织内NF-κB P65的表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,前列消高、中剂量组NF-κB P65的表达显著下降(P<0.05)。结论前列消汤可通过抑制前列腺组织内NF-κB P65和P50的表达在CP的治疗中发挥作用。

GST Pull-down实验鉴定NF-κB相互作用多肽

目的体外鉴定NF-κB相互作用多肽与p50和p65间的相互作用。方法首先构建GST-作用多肽融合蛋白的原核表达载体pET-42a/polypeptide及NF-κB p50和p65亚基保守结构域的原核表达载体pET22b/p50和pET22b/p65,并在大肠杆菌E.coliBL-21中诱导表达,后进行GST pull-down实验验证多肽与NF-κB p50和p65的结合效应。结果经诱导表达获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白和具有DNA结合活性的p50p、65蛋白,GST pull-down实验证实3条多肽与p50发生特异地相互作用。结论证实3条多肽在体外能与p50发生物理性的相互作用,这为获得靶向NF-κB的功能拮抗多肽工作奠定了基础。

人外周血单核细胞分化为树突状细胞过程中核转录因子-κBp50的表达及柴胡皂苷a的影响

目的观察人外周血单核细胞分化为树突状细胞(DC)过程中,核转录因子-κB p50(NF-κB p50)的表达以及柴胡皂苷a对单核细胞分化为树突状细胞的影响。方法非连续密度梯度离心获取人外周血单核细胞;用含粒单细胞刺激因子(GM-CSF)、IL-4、肿瘤坏死因子(TNF-α)和柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液分别对细胞因子组、柴胡皂苷组、联合培养组的单核细胞进行体外培养;应用倒置相差显微镜、瑞氏染色和CD14、CD83、HLA-DR、S-100的免疫细胞化学法鉴定单核细胞和DC;动态观察单核细胞分化为DC过程中不同时间点的NF-κB p50的表达,并进行图像分析。结果CD14、CD83、HLA-DR、S-100免疫细胞化学法证实所获单核细胞和DC符合各自的形态和表型特征。在含GM-CSF和IL-4的RPMI-1640培养液培养7d时,单核细胞分化成未成熟DC(imDC);在含GM-CSF、IL-4和TNF-a的RPMI-1640培养液继续培养3d时,imDC分化为成熟DC(mDC),两者的细胞核内NF-κB p50表达具有显著性差异(P<0.05)。单纯用只含柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液培养单核细胞至7d时,可见其细胞核呈NF-κBp50阳性,但未见其分化为DC。若用含GM-CSF、IL-4和柴胡皂苷a的RPMI-1640培养液联合培养7d时,则该单核细胞分化为imDC;加入TNF-α后继续培养3d,imDC的细胞核呈NF-κB p50强阳性,免疫细胞化学法证实imDC已经分化为mDC。联合培养组细胞的表型表达均强于只加细胞因子组(P<0.05)。结论人外周血单核细胞分化为imDC和mDC过程中,细胞核内NF-κB p50表达逐渐增强。单纯用低浓度柴胡皂苷a不能刺激单核细胞分化为DC,但联合细胞因子GM-CSF、IL-4和TNF-α培养时,可使其分化为imDC和mDC。

小分子肽(KP)对小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1增殖分化及NF-κB表达的影响

目的研究小分子肽(KP)对小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1增殖分化及NF-κB p50、p65表达的影响。方法 MTT法检测不同深度KP(0.01、0.1、1.0、10.0、25.0、50.0、100 mg.L-1)对MC3T3-E1生长的影响:PNPP法检测KP作用9、12、15 d后碱性磷酸酶活性:紫外分光光度法检测KP作用12、24 d后细胞中羟脯氨酸的含量;茜素红染色检测矿化结节;Western blot检测成骨矿化过程中细胞不同阶段NF-κB亚基p65和p50的表达。结果浓度为25.0、50.0、100mg.L-1的KP能促进MC3T3-E1细胞增殖生长;50、100 mg.L-1的KP作用细胞9、12、15 d和12、24 d后能分别使细胞中的碱性磷酸酶活性及羟脯氨酸含量高于对照组;30 d后KP组出现典型的矿化骨结节;作用3、12、24、30 d后细胞中p65及p50表达均出现不同程度下降。结论小分子肽(KP)可能是通过抑制NF-κB活性来促进MC3T3-E1细胞增殖分化。

鼻息肉中核因子κB亚单位P50活性与IL-4、γ-IFN因子表达的关系

目的测定鼻息肉中核因子κB亚单位P50的活性及其与IL-4、γ-IFN表达的关系,探讨P50对TH1/TH2细胞因子表达调节的可能机制。方法采用SP免疫组化染色法检测40例鼻息肉患者与20例正常钩突黏膜中IL-4、γ-IFN、P50的表达,以核染阳性率来评估P50活性。对P50活性与IL-4,γ-IFN因子行直线相关分析。结果①鼻息肉中P50胞浆、胞核均有阳性表达,主要位于上皮细胞、炎症细胞及腺上皮细胞胞浆,P50活性显著增强(P<0.001),IL-4表达亦明显增强(P<0.001),γ-IFN表达无明显改变(P>0.05);②Pearson相关性分析提示,P50活性与IL-4表达呈直线正相关关系(r=0.70,P<0.001),而与γ-IFN表达无相关性(r=0.14,P=0.40)。结论鼻息肉中P50的活性明显增强,P50的激活上调IL-4的表达可能是鼻息肉中Th1/Th2因子失衡的重要环节之一。

核因子-κBp50亚基同源结构域的克隆鉴定及自主报告基因活性的检测

目的 :获得NF κBp5 0亚基同源结构域 (RHD)cDNA及构建酵母双杂交系统的“饵”载体 ,并检测靶基因的酵母细胞毒性及自主报告基因的活性。方法 :提取人外周血单个核细胞(PBMC)的总RNA ,以RT PCR扩增NF κBp5 0亚基RHD基因片段 ,重组入酵母双杂交载体pGBKT7中。应用乙酸锂法 ,将重组质粒转化酵母细胞AH10 9,在SD/ Trp选择培养基上培养 ,观察转化株的生长情况 ;用滤膜影印法验证靶基因有无自主报告基因的活性。结果 :经酶切及PCR鉴定 ,重组质粒中插入片段的大小与预期的结果相符。测序结果表明 ,其基因序列正确 ,无读码框移位 ,命名为pGBKT7 p5 0。转化酵母细胞后 ,对酵母细胞无毒性也无自主报告基因的活性。结论 :pGBKT7 p5 0可作为酵母双杂交系统中的“饵”载体 ,用于后续的肽库筛选 ,捕捉与靶基因相互作用的多肽。