miR-27a通过TLR4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎滑膜细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-27a通过Toll样受体(TLR)4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞生物学行为的影响。方法:选择行膝关节置换术的30例RA患者(RA组)和同期因创伤急诊截肢的18例患者(对照组)的滑膜组织,采用qRT-PCR法检测miR-27a的表达。将RA成纤维样滑膜细胞MH7A分为4组:空白对照组,不进行任何处理;TNF-α组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理24 h;TNF-α+miR-NC组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-NC;TNF-α+miR-27a mimic组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-27a mimic,采用qRT-PCR法检测组织或细胞中miR-27a的表达量,CCK-8法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,双荧光素酶报告实验验证TLR4 mRNA与miR-27a的靶向关系,Western blot法检测细胞中TLR4、NF-κB、磷酸化TLR4(p-TLR4)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白的表达情况。结果:对照组和RA组滑膜组织中miR-27a的表达量分别为(1.00±0.08)和(0.36±0.05),RA组低于对照组(P<0.001)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞中miR-27a表达量下降,TNF-α+miR-27a mimic组miR-27a表达量升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞中miR-27a表达量升高(P<0.05)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力增强,细胞凋亡率降低;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力减弱,细胞凋亡率升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实TLR4是miR-27a的靶基因。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimics组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB降低(P<0.05)。结论:miR-27a可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低RA成纤维样滑膜细胞的增殖、侵袭和迁移能力,促进其凋亡。

基于转录组分析揭示斑马鱼elov4b在LC-PUFAs生物合成过程中的作用

为探究脂肪酸延长酶4b(elovl4b)基因在淡水鱼长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFAs)合成中的作用机制,研究首先使用CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated systems)系统成功构建elovl4b基因第2外显子上缺失2个碱基的基因突变纯合子模型(elovl4b^(-/-)),并分析elovl4b基因敲除后斑马鱼肝脏的脂肪酸组成变化。分析发现,相比于野生型(WT)斑马鱼,elovl4b^(-/-)斑马鱼肝脏总脂肪酸占比、C22PUFA占比显著上升,多种LC-PUFAs组成占比出现显著变化。进一步进行斑马鱼肝脏的转录组测序,创建基因文库,筛选出差异表达基因进行富集分析和数据库功能注释分析,用qPCR技术对KEGG通路中的差异表达基因(P<0.05)进行验证。结果显示,基因表达谱变化显著,共有809个基因表达出现显著性差异(485个下调,324个上调),包括磷酸戊糖途径在内的多条通路显著富集。脂肪酸合成等通路显著上调,花生四烯酸代谢、初级胆汁酸合成等通路显著下调。随机选取12条基因通过qPCR(Real-time Quantitative PCR)进行验证,基因的表达趋势与转录组测序所得结果基本一致。上述结果说明elovl4b缺失后,机体内各类LC-PUFAs的组成及包括花生四烯酸代谢、脂肪酸代谢、脂肪生成和代谢在内的许多重要的机体生命过程发生了相应性的变化,进一步揭示了elovl4b在LC-PUFAs合成过程中的作用,能为相关的心血管、慢性肥胖等疾病的治疗提供理论依据。

TNF-α调节NF-κB/PXR炎症途径对肺癌细胞生物行为的影响及作用机制

目的分析TNF-α调节NF-κB/PXR炎症途径对肺癌细胞生物行为的影响及作用机制。方法将A549细胞分为对照组和干预组,对照组正常培养不做任何干预处理,干预组使用人TNF-α以10 ng/ml浓度共培养12 h;检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、细胞侵袭活性;并采用PCR及WB法检测细胞中NF-κB、PXR蛋白和mRNA表达水平。结果在TNF-α干预24 h、48 h和72 h时,干预组细胞检测的吸光度值明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);采用TNF-α干预24 h后干预组A549细胞的凋亡率明显低于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组细胞的S期比例明显高于对照组,而G_(2)+M期和G_(0)+G_(1)期细胞比例明显低于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组细胞侵袭数明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组NF-κB、PXR蛋白表达水平均明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组细胞NF-κB及PXR mRNA表达均明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05)。结论TNF-α可通过调控NF-κB/PXR炎症途径实现对肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭的调控。

GYS1通过激活NF-κB通路促进肝细胞癌进展

目的:探究糖原合成酶1(GYS1)在原发性肝细胞癌(HCC)进展中的作用。方法:基于GEPIA数据库分析GYS1在肿瘤与癌旁组织的表达差异。从天津市西青医院取20例HCC临床样本。采用RT-PCR、Western印迹及免疫组化验证GYS1基因在肿瘤与癌旁组织的表达差异。对于HCC细胞系,分别转染过表达GYS1质粒及siRNA,采用CCK8、EDU以及划痕实验验证过表达或敲除GYS1后HCC细胞增殖及迁移能力变化。采用Western印迹实验验证过表达或敲除GYS1后核因子(NF)-κB通路的变化。结果:与癌旁组织相比,HCC组织中GYS1表达显著上调(F=30.23,P<0.001);与正常肝细胞相比,肿瘤细胞系中GYS1明显高表达(F=287.35,P<0.001)。基于数据库分析表明,过表达GYS1的HCC患者预后较差(P<0.05)。过表达GYS1在体外促进HCC细胞增殖(F=58.67,P<0.01)及迁移(F=67.34,P<0.01);而敲除GYS1则抑制HCC细胞增殖(F=66.32,P<0.01)及迁移(F=79.24,P<0.01)。RT-PCR及Western印迹结果证实,过表达GYS1可激活NF-κB通路,而敲除GYS1可抑制GYS1通路。结论:HCC组织中GYS1表达量明显升高,并且过表达GYS1,可通过激活NF-κB通路促进HCC进展。

NF-κB信号通路、微生物群在胃癌发生机制中的最新研究进展

胃癌是威胁全球健康的主要问题,其发病机制复杂,尚无明确的相关报道。研究发现胃肠道中的大量微生物可调节人体的生理过程,如免疫反应、代谢平衡和体内平衡。越来越多的证据表明,微生物群的改变与胃癌的发生密切相关。细胞和动物模型的实验研究显示了几种细菌在胃癌中的功能作用和分子机制,包括幽门螺杆菌、梭杆菌、大肠杆菌、脆弱类杆菌等。转录因子NF-κB通过协调先天性免疫功能和适应性免疫功能在宿主对微生物感染的反应中起至关重要的作用。此外,NF-κB活性通过诱导慢性炎症、细胞转化和增殖与胃癌的发生和发展有关。因此,本文就以感染性细菌为主的胃肠道微生物群对NF-κB信号通路的调节作一简要综述。

β-卡波林生物碱Benzalharman和Kumujian C对炎性信号通路NF-κB及MAPK的调控作用机制

通过建立脂多糖激活的RAW 264.7细胞炎症反应模型,研究β-卡波林生物碱Benzalharman和Kumujian C的体外抗炎活性。采用Griess法、ELISA法和Western Blot法对其抗炎活性和抗炎分子机制进行研究,并使用分子对接法验证活性化合物和炎症靶标蛋白(iNOS和COX-2)之间的相互作用。研究结果表明,Benzalharman和Kumujian C能抑制NO、TNF-α、IL-6的过量产生,但对PGE 2的过量产生无抑制作用。同时这两个化合物选择性地下调炎性蛋白iNOS的高表达,对COX-2蛋白高表达无抑制作用,这与分子对接的结果一致。Benzalharman抑制了NF-κB信号通路中IκB-α的降解,但是Kumujian C对IκB-α的降解无抑制作用。两个化合物对MAPK通路中的JNK,ERK,p38蛋白磷酸化均无抑制作用。综上,Benzalharman阻断了NF-κB信号通路的激活,Kumujian C对NF-κB和MAPK通路均无阻断作用。

生物活性肽调节NF-κB信号通路的研究进展

核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是通过调节其靶基因的表达,在机体免疫应答、炎症与肿瘤的发生发展过程中发挥着重要功能,因此也被认为是调控免疫应答、预防和治疗肿瘤与炎症的理想靶点。生物活性肽具有许多的生理活性功能和独特的营养特性,可广泛地应用于保健食品和医药产品。本文首先概括NF-κB的组成、结构特点及其激活途径,从肽类调节NF-κB的机制出发,结合本实验室和国外学者最新的研究成果,对生物活性肽调节NF-κB相关研究进行系统的介绍,提出生物活性肽在一定程度上可以干预NF-κB信号通路,为生物活性肽作为相关疾病生物免疫治疗提供新的途径。

维生素B_(12)的生物合成研究

维生素B12广泛应用于医药、食品和畜牧业,主要由微生物发酵得到。脱氮假单胞菌(Pseudomonas denitrificans)和费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)是主要的生产菌种。与之相应,维生素B12存在好氧和厌氧2条生物合成途径,生物合成过程十分复杂,2条合成途径大体相同又各有特点。维生素B12发酵产量的提高有待于菌种的改良和发酵工艺的改进。了解维生素B12生物合成途径和代谢调控机制具有重要意义,可为育种工作提供理论基础。

大鼠脑挫伤后NF-κB表达的分子生物学研究

目的阐明不同程度及不同时间脑挫伤后NF-κB表达的变化。方法应用免疫组织化学染色、Westernblot和RT-PCR方法对48例不同程度实验性脑挫伤大鼠的脑组织进行了检验,同时以3例非脑挫伤和3例假手术大鼠的脑组织做对照。结果伤后1hNF-κB即有表达、24～48h达高峰,一周后停止表达。阳性细胞多集中于挫伤区及周围带皮质和脑实质内海马区;不同程度脑挫伤组之间于伤后各个时间段NF-κB表达无明显差异。结论本实验首次通过对不同程度脑损伤后NF-κB表达量的研究,找到其表达的时间性变化规律,对确定脑挫伤形成时间有意义,但不能作为判断脑挫伤程度的指标。

维生素B_(12)的生物合成、发酵生产与应用

维生素B12(VB12)是一种重要的动物和人类营养因子,广泛应用于饲料、食品和医药卫生领域。中国已成为全球VB12的主要产地,2007年产量为27t,占全球总产量的77%。VB12是目前已发现的最大、最复杂的维生素分子,化学合成极其困难,所有VB12产品均采用生物发酵制备其主体结构。VB12主要由古生菌和一些真细菌通过有氧或厌氧两种途径合成,工业上主要采用费式丙酸菌(Propionibacterium freudenrechii)和脱氮假单胞菌(Pseudomonas denitrificans)进行发酵生产。综述了VB12的基本性质,生物合成途径,以及发酵生产工艺,并对VB12的应用与市场前景作了分析。

依布硒啉衍生物对白三烯B_4生物合成抑制作用及其构效关系

目的：研究一系列依布硒啉衍生物对白三烯 Ｂ４ 生物合成的影响，并探讨其构效关系。方法：高效液相色谱法测定白三烯 Ｂ４ 。结果：依布硒啉的磺酰胺类似物以及 Ｎ芳香环取代的磺酰胺衍生物对白三烯 Ｂ４ 生物合成具有抑制作用，其 Ｉ Ｃ５ ０ 在１０ － ５ ～１０ － ６ ｍｏｌ· Ｌ－ １ 之间，并存在一定的构效关系。结论：磺酰胺基团上的酸性氢原子是关键因素，它的存在可以形成分子内氢键，从而使化合物具有活性。

NF-κB分子生物学特性及其在牙周炎等炎症性疾病中的作用

核转录因子-kappaB(NF-κB)是细胞中重要的调节因子,静息状态下与一组抑制蛋白ΙκB家族成员结合形成复合体,以无活性状态存在于细胞质中。当细胞受到外界刺激时,IκB磷酸化,使NF-κB暴露出核定位信号,进入细胞核结合DNA,调节基因的表达。本文对NF-κB家族、分子生物学特性及在炎症性疾病和牙周炎发生和治疗中分子机制进行探讨,为用NF-κB抑制剂治疗开辟新途径。

油菜叶绿素b减少突变体Cr3529叶绿素生物合成的研究

利用吸收光谱和荧光光谱法测定了油菜叶绿素b减少突变体Cr3529子叶叶绿素生物合成途径中几种主要前体物质的含量.结果显示:突变体子叶中叶绿素生物合成第一个限速步骤的前体物质δ-氨基乙酰丙酸(ALA)含量与野生型油菜大致相同,饲喂ALA后的突变体及野生型油菜子叶中ALA含量均显著增加,但二者无显著差异;胆色素原含量在突变体中也未降低,而尿卟啉原Ⅲ含量仅为野生型的一半,粪卟啉原Ⅲ、原卟啉Ⅸ、镁原卟啉Ⅸ和原植基叶绿素的含量都明显低于野生型.结果证明,Cr3529突变体中叶绿素生物合成受阻于由胆色素原形成尿卟啉原Ⅲ的步骤,其叶绿素合成缺陷的机制和前体物质的累积与其它叶绿素b减少突变体明显不同.

5-依维菌素B_(1a)酯的合成和生物活性

依维菌素B1a与羧酸在DMAP/DCC体系中直接酯化 ,得到 10个 5 IVB1a酯衍生物 ,产率 6 6 %～ 82 %;它们的化学结构得到IR ,1HNMR ,13 CNMR和MS谱的确证 .它们具有良好的杀虫、杀螨活性 .

麦角甾醇衍生物通过抑制NF-κB通路诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的探讨麦角甾醇衍生物(ED)对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其可能机制。方法采用MTT法测定ED对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响,流式细胞检测ED对HeLa细胞周期的影响,Hoechst 33258染色测定ED对HeLa细胞凋亡的影响,免疫荧光分析ED对HeLa细胞NF-κB p65复合物的细胞内定位的影响,Western blot检测ED对HeLa细胞NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。结果 ED对HeLa细胞的IC50值为(9.1±1.64)μg·m L^(-1),可使HeLa细胞周期阻滞于S期,诱导HeLa细胞凋亡,抑制HeLa细胞中NF-κB的活化和核转位,减少NF-κB依赖的Bcl-2、Survivin、COX-2和VEGF蛋白的表达。结论ED可能通过抑制NF-κB信号通路活化,减少Bcl-2、Survivin、COX-2和VEGF蛋白的表达,诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡。

5-阿维菌素B_(1a)酯的合成及生物活性

阿维菌素 B1 a(AVB1 a)与羧酸在 DMAP/DCC体系中直接酯化 ,得到 1 0个 5 -AVB1 a酯衍生物 ,产率5 0 %～ 79% ;其化学结构由 IR,1 H NMR,1 3C NMR和 MS谱确证 .生物活性测定结果表明 ,部分 5 -阿维菌素 B1 a酯衍生物具有良好的杀虫。

新的蒽醌类衍生物1-硝基-2-酰基蒽醌-苯丙氨酸通过抑制NF-κB/p65信号通路降低乳腺癌MCF-7细胞的迁移能力

肿瘤细胞的侵袭和转移与大多数癌症患者的死亡率密切相关。了解肿瘤细胞的迁移机制可为阻断肿瘤细胞的转移提供一个关键的策略。蒽醌衍生物具有一定的抗肿瘤作用,我们结合抗肿瘤药物的作用机制以及蒽醌类衍生物的构效关系,设计合成了一类新的酰胺蒽醌衍生物1-硝基-2-酰基蒽醌-苯丙氨酸(简称C7),发现其具有很好的抗肿瘤活性。为了探究蒽醌类衍生物C7对人乳腺癌MCF-7细胞迁移的作用及其机制,本文首先采用MTT比色法检测蒽醌类衍生物C7对人乳腺癌细胞MCF-7生长活力的影响,结果证明较高浓度(60~100μg/m L)的蒽醌类衍生物C7对乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有明显的抑制作用。其次,采用细胞划痕实验检测C7对MCF-7细胞迁移的影响,发现较低浓度(20~40μg/m L)的蒽醌类衍生物C7可以显著降低MCF-7细胞的迁移率。为进一步探究C7抑制MCF-7细胞迁移的分子机制,通过免疫荧光技术检测NF-κB/p65蛋白的核转位情况;同时利用qRT-PCR及Western印迹实验检测C7对MCF-7细胞中NF-κB/p65通路及迁移相关基因和蛋白质表达的影响。结果表明C7可以下调细胞质中IκBα的磷酸化,降低NF-κB/p65蛋白的核转位,减小MMP-2和MMP-9蛋白的表达。因此,C7可能是通过抑制NF-κB/p65信号通路的活化,抑制MMP-2和MMP-9蛋白的表达,进而抑制MCF-7细胞的迁移。

NF-κB家族特征及其调控途径和生物学功能

NF-kB(nuclear factor-kB)广泛存在于机体细胞中,与细胞对外界刺激的应答、细胞生长、分化、发育、凋亡、粘附及炎症反应密切相关,是一类重要的转录调节因子.本文结合近年来的研究进展,对NF-rkB家族成员、NF-kB活化及调控途径,以及NF-kB生物学功能作一综述.

短链脂肪酸对阿扎霉素B生物合成的调节

研究了短链脂肪酸和长链脂肪酸对吸水链霉菌NND-52-C菌株阿扎霉素B生物合成的影响。结果表明,短链脂肪酸普遍具有促进阿扎霉素B的合成作用,而长链脂肪酸的作用则相反。在发酵至48h,添加0.1%丙酸钠和0.2%乙酸钠,阿扎霉素B的产量分别达到2120mg/L和1861mg/L,比对照提高了58.8%和39.4%。进一步研究表明,丙酸盐可通过诱导丙酸激酶的表达,从而大幅度地提高阿扎霉素B的产量。

磷酸盐对阿扎霉素B生物合成的调节

磷酸钙不仅可以促进阿扎霉素B产生菌的生长,而且对阿扎霉素B的生物合成具有一定的促进作用。在发酵培养基中添加1mmol/L磷酸钙可使阿扎霉素B发酵效价最高达1892mg/L,比对照提高26%;此外添加2mmol/L磷酸钙能够部分解除氨离子对阿扎霉素B生物合成的抑制,解除率为20%。