银杏素调节NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号通路对高糖诱导肾小球内皮细胞焦亡的影响

目的探讨银杏素调节核转录因子кB/Nod样受体蛋白3/半胱天冬酶-1(NF-κB/NLRP3/Caspase-1)信号通路对高糖诱导肾小球内皮细胞焦亡的影响。方法将肾小球内皮细胞(HRGECs)作为研究对象,将HRGECs细胞分为正常组(正常5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、银杏素低剂量组(30 mmol/L葡萄糖+5μmol/L银杏素)、银杏素中剂量组(30 mmol/L葡萄糖+10μmol/L银杏素)、银杏素高剂量组(30 mmol/L葡萄糖+20μmol/L银杏素)、BAY组[(30 mmol/L葡萄糖+20μmol/L银杏素+2.5μmol/L NF-κB的特异性抑制剂BAY 11-7085(BAY))]、MCC950组(30 mmol/L葡萄糖+20μmol/L银杏素+10μmol/L NLRP3抑制剂MCC950)、VX-765组(30 mmol/L葡萄糖+20μmol/L银杏素+20μmol/L Caspase-1抑制剂VX-765),各组细胞加入相应试剂后共培养24 h;MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞焦亡情况;试剂盒法测定细胞上清IL-1β、IL-18、LDH水平;qRT-PCR法和Western blot法检测细胞NF-κB、NLRP3、Caspase-1、GSDMD的表达。结果与正常组比较,高糖组细胞存活率明显下降(P<0.05),PI+Caspase-1阳性细胞比例、细胞上清IL-1β、IL-18、LDH水平以及细胞NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达明显升高(P<0.05);与高糖组比较,银杏素低、中、高剂量组细胞存活率明显升高(P<0.05),PI+Caspase-1阳性细胞比例、细胞上清IL-1β、IL-18、LDH水平以及细胞NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达明显降低(P<0.05);分别使用NF-κB、NLRP3、Caspase-1特异性抑制剂BAY、MCC950、VX-765进一步升高细胞存活率,降低细胞PI+Caspase-1阳性细胞比例、细胞上清IL-1β、IL-18、LDH水平以及细胞NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达。结论银杏素可通过抑制NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号通路抑制高糖诱导的肾小球内皮细胞焦亡。

基于转录组学与加权基因共表达网络分析探讨降脂轻身胶囊介导NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴改善高脂血症小鼠的作用及机制

目的基于转录组学与加权基因共表达网络分析(WGCNA)探讨降脂轻身胶囊介导NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴改善高脂血症的作用机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、瑞舒伐他汀组(1.3 mg·kg^(-1))及降脂轻身胶囊低、高剂量组(0.6、2.4 g·kg^(-1)),每组8只。除对照组给予普通饲料外,其余各组给予高脂饲料维喂养,以复制高脂血症模型。各给药组小鼠每日按上述剂量灌胃给药,每日1次,连续干预10周。称取小鼠肝脏质量并计算肝脏指数、Lee’s指数、肝脏胫骨比值;采用HE染色、油红O染色法观察肝脏组织病理学变化;ELISA法检测血清生化指标:总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β;采用博奥晶典小鼠真核转录组芯片V4对肝脏组织进行转录组测序,并进行芯片表达信息与血脂水平性状信息的加权基因共表达网络分析;分析得到降脂轻身胶囊干预高脂血症的核心基因群(潜在作用靶点),并进行蛋白质互作(PPI)网络分析及GO功能、KEGG通路富集分析;采用RT-qPCR法检测肝脏组织NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1βmRNA表达水平;免疫荧光法检测肝组织中NF-κB、NLRP3、Caspase-1蛋白表达。结果与模型组比较,降脂轻身胶囊能明显降低高脂血症小鼠的体质量、肝湿质量、肝指数、Lee’s指数、肝脏胫骨比值(P<0.05);有效减轻高脂血症小鼠肝组织炎性浸润及脂肪变性,明显减少脂质沉积面积(P<0.05);明显降低血清TG、TC、LDL-C、ALT、AST、IL-18、IL-1β水平(P<0.05);明显下调肝组织中NF-κB、NLRP3、Caspase-1蛋白及mRNA表达(P<0.05),降低肝组织中IL-18、IL-1βmRNA表达水平(P<0.05)。转录组学与加权基因共表达网络分析显示,降脂轻身胶囊对血脂的调控作用与炎症通路密切相关。结论降脂轻身胶囊能够调节NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴抑制高脂血症小鼠肝组织炎症反应,进而改善高脂血症小鼠的血脂水平。

基于NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴探究白藜芦醇对痛风性肾病模型大鼠肾脏的保护作用机制

目的基于NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号轴探究白藜芦醇对痛风性肾病模型大鼠的肾脏的保护作用机制。方法将60只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、秋水仙碱(阳性对照,0.03mg·kg^(-1))组和白藜芦醇高、中、低剂量(1000、500、250 mg·kg^(-1))组,连续7 d ig给药,给药过程中,除对照组外,其余各组使用氧嗪酸钾合并尿酸钠的方法制备大鼠痛风性肾病模型。ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、尿酸、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平,肾脏组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、环氧合酶-2(COX-2)水平;HE、Masson染色观察肾脏组织细胞形态变化;PAS染色检测大鼠肾组织中肾小球损伤情况,TUNEL观察肾脏组织细胞DNA损伤情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫组化法检测肾脏组织中核因子-κB(NF-κB)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)mRNA以及蛋白的表达量,最后采用分子对接研究白藜芦醇与NF-κB、NLRP3、Caspase-1的结合情况。结果与模型组比较,秋水仙碱组及白藜芦醇各给药组大鼠血清中IL-1β、IL-18、SCr、BUN及肾脏TNF-α、MCP-1、COX-2水平显著降低(P<0.01),白藜芦醇高剂量组尿酸、中和高剂量组BUN显著降低(P<0.05);白藜芦醇各剂量组不同程度降低肾组织中胶原纤维化面积、肾小球阳性率以及肾组织细胞TUNEL染色阳性率,减缓病理损伤情况,其中高剂量组作用最显著(P<0.05);qRT-PCR、免疫组化结果表明,白藜芦醇各给药组均抑制肾脏组织细胞中NF-κB、NLRP3、Caspase-1mRNA和蛋白的表达,其中高剂量组作用最显著(P<0.05);分子对接结果进一步表明,白藜芦醇与NF-κB、NLRP3、Caspase-1结合状态良好,即白藜芦醇对NF-κB、NLRP3、Caspase-1具有良好的靶向调控作用。结论白藜芦醇对痛风性肾病模型大鼠的肾脏保护作用可能为抑制NF-κB信号通路,进而抑制NLRP3的激活从而阻断Caspase-1招募IL-1β、IL-18,降低其分泌,遏制肾脏细胞程序性死亡的初始阶段细胞焦亡的发生,从而逆转痛风性肾病大鼠肾组织的炎症损伤。

前列消汤干预NLRP3炎性小体调控慢性非细菌性前列腺炎Caspase-1/IL-1β/NF-κB p65轴机制研究

目的探讨前列消汤通过干预NLRP3炎性小体调控慢性非细菌性前列腺炎Caspase-1/IL-1β/NF-κB p65轴机制研究。方法将120只雄性SPF级C57BL/6小鼠按随机数表法分为空白组、模型组、阳性对照组(MCC950)、前列消汤高/中/低剂量组;除空白组外,其它组采用复合因素造模法制备EAP小鼠模型,以湿热证候积分、前列腺湿重指数、HE染色评估模型;免疫荧光检测各组小鼠前列腺组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达水平;Western Blot检测各组小鼠前列腺组织NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、NF-κB p65、NF-κB p65磷酸化蛋白表达水平。结果模型组前列腺湿热证候积分(P<0.01)、前列腺湿重指数较空白组升高(P<0.05);与空白组比较,模型组腺体及间质见大量炎症细胞浸润、腺腔结构紊乱、纤维化增生,各药物组能不同程度改善模型小鼠前列腺的炎性浸润程度,以MCC950组及前列消中、高剂量组最为显著(P<0.01);免疫荧光显示:与空白组比较,模型组小鼠前列腺NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达明显增强(P<0.01),与模型组比较,MCC950组、前列消汤高/中/低剂量组均能不同程度减弱模型小鼠前列腺NLRP3、Caspase-1、IL-1β(P<0.05),MCC950组与前列消中/高剂量组比较,差异不具有统计学意义;Western Blot显示:与空白组比较,模型组小鼠前列腺NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、NF-κB p65、NF-κB p65磷酸化蛋白表达明显升高(P<0.01),与模型组比较,MCC950组能不同程度下调模型小鼠前列腺NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、NF-κB p65、NF-κB p65磷酸化蛋白表达(P<0.01),前列消汤各剂量组下调以中/高剂量组较为显著(P<0.01)。结论前列消汤可通过干预NLRP3炎症小体介导的Caspase-1/IL-1β/NF-κB p65炎症轴发挥抑制慢性非细菌性前列腺炎炎症反应的作用。

孕激素对白假丝酵母菌刺激的小鼠腹腔巨噬细胞NLRP3炎性体表达的影响

目的探讨孕激素对白假丝酵母菌刺激的小鼠腹腔巨噬细胞NLRP3炎性体表达的影响。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,将其分为5组:空白对照组、白假丝酵母菌组、白假丝酵母菌+10^-9mol/L孕酮组、白假丝酵母菌+10^-8mol/L孕酮组、白假丝酵母菌+10^-7mol/L孕酮组。利用实时荧光定量PCR检测细胞内NLRP3基因表达情况,利用Western blot检测细胞内NLRP3、Caspase-1 p20和NF-κB p65的表达变化,利用酶联免疫吸附试验法检测细胞培养上清中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的含量。结果白假丝酵母菌刺激小鼠腹腔巨噬细胞后引起细胞内NLRP3和Caspase-1 p20蛋白表达水平升高,NF-κB活性增强,细胞培养上清中的IL-1β和IL-18含量明显升高,白假丝酵母菌组和空白对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01);加入孕酮预处理后,随着孕酮作用浓度的增高,细胞内NLRP3、Caspase-1 p20蛋白表达水平和NF-κB活性明显降低,细胞培养上清中IL-1β和IL-18含量亦明显降低,和白假丝酵母菌组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论孕酮可抑制白假丝酵母菌刺激引起的巨噬细胞内NLRP3表达及Caspase-1活化和IL-1β、IL-18的分泌,且这种作用可能是通过抑制NF-κB活性实现的。

和解聚散方对糖尿病肾病大鼠肾脏NF-κB/NLRP3/Caspase-1细胞焦亡通路的影响

目的探讨和解聚散方对糖尿病肾病(DN)大鼠细胞焦亡的影响,基于NF-κB/核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)/Caspase-1信号通路探讨其作用机制。方法将60只SD大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、氯沙坦钾组及和解聚散方低、中、高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组建立DN大鼠模型。和解聚散方低、中、高剂量组分别灌胃0.5、1.0、2.0 g/ml和解聚散方水煎液;氯沙坦钾组灌胃20 mg/kg氯沙坦钾;空白组和模型组灌胃等体积的生理盐水。1次/d,连续给药28 d。测定大鼠血清SCr、BUN水平及尿液24 h尿蛋白定量,采用HE染色观察肾组织病理改变,采用Western blot法检测肾组织P65、NLRP3、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)蛋白表达。结果与模型组比较,和解聚散方高剂量组和氯沙坦钾组大鼠血清SCr、BUN及尿液中24 h尿蛋白定量降低(P<0.01),和解聚散方各剂量组和氯沙坦钾组大鼠肾组织中P65、NLRP3、Caspase-1和GSDMD表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论和解聚散方可能通过抑制NF-κB/NLRP3/Caspase-1通路的激活,影响细胞焦亡,减轻肾功能损伤及组织病理改变,从而达到治疗DN的作用。

益肾蠲痹丸干预相关通路介导细胞焦亡对膝骨性关节炎大鼠的影响

目的探讨益肾蠲痹丸干预NLRP3/NF-κB/Caspase-1信号通路对膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠的保护作用,并分析其对细胞焦亡相关蛋白的影响。方法随机将90只SPF级SD大鼠分为空白组、模型组、阳性对照组和益肾蠲痹丸低、中、高剂量组,每组15只。空白组不做处理,其他组制备KOA大鼠模型后进行干预治疗。比较6组大鼠干预前后膝关节直径及足趾容积情况;ELISA法检测血清中IL-1β、IL-18及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量变化;HE染色观察关节软骨组织病理学改变情况;TUNEL法检测细胞凋亡情况;免疫组化法分析Caspase-1相关蛋白表达;Western blot及qRT-PCR法检测NLRP3/NF-κB/Caspase-1相关蛋白及mRNA表达水平。结果KOA造模后,与空白组比较,模型组大鼠膝关节直径与足趾容积明显增大,血清中IL-1β、IL-18及VEGF含量明显升高,软骨组织细胞排列紊乱,出现炎性浸润,细胞凋亡程度增高,NLRP3/NF-κB/Caspase-1相关蛋白及mRNA表达水平明显升高(P均<0.05);与模型组比较,阳性对照组及益肾蠲痹丸治疗组大鼠膝关节直径与足趾容积明显减轻,血清中IL-1β、IL-18及VEGF含量下降,软骨组织细胞炎性浸润改善,细胞凋亡程度减轻,NLRP3/NF-κB/Caspase-1相关蛋白及mRNA表达水平明显下降(P均<0.05),其中益肾蠲痹丸高剂量组显著优于益肾蠲痹丸低剂量组(P<0.01)。结论益肾蠲痹丸能够改善KOA大鼠关节软骨组织损伤,降低炎症因子表达和细胞凋亡程度,其机制可能与调控NLRP3/NF-κB/Caspase-1信号通路减轻细胞焦亡有关。

独活寄生汤对肩周炎模型兔的治疗作用及可能机制

目的探究独活寄生汤对肩周炎模型兔的治疗作用及作用机制。方法40只健康雄性新西兰兔随机挑选10只作为空白组(Control组),其余30只通过持续机械劳损加冰敷的方式制造肩周炎家兔模型,将造模成功的30只家兔再随机分为模型组(Model组)、独活寄生汤低剂量组(DHJSD-L组)、独活寄生汤高剂量组(DHJSD-H组),每组10只。ELISA检测家兔血清炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α及疼痛有关因子5-HT、PGE_(2)的表达情况;免疫荧光法检测NF-κB蛋白表达;Western blot检测家兔肩关节滑膜组织NF-κB、GSDMD-C、GSDMD-N、NLRP3、ASC、pro-Caspase-1及pro-IL-1β蛋白表达水平;qRT-PCR检测家兔肩关节滑膜组织NLRP3、ASC、Caspase-1与IL-1βmRNA表达情况。结果与模型组相比,独活寄生汤可明显抑制肩周炎模型兔IL-1β、IL-18、TNF-α、5-HT及PGE_(2)的表达;显著减弱NF-κB荧光强度;下调肩周炎模型兔肩关节滑膜组织中NF-κB、GSDMD-C、GSDMD-N、NLRP3、ASC、pro-Caspase-1及pro-IL-1β蛋白的表达,下调肩关节滑膜组织NLRP3、ASC、Caspase-1与IL-1β的mRNA表达水平。结论独活寄生汤可改善肩周炎的症状并缓解疼痛,其治疗作用可能是通过调控NF-κB/NLRP3/Caspase-1通路来实现的。