机械应力影响鼠骨髓基质细胞骨保护素/NF-κB受体活化剂配体mRNA表达变化

骨保护素/NF-κB受体活化剂配体/NF-κB受体活化剂(OPG/RANKL/RANK)系统对破骨细胞生成、功能起着关键的作用,它的发现是骨生理代谢研究领域的重大进展。为研究生理性机械应力对鼠骨髓基质细胞OPG/RANKLmRNA表达变化的影响,进一步探讨机械应力对破骨细胞的影响机制,通过对鼠骨髓基质细胞施加不同时段的生理性的机械应力,并以RT-PCR半定量的方法检测OPG/RANKLmRNA表达变化趋势。结果显示随着加力时间的延长(6h后)RANKLmRNA表达减少34.4%,而OPGmRNA(9h后)表达增加73%,提示生理性应力能显著影响鼠骨髓基质细胞OPG/RANKLmRNA表达变化,从而在一定程度上阐明了生理性应力延缓骨质吸收的内在机制。

2型糖尿病患者骨保护素和NF-κB受体活化因子配体与左室舒张功能障碍的相关研究

【目的】探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清骨保护素(OPG)和可溶性NF-κB受体活化因子配体(sRANKL)水平与可能左室舒张功能障碍(LADD)的相关性。【方法】本研究纳入68例T2DM患者和37例健康对照者,利用ELISA方法测定血清OPG和sRANKL水平,同时利用心脏彩超测定T2DM患者左室舒张功能,E/A<1定义为LADD。进一步将T2DM患者分为E/A≥1和E/A<1两个亚组。采用Spearman相关性分析、logistics回归分析和ROC曲线评估血清OPG和sRANKL与T2DM患者可能LADD的相关性。【结果】与健康对照者相比,T2DM患者血清OPG水平明显升高,差异有统计意义(P<0.01),而sRANKL水平降低,但无统计学意义(P=0.032)。亚组分析则显示E/A<1组的OPG水平较E/A≥1组升高(P<0.01),而sRANKL降低(P<0.01)。Spearman相关性分析显示,血清OPG水平与E/A比值呈负相关,而sRANKL则与E/A比值呈正相关。单因素logistics回归分析显示,血清OPG水平[OR(95%CI)=1.068(1.031,1.106),P<0.001]和sRANKL水平[OR(95%CI)=0.976(0.959,0.992),P=0.003]与T2DM患者可能LVDD显著相关。ROC曲线分析显示,联合OPG与sRANKL诊断糖尿病患者可能LADD的敏感性为78.13%,特异性为88.3%(曲线下面积:0.857;95%CI=(0.768,0.946);P<0.001)。【结论】T2DM患者血清中升高的OPG和降低的sRANKL水平提示其可能与LADD相关。

核因子κB受体活化剂配体对乳牙根吸收的影响

核因子κB受体活化剂配体(RANKL)是新近发现的破骨细胞活化因子,它与核因子κB受体活化剂(RANK)、骨保护素(OPG)组成一个具有调节破骨细胞增殖、分化、融合、激活和凋亡的相关细胞因子系统。与破骨细胞生物学行为相似的破牙质细胞调节乳牙根生理性吸收,表达于该过程中的RANKL对乳牙根吸收起到一定的促进作用,且对乳恒牙替换具有调控作用。本文就RANKL对乳牙根吸收所起的作用作一综述。

核因子κB受体活化剂研究进展

核因子κB受体活化剂 ,是肿瘤坏死因子受体超家族成员 ,是骨保护素配体在破骨细胞上的受体 ,骨保护素配体通过与核因子κB受体活化剂结合 ,将细胞分化等信号传入破骨细胞前体内 ,促进其分化、融合 ,并促进成熟破骨细胞的激活过程。

miR-144靶向NF-κB受体活化因子配体蛋白调控树突状细胞分泌细胞因子

目的探讨miRNA-144对树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟过程中细胞因子分泌的影响及机制。方法通过对本实验室前期工作中获得的DCs成熟过程中miRNA芯片结果进行数据挖掘,筛选得到DCs成熟过程中显著下调的miRNA(miR)-144,并使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激体外培养的DCs进行验证;检测miR-144转染DCs后相关细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-23)的改变及信号通路(NF-κB、MAPK)活化情况;使用TargetScan预测miR-144的作用靶点并通过双荧光报告系统验证;进一步构建靶蛋白过表达DC2.4细胞系并检测miR-144拟似物转染该细胞系后细胞因子TNF-αmRNA的分泌情况。结果体外培养的DCs经LPS刺激成熟后miR-144的表达下调(P<0.01)。miR-144拟似物转染DCs后,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-23mRNA表达均出现下调(P<0.05,P<0.01),NF-κB磷酸化水平下降。通过信息学分析发现miR-144的潜在靶点为NF-κB受体活化因子配体蛋白基因(RANKL)并通过双荧光报告系统证明了该结论。在RANKL过表达DC2.4细胞系中转染miR-144拟似物后,TNF-αmRNA的表达不受影响。结论 miR-144靶向RANKL调控DCs细胞因子分泌。

破骨样细胞中骨保护素和NF-κB配体受体的表达及其意义

目的探讨破骨样细胞中骨保护素(OPG)和NF-κB配体受体(RANKL)表达情况。方法单独培养骨髓单核细胞前体,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和维生素D诱导其转化为破骨样细胞,在0、5、10、15 d用光镜观察和TRAP染色(抗酒石酸染色)评估破骨样细胞的转化程度,用RT-PCR检测OPG和RANKL的表达情况;然后构建主动脉中膜平滑肌细胞(SMC)与骨髓单核细胞前体共培养的模型,用维生素C和β-磷酸甘油诱导SMC转化为成骨样细胞,并在0、5、10、15 d用同样方法再次检测共培养中破骨样细胞转化的情况,以及两种细胞中OPG和RANKL的表达情况。结果不管是单独培养、还是共培养,破骨样细胞中始终没有OPG和RANKL的表达。结论破骨样细胞的转化可能主要受成骨样细胞分泌的OPG和RANKL调控,本身并没有分泌OPG和RANKL进行自身调节的机制存在。

间歇力引起人体牙周膜细胞核因子κB受体活化因子配体高表达

正畸治疗中，间歇力因提供了牙周组织重建的调整时间而有利于牙齿的移动。为了明确间断力的作用机制，本研究观察了牙周膜细胞在间歇力和持续力作用下核因子κB受体活化因子配体（receptor activatator of NF-κB ligand，RANKD、骨保护因子和IL-1β mRNA的表达，并通过IL-1β信号传导途径研究了压力大小与RANKL表达之间的联系。

种植体周围炎中IL-1β、TNF-α、NF-κB信号通路研究进展

目前,患者普遍接受种植义齿修复口内缺失牙。种植义齿修复后出现的种植体周围炎,是导致种植修复失败的主要原因。大部分理论支持种植体周围炎诱导白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等炎症性细胞因子分泌增多,同时又上调RANKL基因表达,下调OPG基因表达,促使破骨细胞活性增强,间接促进骨吸收,使骨代谢趋向负平衡。为了更深入地了解种植体周围炎与核转录因子κB(nuclear transcription factor kappaB,NF-κB)信号通路之间的关系,本文综述了国内外关于种植体周围炎中NF-κB信号通路的调控作用研究报道,旨在探讨种植体周围炎对骨代谢和NF-κB信号通路的调节机制以及炎症刺激下免疫细胞因子对NF-κB信号通路的影响,为种植体周围炎的研究及预防提供理论基础。

补肾通络方抑制NF-κB/RANK/RANKL通路减轻胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠骨破坏

目的探讨补肾通络方(BSTL)对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠模型骨破坏的改善作用以及对核因子κB/核因子κB受体激活蛋白/核因子κB受体激活蛋白配体(NF-κB/RANK/RANKL)信号通路的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、CIA模型组、1 mg/kg甲氨喋呤(MTX)处理组、(0.5、2)g/kgBSTL处理组,每组10只。除空白对照组外,其余大鼠采用含有卡介苗的完全Freund佐剂和牛Ⅱ型胶原蛋白(Col2)混合乳液免疫刺激,建立CIA模型。建模15 d后(第0天)根据关节炎指数(AI)评价造模是否成功。自第0天起,连续给予MTX或BSTL处理28 d,免疫组织化学染色法检测滑膜组织NF-κB p65的表达,ELISA检测大鼠血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、抗总Col2抗体及亚型(Col2-IgG、Col2-IgG1、Col2-IgG2a)水平,Western blot法检测滑膜组织RANKL、RANK、护骨因子(OPG)蛋白表达。结果与CIA模型组相比,2 g/kg BSTL处理28 d的大鼠足容积、AI值降低,血清IL-1β、IL-18、TNF-α、Col2-IgG、Col2-IgG2a以及RANK和RANKL水平均降低,OPG水平升高;大鼠滑膜组织中NF-κB p65、RANK和RANKL蛋白表达均降低,OPG蛋白表达增加。结论BSTL可通过抑制全身炎症反应,降低滑膜组织中NF-κB p65、RANK、RANKL蛋白的表达,上调OPG蛋白表达,缓解CIA模型大鼠关节炎症和肿胀。

NF-κB受体活化因子配体在假体无菌性松动患者外周血中的表达

目的通过与正常髋关节患者比较,探讨人工全髋关节置换术(total hip arthroplasty,THA)后假体无菌性松动患者外周血中NF-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的表达变化,分析其与假体无菌性松动间的关系。方法以2008年1月-2013年1月58例THA术后假体无菌性松动患者作为试验组,63例股骨颈骨折患者作为对照组。两组患者年龄及性别比较,差异无统计学意义(P>0.05)。取两组患者清晨空腹抗凝外周血,采用荧光定量PCR、Western blot及ELISA法检测RANKL基因、蛋白表达水平及其浓度。结果试验组RANKL基因、蛋白相对表达量及其浓度分别为18.30±1.09、0.856±0.254、(3.553 5±0.129 7)ng/mL,显著高于对照组的1.00±0.05、0.404±0.102、(1.912 3±0.126 2)ng/mL,比较差异均有统计学意义(t=125.390,P=0.000;t=13.032,P=0.000;t=18.124,P=0.000)。结论外周血中RANKL可能是THA术后假体无菌性松动的预测因子。

肿瘤免疫中的NF-κB受体激活剂及其配体

NF-κB受体激活剂配体(RANKL)/NF-κB受体激活剂(RANK)最早在免疫系统中发现,是一种多功能细胞因子,在肿瘤发生、进展尤其是骨转移中发挥重要作用。原发恶性肿瘤一旦发生骨转移则预后极差。地诺单抗是目前应用最为广泛的RANKL抑制剂,更多研究者试图以RANKL为靶点,寻求新型抗RANKL药物的同时实行RANKL特异性精准成像,推动原发肿瘤的早期诊疗进程。

低氧对大鼠骨髓细胞OPG,RANKL和TNF-α基因表达的影响

目的:探讨低氧对大鼠骨髓细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、护骨素(OPG)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的影响.方法:健康3mo龄雌性SD大鼠,处死后取其骨髓细胞进行缺氧培养,分为低氧1d组(A)、低氧3d组(B)、低氧7d组(C)、低氧14d组(D)和正常对照组(E).分别于培养后1,3,7,14d提取培养细胞总RNA,RT-PCR半定量检测各组OPG,RANKL和TNF-α基因表达变化.结果:低氧组骨髓细胞RANKL和TNF-α的mRNA表达水平与对照组比较显著升高.B,C组上述改变最为显著.OPG的mRNA表达水平与对照组比较显著降低.B,C组改变最为明显.结论:低氧可刺激大鼠骨髓细胞RANKL和TNF-α基因表达,而抑制OPG基因表达.

NF-κB受体激活因子配体抗体防治人工关节无菌性松动的实验研究

目的人工关节无菌性松动与破骨细胞激活后假体周围骨溶解有关,而NF-κB受体激活因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)/NF-κB受体激活因子(receptor activator of NF-κB,RANK)信号通路是激活破骨细胞的主要途径,通过建立小鼠气囊植骨模型模拟人工关节无菌性松动环境,观察RANKL抗体抑制炎性反应、减轻溶骨反应的作用。方法取8～10周龄雌性BALB/c小鼠60只(体重18～20 g),取其中20只小鼠颅骨制备骨片,作为气囊植骨供体;剩余40只小鼠随机分为阴性对照组(A组)、阳性对照组(B组)、RANKL抗体低剂量组(C组)和RANKL抗体高剂量组(D组),每组10只。于各组小鼠背部制备2 cm×2 cm大小的气囊后植入1片骨片;于植骨后1 d,A组气囊内注射0.5 mL PBS液;B、C、D组注射0.5 mL钛颗粒悬液。钛颗粒悬液注射前2 d,C、D组气囊内分别注射0.1 mL浓度为50μg/mL和500μg/mL的RANKL抗体,每天1次,连续2 d;A、B组注射0.1 mL PBS液。于植骨后14 d处死全部小鼠,取出植入颅骨骨片和周围囊壁组织,进行大体及组织学观察,并行颅骨骨溶解、骨胶原含量及破骨细胞含量分析。结果各组小鼠均存活至实验完成,切口愈合良好。大体观察见A、C、D组小鼠囊壁炎性反应较轻,偶见渗出和新生血管增生;B组炎性反应严重,见渗出以及新生血管增生。组织学观察见A、C、D组小鼠囊壁炎性细胞浸润及增厚不明显,骨胶原丢失量和破骨细胞含量少;B组大量炎性细胞浸润,囊壁增厚,骨胶原丢失量和破骨细胞含量多。B组炎性细胞数、囊壁厚度、骨胶原丢失量以及破骨细胞含量与A、C、D组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 RANKL抗体可阻断小鼠气囊植骨模型的炎症信号传导通路,有效抑制磨损颗粒所致骨溶解。

他汀的抑动脉钙化作用及对骨保护素/NF-κB配体受体的影响

目的:探讨他汀类药物对动脉中膜钙化的抑制作用及其对骨保护素(OPG)/NF-κB配体的受体(RANKL)的影响。方法:构建大鼠的主动脉中膜平滑肌细胞(SMC)的钙化模型,随机分为钙化组、他汀组和对照组。钙化组使用β-磷酸甘油、维生素C对SMC来进行钙化诱导;他汀组在上述基础上加入阿托伐他汀。用Von Kossa染色,钙离子含量测定,碱性磷酸酶(ALP)活性检测,骨钙素的Western Blot检测来判定细胞钙化的程度,用实时定量PCR检测细胞钙化过程中伴随的OPG和RANKL的表达情况。结果:加入他汀类药物后使得细胞钙化的程度得到减轻,同时细胞表达的OPG/RANKL比值也得到明显上升(均P<0.05)。结论:他汀类药物具有抑制动脉钙化的作用,其机制可能与提高OPG/RANKL的比值有关。

桂枝芍药知母汤对免疫性关节炎大鼠TNF-α与RANKL表达的影响

目的:观察桂枝芍药知母汤对免疫性关节炎大鼠血清中TNF-α与关节滑膜组织RANKL表达的影响,并初步探讨其治疗机制。方法:以弗氏完全佐剂诱导产生免疫性关节炎模型,用不同剂量桂枝芍药知母汤(GSZ汤20.6 g/kg、10.3 g/kg)给模型动物灌胃用药,观察用药后动物血清TNF-α水平与致炎对侧膝关节滑膜组织RANKL表达。结果:桂枝芍药知母汤用药4周后,可明显增加模型大鼠体重增长速度,减轻关节肿胀程度(P<0.05 orP<0.01);使模型大鼠血清TNF-α水平降低(P<0.01)以及滑膜组织RANKL表达下降(P<0.01),本实验条件下,GSZ汤20.6g/kg剂量时的疗效与MTX相当。结论:桂枝芍药知母汤对免疫性关节炎大鼠有治疗作用,其机制可能与抑制TNF-α分泌,降低RANKL表达有关。

NF-κB受体激活因子配体在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性

目的在大肠杆菌中表达并纯化NF-κB受体激活因子配体(Receptor activator of NF-κB ligand,RANKL),并检测其生物学活性。方法 PCR扩增RANKL基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-RANKL,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析目的蛋白的表达和表达形式。表达产物经镍离子柱亲和层析、阴离子交换层析及阳离子交换层析进行纯化,纯化产物经SDS-PAGE分析纯度,Western blot检测其反应原性,BCA试剂盒测定蛋白浓度,并经MTT法及RAW264.7细胞分化试验测定其生物学活性。结果重组表达质粒pET-28a-RANKL经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组RANKL蛋白相对分子质量约为20 000,部分以包涵体形式存在;经纯化后纯度可达98.8%,可与相应抗体反应形成特异条带,蛋白浓度为56.72μg/ml,体外活性试验显示,RANKL具有良好的生物学活性。结论成功原核表达了RANKL,纯化的重组RANKL具有生物学活性,为骨代谢调控机制的研究及相关药物的开发提供了材料。

大鼠主动脉钙化过程中骨保护素/NF-κB配体的受体变化及意义

目的:研究大鼠主动脉钙化过程中骨保护素(OPG)/NF-κB配体的受体(RANKL)变化及意义。方法:60只SD大鼠随机分为钙化组、他汀组和对照组,每组再分早、晚期两个亚组。钙化组给予华法林灌胃,他汀组给予华法林和阿托伐他汀灌胃。早期亚组在第17天、晚期亚组在第34天取大鼠主动脉,用Von Kossa染色,以碱性磷酸酶(ALP)活性检测与骨钙素Western Blot检测来判定钙化情况,用实时定量PCR检测OPG和RANKL的表达情况。结果:对照组无论早晚期都有大量的OPG表达,但没有RANKL表达。钙化组和他汀组早期OPG表达上升,晚期下降,而RANKL表达在钙化过程中一直呈升高趋势;对照组、他汀组、钙化组随着钙化程度的加重,OPG/RANKL比值呈逐步下降趋势(均P<0.05);同一组中,晚期亚组随着钙化的加重,OPG/RANKL比值也较早期明显下降(均P<0.05)。结论:OPG/RANKL的比值与主动脉钙化程度呈负相关,且阿托伐他汀具有抑制钙化的作用。

NF-κB受体激活蛋白配体抗体抑制T细胞介导的牙周骨吸收

目的通过牙周病动物模型，评价NF-κB受体激活蛋白配体（receptor activator of NF-κB ligand，RANKL）抗体对T细胞诱导的牙周骨吸收的作用。方法经鼠尾静脉回输体外分离、纯化、扩增的T淋巴细胞，牙龈局部微量注射T细胞特异性抗原，形成牙周病动物模型，实验前1d及实验第1、3d，在牙龈同样部位注射不同浓度RANKLF（ab’）2抗体片段进行干预。酶联免疫吸附测定法检测血清中鼠抗兔IgG抗体水平及牙龈组织中可溶性RANKL（soluble RANKL，sRANKL）的表达水平；显微镜下测量上颌磨牙牙槽骨吸收；抗酒石酸酸性磷酸酶染色法测定牙槽骨表面破骨细胞的形成。结果鼠牙周病模型经RANKL抗体干预后，小剂量抗体（O．015、0．15及1．5斗∥鼠）不产生免疫性，与实验当天相比差异无统计学意义（P〉0。05）；高浓度组（10μ/鼠）在实验后7、10d测得的血清中鼠抗兔IgGA_405，值分别为0．64±O．12及0．55±0．03，差异有统计学意义（P〈0．01），可产生明显的免疫反应；牙龈组织匀浆液中sRANKL的表达水平及牙槽骨吸收明显减少，除0．015μg组与对照组相比差异无统计学意义外，其他浓度抗体组牙龈组织中sRANKL的表达水平（由279．11±19．32分别降至146．03±11．21、118．24±20．52、110．72±7．11）及牙槽骨吸收率（由20．83±0．78分别降至15．95±1．21、12．72±0．82、12．61±0．79）均明显减少，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）；牙槽骨表面的破骨样细胞数也明显减少[由（83．57±7．73）个／mm减少至（58．07±9．57）个／mm]，抗体组与非抗体组相比差异有统计学意义（P〈0．05）；牙龈组织中RANKL的表达与牙周骨吸收呈显著正相关（r^2=0．995，P〈0．01）。结论RANKL抗体可通过减少RANKL的表达水平，直接阻断RANKL的作用，抑制T细胞诱导的牙周骨吸收。

Er,Cr:YSGG激光治疗对高糖环境下微螺钉周围炎症及对RANK/RANKL信号通路的影响

目的:探讨铒铬铱钪镓石榴石(Er,Cr:YSGG)激光治疗对高糖环境下微螺钉周围炎症治疗的疗效,并分析与RANK/RANKL信号通路的关系。方法:20只正常健康雄性新西兰兔随机分为A组(微螺钉周健康组)、B组(微螺钉周围炎症组)、C组(微螺钉周围炎症激光治疗组),皮下注射2%四氧嘧啶建立糖尿病模型,下颌双侧无牙区植入微螺钉种植体,3个月后,A组进行菌斑控制,B组、C组用丝线拴结于微螺钉种植体颈部基台处引入炎症,C组予以Er,Cr:YSGG激光治疗。记录菌斑指数、探诊深度、牙龈指数和龈沟液量;ELISA检测龈沟液炎性细胞白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;CBCT检查微螺钉种植体周围炎周围骨吸收状态;Western blot检测牙龈组织中核因子κB(NF-κB)/NF-κB受体性活化因子(RANK)/NF-κB受体活化因子配体(RANKL)通路相关蛋白表达。结果:CBCT检查显示与A组比较,B组微螺钉种植体周围牙槽骨有明显的炎性吸收,微螺钉种植体-骨界面愈合差,骨附着不足;与B组比较,C组一侧牙槽骨有少量新生纤维成骨。与A组比较,B组PI、PD、GI水平较高,龈沟液量较多,龈沟液中IL-1β、TNF-α和IL-6水平较高,牙龈中NF-κBp65、RANK、RANKL蛋白表达水平较高(P<0.05);与B组比较,C组PI、PD、GI水平较低,龈沟液量较少,龈沟液中IL-1β、TNF-α和IL-6水平较低,牙龈中NF-κBp65、RANK、RANKL蛋白表达水平较低(P<0.05)。结论:Er,Cr:YSGG激光治疗糖尿病兔颌骨微螺钉种植体周围炎的疗效显著,且在NF-κB/RANK/RANKL通路表达调控上可能发挥一定作用。

PPAR-γ受体与急性肺损伤

过氧化物酶体增殖物激活受体 γ(PPAR γ)作为一种核转录因子,能与其特异性配体结合,在转录水平上调控多种基因表达。研究证实PPAR γ通过抑制NF κB、AP 1和STATs等炎症信号转导途径,发挥抗炎作用。现就PPAR γ的分子结构、活性调节、抗炎作用机制以及PPAR γ配体对急性肺损伤的保护作用作一综述。