猪NF-κB报告载体的构建及效率验证

为开发出一套适用于猪NF-κB的报告系统,本试验利用猪IκBα基因启动子上6个NF-κB识别位点,设计构建了6个NF-κB报告载体(A^F)。通过转染猪髋动脉内皮细胞(PIEC)、猪肺泡巨噬细胞3D4/21及猪胎儿成纤维细胞,进行双荧光素酶检测。结果显示,本试验构建的6个报告载体(A^F)均能有效报告猪NF-κB p65亚基的过表达,且其荧光素酶活性上调倍数均高于pNF-κB-Luc载体;报告载体A^F的荧光素酶活性在3个细胞系中呈现出较为规律的差异,其中载体C活性最强,载体F活性最弱。结果表明,相对于商业化的NF-κB报告载体,所获得的6个载体(A^F)在上述3个细胞系中均表现出更为特异的转录活性,可作为猪物种特异的NF-κB报告载体使用。