颅脑损伤患者高凝血状态与炎性因子水平和NF-κB活性关系分析

目的分析不同严重程度颅脑损伤患者高凝血状态与炎性因子水平、核因子κB(NF-κB)活性的关系。方法回顾性分析2012年3月—2016年1月湖北省十堰市太和医院神经外科收治的颅脑损伤患者130例的临床资料,按照入院后格拉斯哥昏迷评分(GCS)分为轻度组(13～15分,n=54)、中度组(9～12分,n=44)与重度组(3～8分,n=32),选取同期来医院体检的40例正常人作为健康对照组,各组入院后均留取血样,进行D-二聚体(DD)、纤维蛋白原(Fbg)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血酶原时间(APTT)检测,收集肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、C反应蛋白(CRP)、粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)测定结果 ,同时均分离外周单个核细胞(PBMCs)测定NF-κB表达,分析不同严重程度颅脑损伤患者高凝血状态与炎性因子水平及NF-κB活性的关系。结果 (1)与对照组比较,轻、中、重度组颅脑损伤患者D-D表达均上调,Fbg降低,PT、APTT、TT缩短,差异有统计学意义(F=611. 677、443. 983、29. 855、71. 473、93. 771,P <0. 01),中重度组D-D、Fbg高于轻度组,PT、APTT、TT短于轻度组(P <0. 05),重度组D-D、Fbg又高于中度组,PT、APTT、TT短于中度组(P <0. 05)。(2)与对照组比较,轻、中、重度组颅脑损伤患者TNF-α、IL-6、IL-1β、CPR、GM-CSF水平均上升(F=1 679. 840、161. 233、123. 522、767. 162、609. 542,P <0. 05),中、重度组上升幅度高于轻度组(P <0. 05),重度组上升幅度又高于中度组(P <0. 05)。(3)与对照组比较,轻、中、重度组P65光密度值、P65 mRNA表达水平升高(F=1 452. 235、1 567.854,P <0. 05),中重度组高于轻度组,重度组又高于中度组,比较差异有统计学意义(P <0. 01)。(4)TNF-α、IL-6、IL-1β、CRP、GM-CSF、P65 mRNA与D-D、Fbg表达呈正相关,IL-6、GM-CSF、P65 mRNA与APTT呈负相关。结论颅脑损伤患者高凝血状态与炎性因子、NF-κB细胞活化均存在紧密联系,且随着病情进展,患者凝血指标及炎性因子均表达上调,两者相互影响,共同参与颅脑损伤病变进展。

首发精神分裂症NF-κB活性与细胞因子mRNA表达及蛋白水平的关系

目的探讨精神分裂症中核转录因子-κB(NF-κB)活性与白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达及其血清蛋白水平的关系。方法应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定83例首发精神分裂症患者和65名健康对照外周血单个核细胞(PBMC)中NF-κB的活性,同时采用ELISA和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测血清细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的蛋白水平和PBMC中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达。结果患者组的NF-κB活性及血清IL-1β、IL-6、TNF-α的水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。患者组PBMC中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。患者组中NF-κB的活性与血清IL-1β、TNF-α水平及二者的mRNA表达水平均呈正相关(r分别为0.578、0.532、0.536、0.454,P均小于0.05),而对照组中NF-κB的活性与血清IL-1β、TNF-α水平及二者的mRNA表达水平均呈正相关(r分别为0.456、0.549、0.519、0.513,P均小于0.05)。两组中NF-κB的活性与血清IL-6及其mRNA均无明显相关(P均大于0.05)。结论精神分裂症患者存在免疫激活,激活状态的PBMC是细胞因子的主要来源之一;精神分裂症中活化的NF-κB对IL-1β、TNF-α的基因转录起了重要的调控作用。

中药调控NF-κB活性的研究进展

核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是真核细胞内广泛存在的一种转录因子,在免疫、炎症、肿瘤等众多疾病的发生发展中起着重要作用。近年来大量研究发现很多对NF-κB相关疾病具有显著疗效的中药都表现出对NF-κB的活性抑制作用,通过在细胞及分子水平上对中药的作用机理分析表明,中药中确实存在着一些活性成分,能够在细胞或分子水平上调节NF-κB的活性,发挥治疗的作用。因此,提示中药可作为筛选NF-κB活性抑制药物的天然资源库,从中筛选NF-κB活性抑制药物是可行的。本文对具有NF-κB活性抑制作用的中药提取物、单体中药、单味中药和中药复方做了综述。

二甲双胍对NASH小鼠肝组织NF-κB活性、血清IL-6与转氨酶水平的影响

目的观察二甲双胍对非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)小鼠的肝组织NF-κB活性、血清白介素6(IL-6)表达及转氨酶影响,并探讨二甲双胍防治NASH的可能机制。方法 24只昆明小鼠随机分为3组:对照组、模型组、治疗组。凝胶迁移率变动分析(EMSA)检测小鼠肝组织NF-κB活性;ELISA法检测小鼠血清IL-6表达;全自动生化仪检测小鼠转氨酶水平,了解各组小鼠肝脏损伤情况。结果与模型组比较,治疗组小鼠肝组织NF-κB活性、血清IL-6和转氨酶水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,治疗组小鼠肝组织NF-κB活性、血清IL-6和转氨酶水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论二甲双胍能降低NASH小鼠肝组织NF-κB活性、血清IL-6和转氨酶水平。

靶向“圈套”肽核酸对NF-κB活性影响及胆管癌细胞体外抑制作用

NF-κB的异常激活在多种肿瘤细胞的增殖调控中发挥中枢性作用。其以p65／p50异二聚体的形式普遍存在于细胞浆中．可被多种刺激因素激活参与相应靶基因的转录激活与抑制。人胆管癌中NF-κB存在选择性激活．这与胆管慢性炎症的致瘤转化、侵袭、转移、凋亡抵抗等生物学行为有关。应用靶向转录因子“圈套”策略拮抗NF-κB活性抑制炎症因子的超量释放已获得更肯定的疗效，

大鼠缺血心肌中NF-κB活性改变及其对iNOS表达的影响

观察心肌梗死大鼠不同时期缺血心肌中NF κB的活性变化 ,评价其是否参与调控缺血心肌中iNOS的表达。将雄性Wistar大鼠 36只复制心肌梗死模型 ,检测心肌梗死后 1、2、3及 4W缺血心肌中NF κB活性和iNOS的表达 ;另腹腔每日注射NF κB抑制剂NAC(16 0mg kg)及注射盐水作对照 ,2周后检测缺血心肌中iNOS的表达。共 6组 ,每组 6只 ,另取 6只假手术对照。用EMSA检测NF κB ,RT PCR及免疫组化测iNOS。结果显示 :(1)心肌梗死后 ,缺血心肌中NF κB活性明显增高 ,1～ 2W活性最强 ,3W后开始下降 ,4W接近正常水平。 (2 )心肌梗死 1W后缺血心肌中iNOSmRNA及蛋白质表达明显增加 ,其变化趋势同NF κB。 (3)加用NAC干预后的大鼠缺血心肌中iNOSmRNA及蛋白质的表达显著下降。实验说明缺血可刺激心肌中iNOS的表达增加及NF κB的活化 ;NF

乌司他丁对急性重症胰腺炎大鼠NF-κB活性NF-κB mRNA表达的实验研究

目的研究乌司他丁对急性重症胰腺炎(SAP)大鼠NF-κB活性、NF-κB mRNA表达的影响。方法大鼠64只作为研究对象,随机分为对照组、SAP模型组、乌司他丁静脉注射组和乌司他丁腹腔灌注组各16只。在给药后24h后处死大鼠,取出胰腺组织标本。对胰腺组织标本进行病理评分;测定胰腺细胞NF-κB活性及胰腺组织中NF-κB mRNA表达。比较4组大鼠病理评分;淀粉酶、脂肪酶检测结果;胰腺细胞NF-κB活性、NF-κB mRNA表达。通过各项指标判断乌司他丁及其不同给药途径对实验性急性重症胰腺炎大鼠NF-κB活性、NF-κB mRNA的影响。结果对照组与SAP模型组比较,NF-κB活性与急性胰腺炎呈正相关关系(r=0.572,P<0.05)。乌司他丁静脉注射组和腹腔灌注组对急性重症胰腺炎状况均有改善,且乌司他丁腹腔灌注组各方面均有优势,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论乌司他丁对急性重症胰腺炎(SAP)大鼠NF-κB活性、NF-κB mRNA表达具有明显的抑制作用,且腹腔灌注的给药途径作用更为显著。

耐力训练对STZ诱导糖尿病大鼠背根神经节内NF-资B活性的调节作用

目的:研究不同强度耐力训练对糖尿病大鼠背根神经节(DRG)内的核转录因子NF-资B活性的调节作用,为临床糖尿病神经并发症的运动疗法提供分子生物学依据。方法:雄性SD大鼠44只,随机分为糖尿病组(34只)和正常组(10只)。其中糖尿病组大鼠经尾静脉注射链脲霉素,建立糖尿病模型,然后随机分为55%VO2max运动组(E1,n=6)、75%VO2max运动组(E2,n=6)、55%VO2max运动加胰岛素治疗组(EI1,n=6)、75%VO2max运动加胰岛素治疗组(EI2,n=6)、胰岛素治疗非运动组(DI,n=5)、非胰岛素治疗非运动组(D,n=5)。另外10只正常血糖大鼠分为一次力竭运动组(EC,n=5)和非运动组(C,n=5)。耐力训练采用活动平板,胰岛素采用隔日皮下注射,共8周。运用ELISA法测定背根神经节内NF-资B活性。结果:D组DRG内NF-资B活性显著高于EC和C组(P<0.01),也显著高于E1、E2、EI1组(P<0.05)以及EI2和DI组(P<0.01)。结论:糖尿病大鼠更易发生周围神经的氧化应激损伤;耐力训练可以有效地抑制糖尿病大鼠背根神经节NF-资B活性,干预糖尿病神经病变。

双黄连注射液对血管内皮细胞NF-κB信号通道靶分子活性抑制作用的研究

目的:探讨中药复方双黄连注射液对血管内皮细胞作用. 方法:用双黄连注射液与人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学法观察双黄连注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用及细胞脱氧酶的活性,用Sandwich ELISA法定量分析法和定量免疫细胞技术,检测NF-κB活性及胞浆内IκB含量.

环氧化酶-2特异抑制剂SC236对NF-κB活性的阻断作用

目的 探讨环氧化酶 2抑制剂的抗炎和抗肿瘤作用机理。方法 利用NF κB报告基因暂时转染人胃上皮细胞 ,使用环氧化酶 2特异抑制剂SC2 36和PMA共同处理转染的细胞后 ,双重虫荧光素酶系统鉴定基因的活性。用免疫蛋白印迹法检测NF κB亚单位IκB α和p6 5的含量。结果 在人胃上皮细胞AGS和MKN2 8细胞内 ,SC2 36有效地抑制NF κB介导的基因转录。SC2 36的作用比非特异性环氧化酶抑制剂阿斯匹林更强大。SC2 36与阿斯匹林的作用点不同 ,SC2 36对PMA引起的IκB α的磷酸化或降解没有作用 ,SC2 36的作用点在于抑制p6 5亚单位的核易位。结论 环氧化酶 2特异抑制剂的抗炎和抗肿瘤作用可能部分地通过抑制NF κB发挥作用。特异的COX 2抑制剂抑制NF κB活性的作用点不同于非特异的环氧化酶抑制剂。

NK-104在人肝癌细胞系对TNF-α诱导的NF-κB基因活性的影响

背景与目的:炎症与癌症的发生已经引起学者们的关注。Nuclear factor KappaB因子(NF-κB)是炎症过程中关键的基因之一,在细胞的生存及恶化的演变过程中起着重要的调节作用,能够被各种外界刺激因素激活。本研究探讨第三代3-羟基-3-甲基戊二酰辅A(3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA,HMG-CoA)还原酶抑制剂NK-104在人肝癌细胞系对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的NF-κB基因活性的影响。方法:以肝癌细胞系Huh7为靶细胞,WST-8法测定NK-104对细胞增殖的影响;以Western blot法检测NK-104对TNF-α诱导的细胞核NF-κB基因活性的表达及IκBα的表达;ELISA法检测NK-104对IL-8产物的影响。结果:NK-104(0.1μmol/L)单独治疗组对NF-кB基因的表达无明显影响,TNF-α(1ng/ml)能够明显提高NF-кB基因的表达呈1.8倍左右,与NK-104共同作用后,能够显著抑制它的表达(P<0.01)。而细胞内IκBα的表达差异无显著性(P>0.05);NK-104可显著降低NF-кB激活后炎性细胞因子IL-8产物的分泌。结论:NK-104在人肝癌细胞系对TNF-α诱导的NF-κB基因活性及其IL-8产物的分泌具有明显的抑制作用,为临床治疗肝癌提供一定的实验依据。

七氟醚对乳腺癌细胞NF-κB活性及MMP-2、MMP-9表达的影响

目的探讨七氟醚对乳腺癌细胞NF-κB活性及基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响,为乳腺癌治疗提供新的参考数据。方法体外培养乳腺癌细胞AU565,分别用1. 7%、3. 4%、5. 1%七氟醚作用4 h,分别设为低剂量组、中剂量组、高剂量组,将未经七氟醚作用培养的细胞设为对照组。利用MTT检测各组细胞增殖情况,实时荧光定量分别检测MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达量,蛋白免疫印迹检测IKKβSer180、NF-κB p65、MMP-2、MMP-9蛋白表达情况,EMSA检测NF-κB活性。蛋白免疫印迹检测IL-1β预处理细胞经3. 4%七氟醚作用后,IKKβSer180、NF-κB p65、MMP-2、MMP-9蛋白表达变化。结果与对照组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞增殖率均显著下降,差异有统计学意义(P<0. 05);与对照组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组中MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达量显著下调,差异有统计学意义(P<0. 05),IKKβSer180、NF-κB p65、MMP-2、MMP-9蛋白表达量显著下降,差异有统计学意义(P<0. 05),NF-κB活性显著降低,差异有统计学意义(P<0. 05)。IL-1β预处理后,3. 4%七氟醚对乳腺癌细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达量的抑制作用显著减弱。结论七氟醚是一种潜在的治疗乳腺癌的分子靶向药物,可通过抑制NF-κB活性来降低MMPs表达。

猪非典型瘟病毒云南株Mut蛋白的特征分析及其对宿主细胞NF-κB转录活化的影响

猪非典型瘟病毒(APPV)是近年来新发现的猪病毒性病原,给养猪业健康发展带来了严重的威胁。课题组前期研究发现了APPV云南株(APPV-YN)导致感染猪临床症状非典型化的关键基因Mut,为探讨APPV-YN Mut的生物学特征及其对宿主细胞NF-κB信号通路转录活化的影响,揭示APPV非典型化的机制。利用SnapGene、ProtParam、PredictProtein、TMHMM、SignaIP 4、ProtScale等在线软件对APPV-YN Mut基因表达蛋白的理化性质、亚细胞定位、磷酸化位点等进行分析预测;将重组载体pCMV-Mut转染至HEK-293细胞,确定蛋白稳定表达后利用TNF-α刺激NF-κB信号通路使其活化,分析APPV-YN Mut对NF-κB转录活性及其对NF-κB P65核质转运的影响。生物信息学分析结果显示,Mut蛋白为亲水性的稳定蛋白,无跨膜结构和信号肽,可能主要定位于细胞质,二级结构主要以无规则卷曲为主,三级结构稳定,可能作用于PKC、P38MAPK、PKA、EGFR、CDK5等相关激酶及蛋白受体;Mut蛋白在HEK-293细胞成功表达,大小约为15 ku;Mut对TNF-α激活的NF-кB转录活化有明显抑制作用,干扰NF-κB P65的入核,抑制核质穿梭过程。研究结果为后续进一步在分子水平上探究Mut在APPV非典型化中的作用奠定了基础。

来氟米特活性代谢产物对肿瘤坏死因子-α诱导肾小管上皮细胞内核因子-κB活性的影响

目的:探讨来氟米特活性代谢产物对TNF-α诱导肾小管上皮细胞内NF-κB活性表达的影响。方法:培养的肾小管上皮细胞为空白组;对照组为肾小管上皮细胞加TNF-α5000U/ml共同培养;干预组先于上皮细胞中加不同浓度来氟米特的活性代谢产物(A771726)培养不同时限,30min后再加入TNF-α5000U/ml。EMSA法检测各组NF-κB活性表达的变化。结果:A771726在不同浓度及时限均可抑制TNF-α诱导的肾小管上皮细胞内NF-κB活性表达,且呈剂量与时限依赖性。结论:来氟米特活性代谢产物可抑制TNF-α诱导的肾小管上皮细胞内NF-κB的活性表达。

NF-κB在急性移植肾排异中的作用

目的研究转录因子NF-κB在肾移植急性排斥反应中的作用。方法ACI大鼠为供体,LEW大鼠为受体建立急性排斥动物模型,将移植肾分离制成核蛋白提取液,采用gelshift方法观察移植肾组织NF-κB与炎性基因启动子中特殊基因序列的结合能力,并以LEW大鼠同为供受体的移植肾作为对照。结果在急性排斥反应移植肾中,NF-κB的结合能力明显高于无排斥反应的同系移植肾。结论NF-κB在同种异体移植物中的强表达可能是急性排斥中的关键因素,提示可通过抑制NF-κB活性来降低移植物的排斥反应。

MLA预处理对老年大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响及NF-κB在其中的作用

目的 探讨单磷酰脂A(monophosphoryllipidA ,MLA)预处理2 4h对老年大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响及核转录因子 κB(NF κB)在其中的作用。方法 建立老年大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型。3 6只大鼠随机分为3组,分别行单纯缺血/再灌注及应用MLA、NF κB的特异性抑制剂DDTC加MLA预处理心脏2 4h后,对心脏进行较长时间缺血/再灌注,检测心肌梗死范围、乳酸脱氢酶(LDH)释放及心肌细胞凋亡率。另外3 0只大鼠随机分为5组,检测MLA预处理0、15、3 0、60min及DDTC加MLA预处理后3 0min时NF κB活性。结果 MLA预处理可减小心肌梗死范围(P <0 .0 5 ) ,降低血浆LDH活性(P <0 .0 5 ) ,减少心肌细胞凋亡率(P <0 .0 1)。预处理使NF κB呈时间依赖性激活,预处理前NF κB活性低,预处理15min开始升高、3 0min达到高峰、60min开始下降。而应用NF κB抑制剂DDTC可完全阻断NF κB复合物活性的增加,也完全消除预处理的保护作用。结论 MLA预处理2 4h对老年大鼠心肌再次缺血/再灌注损伤有保护作用。NF κB参与老年大鼠心肌预处理后的延迟保护作用,MLA预处理后NF κB快速的核转移并激活可能是药物预处理延迟保护作用的重要机制之一。

NF-κB在临床急病中的作用

核转录因子NF-κB活性增加可能是临床急病进程恶化的中心环节，最终引起多器官功能衰竭综合征。NF-κB在临床急病的炎症因子调控方面具有极其重要的作用，进一步了解其调控机制，对于寻找临床急病的最佳治疗途径有重要意义。

cAMP-PKA信号通路在CCK-8抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞NF-κB活化中的作用

目的:探讨cAMP-PKA信号通路对八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapetide,CCK-8)抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞(pulmonary interstitial macrophages,PIMs)核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)活性的影响.