二甲双胍通过抑制IL-6/NF-κB/P-gp改善卵巢癌PARP抑制剂耐药

目的:探讨二甲双胍对同源重组修复功能缺陷(HRD)阳性PARP抑制剂(PARPi)耐药卵巢癌的作用及相关机制。方法:逐步诱导法建立尼拉帕利耐药的HRD阳性SKOV3卵巢癌细胞系(SKOV3/PARPi)。白细胞介素-6(IL-6)、转染si-IL-6 RNA以及二甲双胍作用后,采用CCK-8法检测SKOV3或SKOV3/PARPi细胞增殖的变化,Western blot检测细胞内IL-6及P糖蛋白(P-gp)水平、AKT及NF-κB活性的变化,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-6含量的变化。建立SKOV3/PARPi卵巢癌裸鼠荷瘤模型并验证二甲双胍、PARPi处理对瘤体的影响,免疫组化及Western blot检测瘤组织内P-gp蛋白的表达。结果:100μg/L IL-6作用SKOV3细胞后尼拉帕利的IC_(50)上调(P<0.001),细胞内P-gp表达增加(P<0.001)。SKOV3/PARPi细胞转染si-IL-6 RNA后尼拉帕利的IC_(50)下调(P=0.008),P-gp表达降低(P<0.001)。二甲双胍作用SKOV3/PARPi细胞后,尼拉帕利的IC_(50)下调(P<0.001);细胞内IL-6及P-gp蛋白水平、AKT及NF-κB活性均下降(P<0.001)。二甲双胍可改善SKOV3/PARPi荷瘤裸鼠尼拉帕利耐药,下调瘤组织内P-gp表达(P均<0.05)。结论:二甲双胍可通过抑制IL-6/NF-κB/P-gp改善卵巢癌PARPi耐药。

当归芍药散联合TLR4抑制剂对大鼠肝纤维化的抑制作用及NF-κB/NLRP3通路的调节作用研究

目的研究当归芍药散联合Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抑制剂对大鼠肝纤维化的抑制作用及对核因子κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)通路的调节作用。方法大鼠随机分为空白对照组及造模组,造模组采用腹腔注射四氯化碳(CCl_(4))法建立肝纤维化大鼠模型,造模完成后的大鼠随机分为肝纤维化模型组、当归芍药散组、TLR4抑制剂组及联合组,12只/组,当归芍药散组大鼠按照10 g·kg^(-1)(以生药含量计)灌胃给予大鼠当归芍药散,TLR4抑制剂组腹腔注射给予大鼠TAK-242(3 mg·kg^(-1)),联合组同时给予大鼠当归芍药散(10 g·kg^(-1))及TAK-242(3 mg·kg^(-1)),1次/天,连续给药13周,测定大鼠体质量、肝脏重量及肝脏指数,使用全自动生化分析仪测定大鼠血清直接胆红素(Direct bilirubin,DBIL)、总胆汁酸(Total bile acid,TBA)及总胆红素(Total bilirubin,TBIL)水平,使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定肝组织细胞间黏附分子-1(Intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)及还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)水平,Masson染色法检查大鼠肝组织病理学变化,实时定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Rt-qPCR)测定肝组织NLPR3及NF-κB mRNA水平,免疫印迹法(Western blot)测定肝组织NLPR3及NF-κB蛋白水平,免疫荧光法测定肝组织α-SMA表达。结果与空白对照组比较,肝纤维化模型组大鼠肝脏质量、肝脏指数,血清DBIL、TBA及TBIL水平、肝组织ICAM-1及MDA水平、肝组织NLPR3及NF-κB mRNA及蛋白水平、肝组织α-SMA免疫荧光强度显著升高(P<0.05),体质量、肝组织SOD及GSH水平显著降低(P<0.05),肝组织明显纤维化改变;与肝纤维化模型组比较,当归芍药散组、TLR4抑制剂组及联合组大鼠肝脏质量、肝脏指数,血清DBIL、TBA及TBIL水平、肝组织ICAM-1及MDA水平、肝组织NLPR3及NF-κB mRNA及蛋白水平、肝组织α-SMA免疫荧光强度显著降低(P<0.05),体质量、肝组织SOD及GSH水平显著升高(P<0.05),肝组织病理学明显恢复,且联合组各项指标变化显著优于当归芍药散及TLR4抑制剂单独给药组。结论当归芍药散联合TLR4抑制剂能显著改善肝纤维化大鼠肝功能,抑制肝组织纤维化进展,降低氧化应激损伤,其机制可能与调节NF-κB/NLPR3通路有关。

黄芪补肾活血汤对芳香化酶抑制剂诱导骨质疏松模型小鼠破骨细胞活性的影响

背景:芳香化酶抑制剂尽管显著提高了激素受体阳性乳腺癌患者的临床获益,但其相关的不良事件——骨质疏松严重影响了患者的生活质量,黄芪补肾活血汤能有效预防芳香化酶抑制剂所致骨质疏松的发生,但是其作用机制尚不清楚。目的:探究黄芪补肾活血汤对芳香化酶抑制剂所致骨质疏松模型小鼠破骨细胞活性的影响及机制。方法:选取60只8周龄C57BL/6J雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪补肾活血汤高、中、低剂量组、阳性对照组各10只,除假手术组外,其余组小鼠均切除双侧卵巢联合皮下注射来曲唑构建绝经后芳香化酶抑制剂所致骨质疏松模型,黄芪补肾活血汤高、中、低剂量组分别给予19.24,9.62,4.81 g/(kg·d)黄芪补肾活血汤进行灌胃(1次/d),阳性对照组给予阿仑膦酸钠5 mg/kg灌胃(1次/周)。给药3个月后,Micro-CT检测胫骨骨密度和骨微结构,对股骨进行苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色及免疫组化检测核因子κB受体活化因子配体、骨保护素蛋白表达,ELISA检测血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平。结果与结论:①与假手术组相比,模型组小鼠骨密度显著下降、骨小梁形态疏松断裂、血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平显著上升,表明芳香化酶抑制剂所致骨质疏松模型构建成功;②与模型组相比,黄芪补肾活血汤高、中、低剂量组和阳性对照组小鼠骨密度、骨微结构显著改善,骨小梁形态增粗致密,血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平显著下降,破骨细胞数量减少,核因子κB受体活化因子配体蛋白表达下降,骨保护素蛋白表达升高。结果表明,黄芪补肾活血汤可能调控核因子κB受体活化因子配体/核因子κB受体活化因子/骨保护素信号通路抑制破骨细胞活性,改善骨小梁形态和骨微结构,提高骨密度,进而预防芳香化酶抑制剂所致骨质疏松模型的发生发展。

脂肪酸合酶抑制剂对大肠癌细胞NF-κB活性的抑制作用

目的 探讨脂肪酸合酶抑制剂对大肠癌细胞NF κB活性的抑制作用。方法 用脂肪酸合酶抑制剂(FASI) 浅蓝菌素处理大肠癌LoVo细胞株 ,用凝胶电泳迁移率法 (EMSA)检测NF κB活性。结果 实验分别用不同浓度浅蓝菌素 (10 -9～ 10 -5M )处理LoVo细胞 12h后 ,可抑制NF κB活化 ,其抑制程度呈剂量依赖性递减 ,与对照组相比较浅蓝菌素 (10 -9～ 10 -5M )处理LoVo细胞 12h后NF κB条带扫描像素积分比分别为 0 .787,0 .45 1,0 .379,0 .338,0 .32 2。结论 浅蓝菌素处理人大肠癌LoVo细胞后 ,NF κB活化程度随浅蓝菌素的剂量递增而递减。提示浅蓝菌素对LoVo细胞NF κB活性的具有抑制作用。

BTK抑制剂GDC-0853通过TLR4/NF-κB通路抑制M1巨噬细胞极化并改善UUO肾损伤

目的探究BTK抑制剂GDC-0853对巨噬细胞极化的影响、对小鼠单侧输尿管梗阻(unilated ureteral obstruction,UUO)肾损伤的缓解作用并揭示其相关的机制。方法使用不同浓度BTK抑制剂GDC-0853(20、50、100μmol/L)干预LPS+IFNγ诱导RAW264.7小鼠M0型巨噬细胞向M1型极化,流式细胞术检测巨噬细胞M1型标记物CD86与M2型标记物CD206的表达频率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-23(IL-23)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA水平,Western blot法检测CD86、iNOS蛋白表达以及TLR4/NF-κB通路相关蛋白的表达情况;60只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham)、UUO组、UUO+BTK抑制剂GDC-0853(低、中、高剂量)组,分别予以生理盐水和20 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg GDC-0853灌胃预处理3 d,UUO术后再处理7 d后取小鼠肾组织,HE染色观察肾组织病理变化,免疫组化染色检测iNOS阳性表达。结果与LPS+IFNγ组比较,不同浓度BTK抑制剂GDC-0853干预后,M1型巨噬细胞标记物CD86百分比下降而M2型巨噬细胞标记物CD206百分比上升,TNF-α、IL-6、IL-23、iNOS mRNA表达水平以及CD86、iNOS、TLR4、p-IκBα、p-P65蛋白表达水平也显著下降,且呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<0.01)。BTK抑制剂GDC-0853处理的小鼠肾组织病理损伤较UUO组呈剂量依赖性地减轻,同时,iNOS阳性表达较UUO组也呈剂量依赖性地减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论BTK抑制剂GDC-0853可改善小鼠UUO的肾损伤,可能是通过介导TLR4/NF-κB信号通路调控巨噬细胞M1的极化来实现的。

蛋白酶体抑制剂YSY01A不依赖NF-κB通路抑制乳腺癌细胞增殖及诱导凋亡研究

目的研究YSY01A对乳腺癌的增殖抑制作用及其抗癌机制。方法荧光底物法检测蛋白酶体活性;蛋白酶体荧光探针法研究YSY01A与蛋白酶体β催化亚基结合;Annexin V-FITC、JC-1探针检测YSY01A对细胞凋亡和线粒体膜电位的影响;用蛋白免疫印迹法检测细胞内的蛋白表达。结果YSY01A抑制细胞内外蛋白酶体的活性,其中对CT-L的抑制作用最强,对T-L的作用比PS341强3-4倍;MCF-7对YSY01A最敏感,且比PS341敏感性高;YSY01A以时间依赖性诱导细胞凋亡,与对照组比较,差异均有显著性(P<0.05)。YSY01A增加ubiquitin、P-IκBα、wt-p53、Bax、endonuclearse G蛋白表达,减少IκBα、Bcl-xL、XIAP水平,不影响NF-κB表达。结论 YSY01A是新蛋白酶体抑制剂,具有较强的抑制MCF-7细胞增殖的作用,抗癌机制与诱导细胞凋亡有关。

NF-κB抑制剂PDTC抗白血病细胞增殖的实验研究

目的:观察核转录因子NF-κB活性特异性抑制剂PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸盐)对急性白血病细胞系K562细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法:利用Trans AMTM NF-κB/p65活性测定试剂盒,检测PDTC作用K562细胞12h、24h后NF-κB亚基p65活性的变化;采用WST-1细胞增殖试验观察不同浓度PDTC作用24h、48h、72h对细胞增殖的影响;用单细胞凝胶电泳(彗星检测)方法检测PDTC对K562细胞DNA损伤的影响;利用免疫印迹法(Western blotting)检测PDTC对K562细胞中pro-caspase-3和活化型caspase-3蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,经PDTC处理的实验组K562细胞NF-κB/P65的活性受到明显抑制(P<0.01);且PDTC能以时间和剂量依赖方式抑制K562细胞的增殖(P<0.05);单细胞凝胶电泳显示实验组细胞DNA受损,浓度为25μmol/L、50μmol/L、100μmol/LPDTC处理后,实验组细胞DNA总损伤细胞百分率分别为43.50%、84.00%、95.63%,明显高于对照组(9.75%),P<0.05,且存在明显的剂量依赖关系;Western blotting结果显示经PDTC处理后的K562细胞胞质中可检测到pro-caspase-3和活化型caspase-3蛋白的表达。结论:NF-κB参与白血病细胞的增殖与凋亡调控,PDTC抗肿瘤机制可能与抑制NF-κB活性,上调caspase-3表达,从而诱导细胞凋亡有关。

拓扑异构酶抑制剂通过ATM/ATR和NF-κB途径上调乳腺癌细胞MICA/B的表达

目的:分析常用化疗药物对免疫识别乳腺癌细胞重要的靶标主要组织相容性复合体Ⅰ类相关分子A和B(major histocompatibility complex classⅠ-related chain A and B,MICA/B)的影响,探讨其调节MICA/B表达的分子机制。方法:用荧光定量RT-PCR法检测化疗药物对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA表达的影响,流式细胞术检测化疗药物对MICA/B表面蛋白表达的作用。加入咖啡因抑制毛细血管扩张性共济失调突变和Rad3相关激酶(ataxia telangiectasia mutated and Rad3-related kinase,ATM/ATR),加入吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pynolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB),观察其是否能够抑制化疗药物中拓扑异构酶抑制剂对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及蛋白的表达。凝胶阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测药物是否影响乳腺癌细胞NF-κB与MICA/B启动子区的结合。结果:三种拓扑异构酶抑制剂足叶乙甙、拓扑替康和阿霉素可使乳腺癌MCF-7细胞的MICA和MICB mRNA水平升高。足叶乙甙在浓度为5、20、100μmol/L时,与不加药处理组相比,MICA mRNA水平分别升高到(1.68±0.17)、(2.54±0.25)、(3.42±0.15)倍(P<0.05);MICB mRNA水平分别升高到(1.82±0.24)、(1.56±0.05)、(5.84±0.57)倍(P<0.05)。拓扑替康和阿霉素在特定浓度时也使MCF-7的MICA和MICB mRNA水平显著升高(P<0.05)。拓扑异构酶Ⅱ抑制剂足叶乙甙和拓扑替康处理另一乳腺癌细胞系SK-BR-3后,MICB mRNA的表达也轻度升高(P<0.05)。足叶乙甙和拓扑替康还增加MCF-7细胞表面MICA/B蛋白的表达(P<0.05),且存活和凋亡细胞MICA/B蛋白的表达均增高。用不同浓度的咖啡因处理足叶乙甙损伤的乳腺癌细胞,MICA/B mRNA和蛋白表达均显著降低,当咖啡因浓度为1、5、10 mmol/L时,MICA mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.75±0.25)倍分别降为(0.89±0.05)、(0.81±0.02)、(0.48±0.04)倍(P<0.001),MICB mRNA由(6.85±0.35)倍降为(1.36±0.13)、(0.76±0.06)、(0.56±0.03)倍(P<0.05),MICA/B蛋白表达由(3.42±0.05)倍降为(1.32±0.03)、(1.21±0.06)、(1.14±0.03)倍(P<0.001),表明足叶乙甙对MICA/B的上调作用能够被ATM/ATR抑制剂所抑制。同样,加入不同浓度的NF-κB的强抑制剂PDTC(10、50、100μmol/L),MICA/B mRNA和蛋白的表达均明显受到抑制(P<0.05),提示NF-κB也参与这一过程。EMSA实验显示,MCF-7细胞用足叶乙甙处理后,NF-κB与MICA/B基因启动子区的结合活性增强。结论:拓扑异构酶抑制剂诱导并上调乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及表面蛋白的表达,表明化疗药物有可能增强免疫系统对乳腺癌的识别和杀伤,ATM/ATR和NF-κB途径参与了这一过程。

蛋白酶体抑制剂依沙佐米对胰腺癌细胞凋亡及NF-κB通路的影响

目的:探讨蛋白酶抑制剂依沙佐米对胰腺癌细胞凋亡和NF-κB通路的影响。方法:培养人胰腺癌细胞系CFPAC-1和PANC-1,加入浓度为0、10、20、30和40 nmol/L的依沙佐米培养12、18、24和48 h,RT-qPCR检测细胞中NF-κB p65、IκB激酶(IκB kinase, IKK)、Bax和caspase-3的mRNA表达,Western blot检测细胞中凋亡相关因子NF-κB p65、IKK、Bax和caspase3的蛋白水平,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:CCK-8实验的检测结果显示,添加10~40 nmol/L依沙佐米均对PANC-1细胞和CFPAC-1细胞的活力具有抑制作用(P<0.05),呈时间和剂量依赖性;细胞凋亡检测结果显示随着依沙佐米浓度的增加,PANC-1细胞和CFPAC-1细胞的凋亡率均显著增加(P<0.05);与添加0 nmol/L抑制剂的对照细胞比较添加依沙佐米后PANC-1细胞和CFPAC-1细胞NF-κB p65和IKK的mRNA表达水平显著降低(P<0.05);凋亡因子Bax和caspase-3的表达水平均显著升高(P<0.05)。添加依沙佐米后PANC-1细胞和CFPAC-1细胞的NF-κB p65和IKK的蛋白水平均显著降低(P<0.05),与mRNA检测结果一致;CFPAC-1细胞的凋亡因子Bax和caspase-3蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),PANC-1细胞的caspase-3蛋白表达水平显著升高,Bax蛋白在依沙佐米为10 nmol/L浓度时变化的差异无统计学显著性。结论:蛋白酶体抑制剂依沙佐米可能通过抑制NF-κB通路的激活抑制胰腺癌细胞的活力,促进细胞凋亡,且作用效果呈时间和剂量依赖性。

NF-κB抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)对角膜移植大鼠角膜组织的影响

目的探讨核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对角膜移植大鼠角膜组织的影响。方法取14只Wistar大鼠为供体鼠,提供双眼角膜; 28只SD大鼠为受体鼠,均以左眼为术眼,右眼设为正常对照,在显微镜下进行同种异体角膜移植术。手术完成后将28只SD大鼠随机分为3组,对照组(10只)以生理盐水滴左眼,实验组(10只)以1 mg·mL^(-1)PDTC滴左眼,均为每天3次,每次1滴,空白组(8只)不做任何处理。术后第1天起,每组分别在术后第5天、第15天、第25天在裂隙灯下观察角膜新生血管的情况并进行评分。对各组角膜植片进行病理学及免疫组织化学染色观察,分析各组大鼠NF-κB及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在角膜植片的表达情况。结果对照组、实验组、空白组角膜移植排斥反应发生的时间分别为(10. 80±1. 40) d、(23. 40±2. 30) d、(11. 20±2. 06) d,实验组排斥反应发生的时间较对照组明显延长,差异有统计学意义(P <0. 01)。对照组新生血管一般术后第3～5天出现,并很快进入植片周边,沿缝线处向角膜植片中央粗大生长。实验组新生血管一般术后第5～7天出现,生长速度较慢,血管稀疏。术后不同时间实验组新生血管数、新生血管面积及排斥反应指数均小于对照组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。角膜移植术后,实验组大鼠角膜上皮基底细胞内出现较多空泡,角膜基质层内出现间质水肿;炎症细胞浸润,并见新生的毛细血管;缝线及切口周围见大量淋巴细胞浸润,部分植片中央发生散在的炎症细胞浸润、角膜上皮部分脱落。对照组角膜植片水肿及炎症细胞的浸润程度较实验组明显增加,且对照组角膜植片显著增厚,基质结构疏松、紊乱;实验组角膜植片相对基质板层结构排列有序,新生血管数在相同时间内明显减少。免疫组织化学染色显示,NF-κB阳性细胞数,实验组为每400倍视野(4. 236±0. 856)个,较对照组[(18. 451±1. 234)个]明显减少,差异有统计学意义(P <0. 05);空白组大鼠角膜内鲜有阳性表达。VEGF阳性细胞数,实验组为每400倍视野(2. 631±0. 238)个,较对照组[(6. 254±0. 721)个]明显减少,差异有统计学意义(P <0. 05);空白组大鼠角膜内鲜有阳性表达。结论大鼠进行同种异体角膜移植术后,NF-κB抑制剂PDTC可在一定程度上减少角膜新生血管的生成,抑制角膜移植排斥反应的发生。

NF-κB抑制剂对THP-1粘附及MMP-9表达影响的实验研究

前单核细胞 THP- 1分化是一个复杂的过程 ,这一过程包含了复杂的细胞内信号传导及许多因子的活化及大量蛋白的表达。基质金属蛋白酶 - 9(Motrix Metalloproteinase- 9,MMP- 9)主要降解基底膜中的 和 型胶原 ,在血管增生及肿瘤浸润转移过程中起重要的作用。为探讨核转录因子 κB(nuclear factor kappaB,NF- κB)在 THP- 1粘附及 MMP- 9表达中的作用 ,我们应用 NF- κB抑制剂 PDTC(Pyrollidine Dithiocarba-mate二硫碳吡咯烷 ,应用共聚焦显微镜、流式细胞术观测了其对 THP- 1粘附及 MMP- 9表达的影响。结果表现 :PDTC可明显的抑制 THP- 1的粘附及 MMP- 9的表达。表明 NF- κB在细胞粘附及 MMP- 9的表达中起重要的作用。

NF-κB抑制剂PDTC治疗大鼠子宫内膜异位症的实验研究

目的:评价脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对大鼠子宫内膜异位症(EMT)模型的治疗效果。方法:将构建成功的EMT模型鼠分为PDTC治疗组(PDTC组),亮丙瑞林(LEU)治疗组(LEU组)及未干预组,未成模鼠作为阴性对照组。测量用药前后各成模组异位内膜体积,并采用酶联免疫分析(ELISA)法比较各组大鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平;采用免疫组化SP法测量各组中核因子κB(NF-κB)的表达。结果:①治疗后各研究组异位内膜体积均缩小,PDTC组及LEU组与未干预组之间差异均有统计学意义;而PDTC组与LEU组之间差异无统计学意义。②阴性对照组血清TNF-α及IL-1β的表达水平比未干预组低,而PDTC及LEU两干预组的表达均降低。结论:PDTC可使大鼠EMT模型异位病灶显著缩小及血清中的TNF-α及IL-1β表达降低。

双黄连注射液对血管内皮细胞NF-κB信号通道靶分子活性抑制作用的研究

目的:探讨中药复方双黄连注射液对血管内皮细胞作用. 方法:用双黄连注射液与人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学法观察双黄连注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用及细胞脱氧酶的活性,用Sandwich ELISA法定量分析法和定量免疫细胞技术,检测NF-κB活性及胞浆内IκB含量.

HMGB1抑制剂预处理对大鼠心肺复苏后脑缺血再灌注损伤及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)抑制剂预处理对大鼠心肺复苏后脑缺血再灌注损伤及Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法建立大鼠心肺复苏模型(封闭气管3~4 min),随机分为模型组,甘草酸(HMGB1抑制剂)低、中、高剂量组(分别以1、2、3 mg/mL甘草酸溶液按体重10 mL/kg灌胃),以及乌司他丁组(按体重以50000 U/kg尾静脉注射乌司他丁),每组各12只;另设假手术组12只(仅暴露气管但不封闭气管)。观察各组神经功能缺损评分,测量计算各组大鼠脑组织含水量;采用苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠神经元受损情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中枢神经特异性蛋白(S100β)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平,以及脑组织中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot法检测脑组织TLR4/NF-κB通路蛋白TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB p65、磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB p65)表达情况。结果与假手术组相比,模型组大鼠脑组织神经元核皱缩、变性,神经元损伤,脑组织含水量、神经功能缺损评分、血清中S100β及NSE水平、脑组织IL-6及TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB p65表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,甘草酸低、中、高剂量组、乌司他丁组大鼠脑组织神经元恢复,神经功能缺损评分、脑组织含水量、血清中S100β、NSE水平、脑组织IL-6及TNF-α、TLR4、MyD88及NF-κB p65表达均降低(P<0.05),且甘草酸各剂量组间随剂量增高而降低。甘草酸高剂量组与乌司他丁组相比,上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论HMGB1抑制剂甘草酸可能对心肺复苏后大鼠脑缺血再灌注损伤有修复作用,其作用可能是通过下调TLR4/NF-κB通路实现的。

肿瘤组织中的CYP1B1及其抑制剂的抗肿瘤活性

综述细胞色素P450酶(CYP)1B1在肿瘤组织中的表达、在肿瘤的发生发展和诊断与干预中的作用以及其抑制剂的研发和抗肿瘤活性。CYP1B1在正常组织中低表达,而在许多肿瘤组织中则特异性高表达,可激活和代谢产生致癌物质,并可致多种抗癌药物代谢失活而使肿瘤耐药,因此它既可用于早期癌症的诊断,又可作为理想的抗肿瘤作用靶点而用于药物研发。

通路抑制剂对Tax诱导的Bcl-3的影响及其在NF-κB激活中作用的研究

目的:通过研究不同通路的抑制剂在TaxP细胞(稳定表达Tax的Jurkat亚细胞系)中对Bcl-3(Human B-cellleukemia protein 3)表达的影响和shRNA Bcl-3对NF-κB转录激活作用的影响,探讨Tax阳性细胞中调控Bcl-3的通路及Bcl-3在NF-κB通路中的作用。方法:将TaxP细胞分别用NF-κB(Nuclear factor-κB)抑制剂、GSK(Glycogen synthase kinase)抑制剂和蛋白酶抑制剂处理后,Western blot检测Bcl-3蛋白的表达情况;将Bcl-3的shRNA质粒转入TaxP细胞中,RT-PCR检测Bcl-3mRNA的表达抑制情况;共转染Bcl-3的shRNA和pNF-κB-luc质粒至Jurkat和TaxP细胞中,检测抑制Bcl-3表达后对NF-κB转录活性的影响。结果:Bcl-3的表达不受GSK抑制剂的影响,但在蛋白酶抑制后有明显的升高;RT-PCR的结果表明,在转染Bcl-3 shRNA质粒后,Bcl-3的mRNA表达有明显的下降,荧光素酶活性结果显示Bcl-3在Jurkat和TaxP细胞中被抑制后NF-κB的转录活性明显下降(P<0.05)。结论:Tax诱导的Bcl-3表达不依赖于GSK通路,而NF-κB通路参与了Bcl-3的调控,说明Bcl-3在NF-κB的激活中发挥着促进作用。

COX-2抑制剂抑制小鼠胃癌NF-κB激活的实验观察

目的观察非甾体消炎药在动物体内抑制胃癌NF-κB激活的效应,探讨其抗癌机制。方法建立人胃癌细胞SGC7901裸鼠种植瘤模型,随机分为3组:舒林酸组(8 mg)、塞来昔布组(10 mg)和对照组(阿拉伯树胶50mg);采用ELISA法检测活性NFκ-B水平。结果舒林酸组(0.46±0.31)和塞来昔布组(0.23±0.08)活性NF-κB水平较对照组(0.84±0.58)明显下降(F分别为3.98、3.65,P均<0.05),舒林酸组与塞来昔布组之间差异无显著性(P>0.05)。结论非甾体消炎药在体内具有显著抗胃癌效应,抑制NFκ-B激活可能是其发挥抗癌的机制之一。

含吡啶的二芳醚类化合物的合成及其PDE4B抑制活性

磷酸二酯酶4B(PDE4B)是抗炎药物作用的重要靶标,以三嗪类PDE4B抑制剂A33为先导化合物,设计并合成了20个二芳醚类化合物.用1H NMR、^(13)C NMR等对化合物进行了结构表征,并对这些化合物进行了PDE4B抑制活性测试.结果表明:化合物3和4a表现出较好的PDE4B抑制活性,展现出它们作为进一步优化和开发更有效PDE4B抑制剂的先导化合物的潜力.

核因子κB活性抑制剂定量构效关系

用量子化学密度泛函及分子力学方法,计算了一系列喹唑啉衍生物分子的电子结构、几何结构及分子性质(广义结构)的各种参数,用以探讨该类药物分子的结构与对核因子抑制活性的关系.通过逐步回归分析,筛选出主要因素,建立了定量构效关系方程.结果表明,化合物的环D上17位碳原子上的取代基X的疏水参数、环A中R1取代基上第一个原子的净电荷及该取代基的立体参数,以及环A上3位碳原子的净电荷与化合物的抑制活性紧密相关,它们是影响化合物抑制活性的主要因素.采用“leaveoneout”法进行预报检验,其交叉检验相关系数较大,表明所得的模型有较强的预报能力.方程入选的都是可计算参数,这有利于计算机辅助该类NFκB活性抑制剂的分子设计.