NF-κB受体激活蛋白配体抗体抑制T细胞介导的牙周骨吸收

目的通过牙周病动物模型，评价NF-κB受体激活蛋白配体（receptor activator of NF-κB ligand，RANKL）抗体对T细胞诱导的牙周骨吸收的作用。方法经鼠尾静脉回输体外分离、纯化、扩增的T淋巴细胞，牙龈局部微量注射T细胞特异性抗原，形成牙周病动物模型，实验前1d及实验第1、3d，在牙龈同样部位注射不同浓度RANKLF（ab’）2抗体片段进行干预。酶联免疫吸附测定法检测血清中鼠抗兔IgG抗体水平及牙龈组织中可溶性RANKL（soluble RANKL，sRANKL）的表达水平；显微镜下测量上颌磨牙牙槽骨吸收；抗酒石酸酸性磷酸酶染色法测定牙槽骨表面破骨细胞的形成。结果鼠牙周病模型经RANKL抗体干预后，小剂量抗体（O．015、0．15及1．5斗∥鼠）不产生免疫性，与实验当天相比差异无统计学意义（P〉0。05）；高浓度组（10μ/鼠）在实验后7、10d测得的血清中鼠抗兔IgGA_405，值分别为0．64±O．12及0．55±0．03，差异有统计学意义（P〈0．01），可产生明显的免疫反应；牙龈组织匀浆液中sRANKL的表达水平及牙槽骨吸收明显减少，除0．015μg组与对照组相比差异无统计学意义外，其他浓度抗体组牙龈组织中sRANKL的表达水平（由279．11±19．32分别降至146．03±11．21、118．24±20．52、110．72±7．11）及牙槽骨吸收率（由20．83±0．78分别降至15．95±1．21、12．72±0．82、12．61±0．79）均明显减少，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）；牙槽骨表面的破骨样细胞数也明显减少[由（83．57±7．73）个／mm减少至（58．07±9．57）个／mm]，抗体组与非抗体组相比差异有统计学意义（P〈0．05）；牙龈组织中RANKL的表达与牙周骨吸收呈显著正相关（r^2=0．995，P〈0．01）。结论RANKL抗体可通过减少RANKL的表达水平，直接阻断RANKL的作用，抑制T细胞诱导的牙周骨吸收。

miR-3911对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的探讨微小RNA(miRNA)-3911对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响及其作用机制。方法实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测卵巢癌细胞株(A2780、OC3、HO-8910、SKOV-3)及正常卵巢上皮细胞(IOSE80)中miR-3911的表达水平,选择miR-3911表达水平最低的卵巢癌细胞作为实验对象,分为两组:control组和miR-3911组,分别转染无意义序列NC mimic和miR-3911 mimic。qRT-PCR检测转染细胞中miR-3911的表达水平。采用CCK-8法和Transwell迁移实验分别检测miR-3911对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响。通过靶基因预测网站microRA.org、PITA和miRTarBase预测miR-3911的靶基因,并采用双荧光素酶报告基因实验验证。qRT-PCR和Western blot检测转染细胞中miR-3911靶基因的表达水平。Western blot检测NF-κB信号通路蛋白NF-κB、p-IκBα、p-p65表达。结果与IOSE80细胞相比,卵巢癌细胞株(A2780、OC3、HO-8910、SKOV-3)中miR-3911的表达水平显著降低(P<0.01),HO-8910细胞中miR-3911表达水平最低(P<0.01)。与control组相比,miR-3911组HO-8910细胞增殖能力明显降低(P<0.05),迁移能力受到抑制(P<0.01)。靶基因预测网站和双荧光素酶报告基因结果显示,NF-κB激活蛋白(NF-κB activating protein,NKAP)是miR-3911的靶基因(P<0.01)。与control组比较,miR-3911组HO-8910细胞中NKAP基因表达水平显著降低(P<0.01),NF-κB信号通路蛋白NF-κB、p-IκBα、p-p65表达降低(P<0.01)。结论miR-3911在卵巢癌细胞株中呈低表达,miR-3911通过靶向负调控NKAP表达抑制NF-κB信号通路活化,降低卵巢癌HO-8910细胞的增殖和迁移能力。

基于OPG/RANKL/RANK信号通路探讨桂枝芍药知母汤对胶原诱导性关节炎大鼠的影响

目的基于护骨因子(OPG)/NF-κB受体激活蛋白配体(RANKL)/NF-κB受体激活蛋白(RANK)信号通路探究桂枝芍药知母汤对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠骨破坏与骨保护相关因子的影响。方法60只雌性Wistar大鼠按照体质量随机分为6组,正常组、模型组、雷公藤多苷组(0.01 g/kg)、桂枝芍药知母汤低剂量组(8.6 g/kg)、桂枝芍药知母汤中剂量组(17.2 g/kg)、桂枝芍药知母汤高剂量组(34.4 g/kg),每组10只。除正常组外,其他大鼠第1、8天使用牛Ⅱ型胶原蛋白(100μg)复制CIA模型,在大鼠左足足底和尾根部位注射。造模成功后灌胃给药4周。监测大鼠一般状态、体质量及关节炎指数(AI)评分,酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中RANKL、OPG的含量,实时荧光PCR法与蛋白质印迹法分别测定踝关节中RANKL、RANK、OPG mRNA与蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组一般状态欠佳,足趾肿胀明显,AI评分升高,血清RANKL含量升高、OPG含量降低,踝关节RANKL、RANK mRNA与蛋白表达均升高(均P<0.05)。与模型组比较,桂枝芍药知母汤各剂量组大鼠足趾肿胀程度与AI评分下降,血清RANKL含量降低、OPG含量升高,踝关节中RANKL、RANK mRNA与蛋白表达均降低,OPG mRNA与蛋白表达均升高,踝关节RANKL/OPG值降低(均P<0.05)。结论桂枝芍药知母汤能够改善CIA模型大鼠关节的骨破坏情况,其作用机制可能与降低RANKL水平、降低RANKL/OPG值、调控骨平衡有关。