NF-κB诱导激酶基因突变对CD4^+CD25^+调节性T细胞产生的影响

目的 :探讨NIK基因变异鼠—aly鼠自身免疫病的产生与CD4+ CD2 5 + 调节性T细胞的相关性。方法 :利用NIK基因自然突变鼠—aly aly鼠做为动物模型 ,aly +小鼠做为NIK基因正常对照鼠 ;CD4+ CD2 5 + T细胞亚群鉴定采用流式细胞分析仪 (FACS) ;用免疫组织化学方法观察胸腺结构。结果 :aly小鼠的CD4+ CD2 5 + CD8- 胸腺细胞数量和脾脏CD4+ CD2 5 + CD8- T淋巴细胞的数量明显低于aly +小鼠 ;aly小鼠胸腺髓质缺少UEA 1阳性细胞。结论 :NIK基因突变的aly小鼠CD4+ CD2 5 + 胸腺细胞和脾脏T淋巴细胞的数量明显降低可能是aly小鼠自身免疫病产生的原因 ;UEA 1阳性细胞很可能在CD4+ CD2 5 + 调节性T细胞选择中发挥作用。

基于NIK/IKKα信号通路探讨肾必宁颗粒改善IgA肾病大鼠肾损伤的作用机制

目的研究肾必宁颗粒对IgA肾病(IgAN)模型大鼠肾脏NF-κB诱导激酶/IκB激酶α(NIK/IKKα)信号通路的影响,评估其在改善肾脏损伤中的作用并探讨其潜在机制。方法将54只SPF级雄性SD大鼠适应性饲养1周后,随机取10只为对照组,其余44只采用联合牛血清白蛋白(BSA)灌胃、尾静脉注射脂多糖(LPS)、皮下注射四氯化碳(CCl_4)和蓖麻油综合措施诱导建立IgAN大鼠模型持续9周。确定造模成功后随机将其分为模型组10只、泼尼松(6.25mg·kg^(-1))组10只、中药低剂量(肾必宁颗粒,12.2g·kg^(-1))组12只、中药高剂量(肾必宁颗粒,24.4g·kg^(-1))组12只。对照组及模型组灌服生理盐水,治疗组分别给与对应剂量药物灌胃,每日1次,持续6周。实验结束时收集各组大鼠24 h尿液、血清和肾组织标本。生化检测各组大鼠尿红细胞计数(URBCC)、24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、谷丙转氨酶(ALT)、血清白蛋白(ALB);苏木精-伊红(HE)染色法检测肾组织病理改变;蛋白免疫印迹法(WB)及实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分别检测肾组织中NIK、IKKα蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠ALT、BUN、SCr、24h-UTP、URBCC水平显著升高(P<0.01),ALB显著降低(P<0.01),HE染色显示肾脏病理损伤较重,同时肾组织NIK、IKKα蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,泼尼松组和中药组ALT、BUN、SCr、24h-UTP、URBCC含量显著降低(P<0.01),ALB显著升高(P<0.01),肾脏病理损伤较轻,同时肾组织NIK、IKKα蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0.01);不同剂量的中药组表现出一定的量效趋势。结论肾必宁颗粒能够改善IgAN模型大鼠的肾脏病理损伤,具有降低蛋白尿和保护肾功能的作用,其机制可能与其调节肾脏NIK/IKKα通路进而降低肾组织炎症水平有关。

NIK诱导非酒精性脂肪肝的机制研究

为了探讨NF-κB诱导激酶(NIK)诱导非酒精性脂肪肝(NAFLD)的分子机制,选用ob/ob雄性小鼠作为NAFLD模型,在ob/ob小鼠肝脏表达NIK失活突变体(NIKKA),抑制内源性NIK活性。在正常小鼠肝脏过表达NIK,升高肝脏NIK活性。测定小鼠肝脏甘油三酯(TG)水平和原代肝细胞脂肪酸β-氧化速度;RT-PCR试验方法测定脂肪酸β-氧化关键基因CPT-1αmRNA水平;Western Blot和Luciferase检测过氧化物酶体增生物激活受体α(PPARα)蛋白的水平和活性。结果显示:NIKKA下调ob/ob小鼠肝脏TG水平,过表达NIK显著增加正常小鼠肝脏中TG水平;NIK抑制肝脏游离脂肪酸β-氧化,并抑制氧化关键酶肉毒碱棕榈酰转移酶-1α(CPT-1α)的表达;NIK激活NF-κB1(p50/p65)、NF-κB2(p52/RelB),后两者竞争性抑制PPARα,降低其对CPT-1α的转录。NIK通过下调PPARα的转录活性,抑制肝脏脂肪酸氧化,进而促进NAFLD的发展。

TIPE2在脓毒症小鼠急性肺损伤内源性保护机制中的作用:与TAK1/p38MAPK/NF-κB信号通路的关系

目的评价肿瘤坏死因子α诱导蛋白家族8-样蛋白2(TIPE2)在脓毒症小鼠急性肺损伤内源性保护机制中的作用及其与转化生长因子-β激活的蛋白激酶(TAK1)/p38-丝裂原活化的磷酸激酶(p38 MAPK)/NF-κB信号通路的关系。方法雄性野生型小鼠和TIPE2基因敲除小鼠各16只,6~8周龄,体重20~25 g,采用随机数字表法分别分为野生型假手术组(WT-sham组)、野生型ALI组(WT-ALI组)、TIPE2基因敲除型假手术组(KO-sham组)和TIPE2基因敲除急性肺损伤组(KO-ALI组),每组8只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型。于术后24 h时处死小鼠并留取左侧颈总动脉血标本和肺组织标本。HE染色观察肺组织病理结果并进行肺损伤评分;采集左侧颈总动脉血进行血气分析并计算氧合指数(OI);检测每组小鼠肺泡灌洗液中性粒细胞(PMN)计数;采用Western blot法检测肺组织TIPE2、p-TAK1、p-p38 MAPK和p-NF-κB p65的表达;ELISA法检测血清IL-1β和IL-6的浓度。结果与WT-sham组比较,WT-ALI组和KO-ALI组小鼠肺损伤评分、PMN计数、肺组织p-TAK1、p-p38 MAPK和p-NF-κB p65表达水平和血清IL-1β和IL-6浓度升高,PaO_(2)、OI和肺组织TIPE2表达水平降低(P<0.05);与WT-ALI组比较,KO-ALI组小鼠肺损伤评分、PMN计数、肺组织p-TAK1、p-p38 MAPK和p-NF-κB p65表达水平和血清IL-1β和IL-6浓度升高,PaO_(2)、OI和肺组织TIPE2表达水平降低(P<0.05)。结论TIPE2参与了脓毒症小鼠急性肺损伤的内源性保护机制,与抑制TAK1/p38 MAPK/NF-κB信号通路激活有关。

高致病性禽流感H5N1 NP蛋白与NIK蛋白相互作用初步研究

目的研究高致病性禽流感H5N1(A/goose/Jilin/hb/2003)核蛋白(NP)与NF-κB诱导激酶(NIK)是否存在蛋白质相互作用,探讨H5N1 NP对NIK诱导的NF-κB转录活性的影响。方法从人宫颈癌细胞系He La细胞的总RNA中经逆转录和PCR获得NIK的全长cDNA双链片段,分别以其和pcDNA3-Flag-NP载体为模板,p CMVMyc-N和pGEX-4T-1为载体,构建真核表达载体pCMV-Myc-NIK和原核表达载体pGEX-4T-1-NP(GST-NP),并通过免疫共沉淀及GST pull-down实验检测H5N1 NP和NIK之间是否存在相互作用,利用双荧光素酶报告基因系统检测H5N1 NP对NIK诱导的NF-κB转录活性的影响。结果免疫共沉淀及GST pull-down实验表明,构建的真核表达载体pCMV-Myc-NIK和原核表达载体pGEX-4T-1-NP(GST-NP)均能正确表达,H5N1 NP与NIK之间存在相互作用;报告基因结果显示,H5N1 NP蛋白能明显抑制NIK诱导的NF-κB转录活性。结论 H5N1 NP与NIK之间存在蛋白质相互作用,并抑制NIK诱导的NF-κB转录活性,为进一步研究H5N1的致病机制打下基础。

脑缺血后自噬调控的信号通路

大量证据显示，自噬参与了脑缺血再灌注的发生和发展过程，自噬及其相关信号转导通路很可能是缺血性脑损伤的有效治疗靶点。文章对脑缺血后自噬调控的相关信号转导通路进行了综述。