珍宝丸介导NF-κB/p65通路对脊髓损伤大鼠的神经保护作用

目的探讨珍宝丸对脊髓损伤大鼠的神经保护作用及相关机制。方法60只SD大鼠随机均分为对照组、模型组和珍宝丸组,对照组大鼠仅暴露脊髓,模型组和珍宝丸组大鼠均构建脊髓损伤模型。造模成功后,珍宝丸组大鼠给予口服0.6 g/kg珍宝丸干预治疗,间隔24 h给药1次,持续给药28 d,对照组和模型组大鼠则给予相同剂量的生理盐水灌胃。采用巴索·比蒂·布雷斯纳汉(BBB)评分法评估干预治疗前和治疗后4周各组大鼠运动行为学变化;实验结束取大鼠脊髓组织标本,通过HE染色和TUNEL染色法观察评估大鼠脊髓组织病理学变化及神经细胞凋亡情况;通过qRT-PCR法检测炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10的表达情况;采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)/p65通路相关蛋白的表达情况。结果干预治疗后4周,模型组大鼠BBB评分低于对照组,珍宝丸组大鼠BBB评分高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组大鼠脊髓组织结构、形态正常;模型组大鼠脊髓组织结构紊乱,有明显出血、坏死、水肿,大量炎性细胞浸润;珍宝丸组大鼠脊髓组织病变程度较模型组明显减轻。珍宝丸组脊髓组织细胞凋亡数较模型组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,模型组脊髓组织中TNF-α和IL-6表达升高,IL-10表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,珍宝丸组脊髓组织中TNF-α和IL-6表达显著降低,IL-10表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠脊髓组织中NF-κB/p65和p-NF-κB/p65蛋白表达均较对照组上调,差异有统计学意义(P<0.05);珍宝丸组大鼠脊髓组织中NF-κB/p65和p-NF-κB/p65蛋白表达均较模型组下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论珍宝丸治疗能够有效改善脊髓损伤大鼠行为学症状,减轻其病理变化,具有神经保护作用,其作用机制可能与阻断NF-κB/p65通路、抑制炎症因子表达有关。

TPPU通过抑制p38 MAPK/NF-κB p65信号通路对阿尔茨海默病细胞模型的抗神经炎症作用

目的在Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)小胶质细胞(BV2细胞)模型中,采用对BV2细胞进行干预,探讨1-三氟甲氧基苯基-3-(1-丙酰哌啶-4-基)脲(TPPU),TPPU是否具有抗神经炎症作用及其可能的抗炎机制。方法利用Aβ25-35作用BV2细胞构建AD细胞模型,CCK8法分别检测不同浓度Aβ25-35和TPPU处理对BV2细胞活性的影响,最终选择20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为造模组,0.1μM TPPU预处理BV2细胞3h,20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为治疗组进行后续实验。利用ELISA法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,倒置荧光显微镜检测活性氧(ROS)产生,real-time PCR检测小胶质细胞M1表型促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1β(IL-1β)基因mRNA表达水平和检测M2表型抗炎因子IL-10及标志物Arg1基因mRNA表达水平。通过Western blot法检测细胞中炎症因子TNF-α蛋白及p38 MAPK/NF-κB p65信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组BV2细胞活力降低(P<0.05),ROS显著升高(P<0.05),MDA含量显著增多(P<0.05),SOD活性显著下降(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显上调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显下调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组相比,经TPPU预处理后,BV2细胞活力明显升高(P<0.05),ROS显著降低(P<0.05),MDA含量显著下降(P<0.05),SOD活性显著提高(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显下调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显上调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论TPPU抑制Aβ25-35诱导的BV2细胞炎症反应,促进BV2细胞由M1表型向M2表型极化,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB p65信号通路激活有关。

归原疏筋合剂治疗腰椎间盘突出症的临床疗效及对血清NF-κB p65表达水平的影响

【目的】探究归原疏筋合剂治疗腰椎间盘突出症(LDH)患者的临床疗效及其可能的作用机制。【方法】将68例气滞血瘀证LDH患者随机分为试验组和对照组,每组各34例。对照组给予塞来昔布及甲钴胺片内服治疗,试验组在对照组的基础上加用归原疏筋合剂内服治疗,疗程为4周。观察2组患者治疗前后腰痛和下肢痛视觉模拟量表(VAS)评分、Oswestry功能障碍指数(ODI)评分、改良日本骨科协会(JOA)评分以及血清炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)]和血清核因子κB p65(NF-κB p65)水平的变化情况,并评价2组患者的临床疗效和用药安全性。【结果】(1)脱落情况方面,研究过程中,试验组脱落1例,对照组脱落3例,最终试验组33例、对照组31例纳入疗效统计。(2)疗效方面,治疗4周后,试验组的总有效率为96.97%(32/33),对照组为87.10%(27/31);组间比较(秩和检验),试验组的疗效明显优于对照组(P<0.05)。(3)量表评分方面,治疗后,2组患者的腰痛及下肢痛VAS评分、ODI评分均较治疗前降低(P<0.05或P<0.01),改良JOA评分均较治疗前升高(P<0.01),且试验组对腰痛及下肢痛VAS评分、ODI评分的降低幅度及对改良JOA评分的升高幅度均明显优于对照组(P<0.05或P<0.01)。(4)血清炎症相关指标方面,治疗后,2组患者血清TNF-α、IL-6、IL-1β、NF-κB p65水平均较治疗前降低(P<0.01),且试验组的降低幅度均明显优于对照组(P<0.01)。(5)安全性方面,治疗过程中,试验组的不良事件发生率为2.94%(1/34),对照组为8.82%(3/34),组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】归原疏筋合剂治疗气滞血瘀证LDH患者疗效确切,可有效缓解患者疼痛症状,改善患者腰椎功能,降低血清炎症因子及NF-κB p65表达水平,其作用机制可能与降低炎症因子水平,抑制NF-κB信号通路的活化有关。

Liu-Jun-Zi decoction alleviates chemotherapy-induced anorexia by regulating gut microbiota and TLR4/MyD88/NF-κB p65 signaling pathway

Background:Liu-Jun-Zi decoction(LJZD),a classical nourishing formula in China,has been proven to be effective in treating chemotherapy-induced anorexia.In this study,the mechanism of LJZD in alleviating chemotherapy-induced anorexia was discussed from the aspects of regulating gut microbiota,repairing intestinal barrier injury and inhibiting inflammatory pathways.Methods:A rat model of chemotherapy-induced anorexia was established using cisplatin.The study evaluated the therapeutic effects of LJZD by observing the weight,food intake,and intestinal pathology of rats.The impact of LJZD on gut microbiota and metabolites,specifically short-chain fatty acids,was investigated through gut microbiota analysis and targeted metabolomics.The anti-inflammatory and intestinal protective effects of LJZD were assessed by examining the expression of intestinal tight junction proteins associated with the inflammatory pathway.Results:LJZD alleviated cisplatin-induced inflammation and intestinal barrier disruption,as evidenced by upregulated expression of tight junction protein 1(TJ-1)and occludin,along with reduced serum levels of interleukin 6(IL-6),interleukin-1β(IL-1β),tumor necrosis factor-α(TNF-α),and lipopolysaccharide.Additionally,LJZD alleviated microbiota imbalance and regulated the levels of short-chain fatty acids,especially increased the relative abundance of Coriobacteriales Incertae Sedis,Lactabacillus johnsonii F19785,Parasutterella,and reduced the Tyzzerella.In the hypothalamus,LJZD exerts suppressive effects on the toll-like receptor 4(TLR4)/myeloid differentiation factor 88(MyD88)/nuclear factor-κB(NF-κB)p65 signaling pathway,leading to a downregulation in the transcriptional activity of IL-6 and IL-1β,as well as Interleukin 6 receptors(IL-6R)and Interleukin-1βreceptors(IL-1R1)mRNA expression levels.Conclusion:In summary,LJZD alleviate chemotherapy-induced anorexia by modulating the gut microbiota,repairing the intestinal mechanical barriers,and suppressing the TLR4/MyD88/NF-κB p65 signaling pathway.

NF-κB p65通过miR-150/TRPC6信号通路改善肾缺血再灌注损伤

目的 探究NF-κB(nuclear transcription factor-κB, NF-κB)p65通过miR-150/瞬时受体电位阳离子通道6(transient receptor potential cation channel 6, TRPC6)信号通路促进肾缺血再灌注损伤的作用。方法 选取2022年8月—2023年8月由齐齐哈尔医学院医药科学研究院购买的60只雄性大鼠作为研究对象,将体质量相似的大鼠按照随机数字表法随机分为3组:假手术实验组(Sham组,n=10)、缺血/再灌注(ischemic/reperfusion, I/R)I/R实验组(n=10)、慢病毒实验组(n=40),其中慢病毒实验组分为miR-150-mimic组(n=10)、I/R+miR-150-mimic组(n=10)、NF-κB p65-si组(n=10)、I/R+NF-κB p65-si组(n=10)。评估各组大鼠肾组织中血清肌酐(creatinine, Cr)和血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、炎性因子、miR-150、NF-κB p65、TRPC6的水平。结果 I/R实验组与Sham组比较,NF-κB p65、miR-150蛋白水平降低(0.26±0.02 vs 0.79±0.03、0.34±0.08vs 1.46±0.12),TRPC6蛋白水平下降(0.35±0.04 vs. 1.08±0.15),差异有统计学意义(t=46.484、24.558、8.603,P均<0.05)。与I/R实验组相比,I/R+miR-150-mimic组TRPC6水平升高,而炎症因子水平更低,I/R+NF-κB p65-si组miR-150水平更高,炎症因子水平升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 NF-κB p65通过调节miR-150/TRPC6信号通路影响肾功能及炎症,改善肾缺血再灌注损伤。

黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用及血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)、cAMP和脑组织NF-κB表达的影响

目的:观察黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用并探讨其作用机制。方法:采用背部皮下注射干酵母构建大鼠发热模型,SD雄性大鼠随机分为正常对照,模型组,阳性组(阿司匹林,0.1 g/kg),黄芩苷高、中、低剂量组(160、80、40 mg/kg),连续给药3 d,测定各组大鼠肛温的变化;酶联免疫法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))与环磷酸腺苷(cAMP)水平;Western Blot检测各组大鼠脑组织NF-κB p65(核转录因子-κB p65)蛋白表达。结果:黄芩苷高剂量组有显著解热效果(P<0.01),黄芩苷各剂量组均可不同程度降低大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE 2和cAMP含量;与正常组比较,模型组脑组织NF-κB p65蛋白表达增多,黄芩苷高剂量组可明显降低大鼠脑组织NF-κB p65表达(P<0.05)。结论:黄芩苷可显著性降低干酵母引起的体温升高,解热机制可能与抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)与cAMP的分泌和减少脑组织NF-κB p65蛋白表达有关。

白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠的保护作用及对TGF-β_1、NF-κB p65分子表达的影响

目的:研究白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠的影响及其机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、泼尼松阳性对照组及白茅根石油醚部位组、乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组、水部位组,一次性尾静脉注射阿霉素(ADR)复制阿霉素肾病模型,灌胃给药8 w。于造模前1 d及造模后每周末将大鼠放入代谢笼中,收集24 h尿液,全自动生化仪检测尿蛋白含量。于末次给药24 h后,眼眶取血,全自动生化仪检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量;ELISA法检测血清TNF-α含量,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、NF-κB p65的表达;光镜下观察肾脏组织病理学改变。结果:与模型组比较,白茅根提取物乙酸乙酯部位组大鼠24 h尿蛋白在第6、7、8周显著降低,TP、ALB含量显著升高,炎性细胞因子TNF-α含量以及TGF-β1、NF-κB p65阳性率显著降低;正丁醇部位组、水部位组TG含量显著降低,24 h尿蛋白含量分别在7、6周显著降低;光镜下病理形态学观察显示乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位组大鼠肾组织损伤明显改善。结论:白茅根不同提取物对阿霉素肾病大鼠有不同程度的保护作用,其中乙酸乙酯部位组作用最强,其作用机制可能是通过降低TGF-β1以及NF-κB p65的表达,抑制TNF-α的活性,进而改善阿霉素肾病大鼠肾组织病变。

丁苯酞对缺血性脑卒中大鼠脑组织NF-κB p65、IL-6、TNF-α表达的影响

目的:观察丁苯酞对缺血性脑卒中大鼠脑组织NF-κB p65、IL-6、TNF-α表达的影响,阐明其作用机制。方法:将50只大鼠随机分为假手术组、模型组、丁苯酞低、中、高剂量组(剂量分别为20、40、60 mg/kg)。模型组、丁苯酞低、中、高剂量采用右侧大脑中动脉阻塞法建立大鼠缺血性脑卒中模型,假手术组不进行栓线操作。采用Bederson法对大鼠进行神经功能评分,采用TTC染色法观察大鼠脑梗死体积,Western blot检测大鼠脑组织NF-κB p65蛋白表达水平,采用免疫荧光方法观察NF-κB p65入核情况。酶联免疫吸附检测大鼠脑组织IL-6、TNF-α水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分和脑梗死体积显著增加,脑组织NF-κB p65蛋白表达水平显著升高,NF-κB p65入核显著增加,IL-6、TNF-α水平显著增加( P <0.05)。与模型组比较,丁苯酞低、中、高剂量组神经功能评分和脑梗死体积显著减少,脑组织NF-κB p65蛋白表达水平显著降低,NF-κB p65入核显著减少,IL-6、TNF-α水平显著降低( P <0.05)。结论:丁苯酞对缺血性脑卒中有保护作用,其机制与抑制脑组织NF-κB p65活化,降低脑组织炎性因子IL-6、TNF-α水平有关。

溃疡性结肠炎小鼠肠道通透性改变与TNF-α及NF-κB P65的关系

目的:采用2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)定量灌胃诱导小鼠溃疡性结肠炎(UC),观察小鼠结肠通透性改变与肿瘤坏死因子α(TNF-α)及NF-κB p65的关系。方法:48只ICR小鼠随机分为2组(n=24):对照组和模型组。模型组小鼠给予2.5%DSS定量灌胃诱发小鼠急性UC,对照组小鼠予同体积的蒸馏水灌胃代替。记录两组小鼠疾病活动指数(DAI),9 d后测定两组小鼠结肠组织病理学评分、结肠通透性、TNF-α及NF-κB p65。统计分析DAI、结肠通透性、TNF-α与NF-κB p65之间的相关性。结果:与对照组比较,模型组小鼠DAI、结肠病理学评分、结肠通透性、TNF-α、NF-κB p65均显著增高(P均<0.01)。小鼠DAI增高与结肠通透性密切相关(P均<0.01),结肠通透性增高与TNF-α、NF-κB p65密切相关(P均<0.01)。结论:与对照组小鼠相比,DSS造模小鼠的结肠通透性显著增高,并与TNF-α、NF-κB p65增高呈正相关。TNF-α、NF-κB p65增高导致结肠通透性增高,进而导致炎症免疫反应过度增强,可能是UC发病的重要环节。

霍山石斛水提取物通过介导NF-κB/p65和p38 MAPK减轻小鼠酒精性肝损伤

本研究主要探讨霍山石斛水提取物对酒精性肝损伤小鼠的保护作用及其机制。将60只昆明小鼠随机均分成5组,正常组喂饲普通饲料,模型组喂饲普通饲料+52%白酒[12 m L/(kg·bw)]灌胃,低、中、高剂量石斛组喂饲普通饲料+霍山石斛水提取物(1 g/kg、5 g/kg和10 g/kg)灌胃+52%白酒灌胃。40 d后,测肝功能指标(ALT、AST)、氧化应激指标(SOD、MDA)、炎症因子指标(CRP、TNF-α),肝脏做HE染色切片观察,Western blot检测了小鼠肝脏组织中NF-κB/p65和p38 MAPK的磷酸化水平。切片可见,中、高剂量石斛组肝脏组织损伤情况较模型组明显减轻。中、高剂量石斛组较模型组SOD升高(P<0.01),ALT、AST、MDA、CRP和TNF-ɑ降低(P<0.01)。高剂量霍山石斛水提取物可显著抑制酒精性肝损伤诱导的NF-κB/p65和p38 MAPK的磷酸化水平升高。结果表明,霍山石斛水提取物可降低酒精对肝细胞的损伤作用,其作用机制可能是通过介导NF-κB/p65和p38 MAPK发挥抗氧化、抗炎作用来实现的。

艾灸对克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65及TNF-α、IL-1β调节作用的研究

目的:通过观察隔药灸对克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65及炎症因子TNF-α、IL-1β表达的影响,探讨艾灸治疗克罗恩病的效应机制。方法:清洁级雄性SD大鼠随机分为4组,分别为正常组、模型组、隔药灸组和西药组,采用三硝基苯磺酸(TN-BS)合乙醇溶液灌肠制备克罗恩病大鼠模型,模型制备成功后,隔药灸组取天枢穴(双)、气海穴进行隔药灸治疗,西药组采用美沙拉秦灌胃治疗。治疗结束后,采用HE染色,光镜下观察各组大鼠结肠组织病理学变化,应用免疫组织化学技术观察各组大鼠结肠NF-κB p65与TNF-α、IL-1β的表达,并进行图像分析。结果:与正常组比较,模型组大鼠结肠组织呈现裂隙状溃疡及炎症表现,部分大鼠结肠在黏膜下层可见肉芽肿形成,结肠NF-κB p65、TNF-α、IL-1β的表达均显著增高(均P<0.01);与模型组比较,隔药灸组、西药组大鼠结肠形态结构改善,肠道炎症减轻,结肠NF-κB p65与TNF-α、IL-1β的表达均显著降低(均P<0.01);相关性分析结果显示,TNF-α、IL-1β的表达与NF-κB p65的表达均呈正相关性。结论:隔药灸能下调克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65、TNF-α、IL-1β的表达;艾灸(隔药灸)可能通过抑制克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65的表达,进而减少其下游炎症因子TNF-α、IL-1β的表达,从而减轻肠道炎症,改善结肠组织形态结构,发挥治疗作用。

Wnt2B通过NF-κB/p65调节乳腺癌细胞的凋亡

目的研究Wnt2B对乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡的影响,探讨其在乳腺癌发生发展过程中的重要作用。方法应用免疫组化技术检测40例乳腺癌组织标本中Wnt2B的表达;应用Western blot检测乳腺癌配对细胞系MDA-MB-231和MCF-7中Wnt2B蛋白水平;通过瞬时转染Wnt2B特异的siRNA沉默高表达Wnt2B的MDA-MB-231细胞系后,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡水平;应用Western blot、共聚焦显微镜和凝胶电泳迁移实验(EM-SA)检测下调Wnt2B表达后对NF-κB/p65的表达和活性的影响。结果相对于Wnt2B阴性表达的正常乳腺组织,35例乳腺癌组织的表达呈强阳性并且存在核浆转移现象;在高转移细胞系MDA-MB-231中Wnt2B表达明显高于低转移细胞系MCF-7;针对Wnt2B的siRNA沉默成功下调MDA-MB-231中Wnt2B表达后,细胞凋亡率明显增加并伴随NF-κB/p65的表达下降和活性降低;应用NF-κB/p65特异性的抑制剂PDTC阻断此通路后,Wnt2BsiRNA诱导细胞的凋亡效应被阻断。结论 Wnt2BsiRNA通过NF-κB/p65通路抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231的凋亡而产生抗瘤作用,Wnt2B可能成为乳腺癌有效治疗靶点之一。

NF-κB p65,p38 MAPK在慢性间歇性缺氧大鼠肺损伤中的表达及意义

目的:探讨反复缺氧条件下,核因子κB(NF-κB)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)在慢性间歇性缺氧大鼠肺组织损伤过程中的作用。方法:40只雌性SD大鼠,随机分为对照组和缺氧组,每组20只。缺氧组大鼠每天在自动控制间歇性缺氧试验箱饲养8 h;对照组正常喂养、不加处理。所有大鼠饲养35 d后,取肺组织行HE染色、免疫组织化学测定NF-κB p65和p38 MAPK的表达;Western印迹检测肺组织NF-κB p65的表达。结果:缺氧组大鼠肺组织的病理改变明显;缺氧组肺泡间隔厚度(2.15±0.49)μm,对照组肺泡间隔厚度(0.45±0.12)μm,其差异具有统计学意义(P<0.05)。缺氧组肺组织上皮细胞、纤维细胞、炎性细胞的胞核及胞浆中NF-κB p65及p38 MAPK棕褐色阳性染色表达均明显增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。Western印迹结果显示,缺氧组NF-κB p65蛋白水平较对照组明显增加,其差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:NF-κB p65及p38 MAPK信号通路可能在间歇缺氧大鼠肺组织重构的发生发展过程中发挥重要作用。

久泻灵颗粒对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠TLR4及NF-κB p65表达的影响

目的探讨久泻灵颗粒对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB p65蛋白基因的表达的影响。方法通过灌服大黄水煎液,肌肉注射氢化可的松并结合TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)混合乙醇灌肠建立动物模型。将90只大鼠随机分为空白组、模型组、久泻灵颗粒治疗7、14、21 d组及阳性对照(SASP)组,用药治疗后采用免疫组化SP法和RT-q PCR法分别检测大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB p65蛋白和基因的表达。结果结肠黏膜形态学评分结果显示,各治疗组评分均有降低,差异有显著性(P<0.01);免疫组化SP法结果显示:TLR4、NF-κB p65在模型组大鼠中表达均显著增强(P<0.01);药物干预后各治疗组大鼠TLR4、NF-κB p65表达均减弱(P<0.05);RT-q PCR法结果显示:与空白组比较,模型组大鼠TLR4、NF-κB p65表达增强(P<0.01);与模型组比较,治疗后各组大鼠TLR4、NF-κB p65表达减弱(P<0.05)。结论久泻灵颗粒可减轻结肠黏膜炎症反应,起到修复黏膜的作用,其原因与降低脾肾阳虚型UC模型大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB p65基因的转录和蛋白的表达有关。

乙酰唑胺对慢性癫痫大鼠海马NF-κB p65、IL-1β、IL-6及TNF-α表达的影响

目的观察戊四氮(Pentylenetetrazole,PTZ)致慢性癫痫大鼠发作以及应用AQP4抑制剂乙酰唑胺(Acetazolamide,AZA)干预后对海马核因子-κB p65(NF-κB p65)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达影响,探讨AQP4与炎症因子表达间的关系及乙酰唑胺抑制癫痫发作的可能机制。方法将50只健康成年SD大鼠随机分为对照组(每日腹腔注射生理盐水)、致痫组(每日腹腔注射亚惊厥剂量PTZ35 mg/(kg·d)建立慢性癫痫大鼠模型)、乙酰唑胺干预组[每日先腹腔注射AZA35 mg/(kg·d)预处理,30 min后再腹腔注射亚惊厥剂量PTZ]。连续注射28 d,每天记录大鼠的发作级别。最后一次给药1 d后处死所有大鼠以备实验,RT-q PCR和ELISA检测大鼠海马中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达;Western blot检测海马内NF-κB p65表达。结果对照组无明显癫痫发作,RT-q PCR和ELISA检测结果显示致痫组IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著高于对照组(P<0.001);乙酰唑胺干预组的三者水平明显低于致痫组(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05);Western blot结果显示致痫组海马组织NF-κB p65的表达与对照组相比显著升高(P<0.01),而乙酰唑胺干预组表达量与致痫组相比明显下降(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05)。结论乙酰唑胺抑制癫痫的发作的作用机制可能与乙酰唑胺抑制星形胶质细胞膜上AQP4的表达、改善星形胶质细胞水肿损伤状况、下调炎性因子表达有关。

小檗碱抑制核因子NF-κB p65表达及转位改善游离脂肪酸诱导的3T3-L1细胞胰岛素抵抗的分子机制

目的 观察小檗碱对游离脂肪酸诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型核因子（nucleartran-scriptionfactorkappaB，NF-κBp65）表达及转位的影响，探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的分子机制。方法以0．5mmol／L软脂酸诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗，予以小檗碱进行干预，同时以阿司匹林作为阳性对照，用葡萄糖氧化酶法检测培液中的葡萄糖消耗量，以2-脱氧-[^3H]-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率，用Westernblot检测3T3-L1脂肪细胞总NF-κBp65蛋白及核NF-κBp65蛋白的表达，用激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）对NF．．cBp65进行定位显示。结果0．5mmol／L软脂酸作用24h使3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗降低41％，胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制67％，NF-κBp65蛋白表达明显增加，CLSM显示NF-κBp65核转位增加；同时加入小檗碱或阿司匹林则可逆转上述效应。但软脂酸、小檗碱、阿司匹林对3T3-L1脂肪细胞总NF-κBp65蛋白的表达无明显影响。结论小檗碱可以改善游离脂肪酸诱导的胰岛素抵抗，其分子机制可能是小檗碱通过抑制NF-κB的活化转位调节相关基因的表达而起作用。

电针对功能性消化不良肝郁脾虚模型大鼠十二指肠TLR4、NF-κB p65的影响

目的:探讨治疗功能性消化不良(FD)的作用机制。方法:将30只SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、电针组各10只。模型组及电针组采用多因素干预法造模20 d,空白对照组不给予任何处置。造模成功后电针组针刺足三里穴、太冲穴后接电针治疗14 d,余组不采用任何干预措施。采用ELISA(酶联免疫吸附剂测定)检测各组血清IL-6(白介素-6)、TNF-α(肿瘤坏死因子α)水平,WB(免疫印迹法)检测大鼠十二指肠TLR4(Toll样受体4)、NF-κB p65(核转录因子κB p65)表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠十二指肠TLR4、NF-κB p65表达显著增高,血清IL-6、TNF-α水平显著升高;与模型组比较,电针组大鼠十二指肠TLR4、NF-κB p65及血清IL-6、TNF-α水平显著降低。结论:电针可能通过下调十二指肠TLR4、NF-κB p65表达,降低血清IL-6、TNF-α等炎性因子水平抑制炎症反应,发挥治疗FD作用。

人参二醇组皂苷对内毒素休克大鼠心肌组织CD14、IkB和NF-κ B p65表达的影响

目的通过观察内毒素诱导的休克大鼠心肌CD14、核因子-κB抑制蛋白(IκB)和核因子-κB亚基p65(NF-κB p65)的表达变化,探讨人参二醇组皂苷(panaxadiolsaponin,PDS)对休克大鼠心肌保护作用的相关机制。方法 40只Wistar大鼠分为空白对照组(CTR)、内毒素休克模型组(LPS)、地塞米松治疗组(DEX)和人参二醇组皂苷治疗组(PDS)。LPS(5 mg/kg)舌下静脉注射复制休克模型,当动脉血压降至初始血压的2/3时作为判定休克的标准。记录不同时间段平均动脉压(mean arterial pressure,MAP),各组大鼠分别于休克后2 h和4 h测定血清谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、肌酸激酶(creatinekinase,CK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,采用R T-PCR方法检测心肌组织CD14和IκB mR NA水平,Western blotting检测CD14和NF-κBp65蛋白质表达水平。结果各组大鼠注入LPS 5min后进入休克状态,并在10min后MAP代偿性回升,但LPS组从休克第45 min MAP进行性下降,而PDS和DEX组在LPS组进入可逆性失代偿阶段后,仍维持代偿性变化;LPS组血清中AST、CK和LDH活性最强,PDS及DEX组酶活性明显低于LPS组(P<0.05);R T-PCR结果显示,LPS组IκB mR NA表达明显减弱,CD14 mR NA表达增强,给予DEX治疗后IκB和CD14 mRNA表达均降低;给予PDS治疗后IκB mRNA表达较LPS组明显增高,而CD14表达明显降低;Western blotting证实,LPS组CD14及NF-κB表达明显增高,给予DEX和PDS治疗后CD14和NF-κB表达受到抑制,其表达量接近CTR组。结论 PDS对休克大鼠心肌具有保护作用,能减轻内毒素血症时心肌表达CD14、IκB和NF-κB p65。

瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及LOX-1、NF-κBp65表达的影响

目的探讨3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-Co A)还原酶抑制剂瑞舒伐他汀对载脂蛋白E(Apo E)基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及主动脉凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、核因子-κB p65(NF-κB p65)表达的影响。方法 20只6周龄雄性Apo E基因缺陷小鼠随机分为高脂模型组(n=10)、瑞舒伐他汀药物干预组(n=10),高脂饮食喂养13周;10只6周龄C57BL/6J(野生型,W T)雄性小鼠作为正常对照组,正常饮食喂养13周。13周后,摘眼球取血测定血浆总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)的水平。处死小鼠取主动脉,行HE染色;采用Western blotting和RT-PCR检测定量分析主动脉组织LOX-1、NF-κB p65表达变化。结果与高脂模型组比较,瑞舒伐他汀药物干预组血清中TCH、TG、LDL-C水平明显降低(P<0.05)。HE染色结果显示,与正常对照组相比,高脂模型组主动脉粥样硬化病变程度明显加重,瑞舒伐他汀药物干预组主动脉粥样硬化病变程度减轻。与正常对照组相比,高脂模型组主动脉LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均明显增加(P<0.05),瑞舒伐他汀药物干预组LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均减少(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀可明显降低血脂,减轻Apo E基因缺陷小鼠主动脉组织粥样硬化病变程度,其抗动脉粥样硬化作用可能与下调LOX-1、NF-κB p65的表达有关。

人外周血中NF-κB p65定量检测方法的建立及临床应用

目的建立一种能定量测定人外周血中核转录因子-κB(nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB)p65活化量的检测方法。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,从细胞核成分中提取核蛋白,应用Bradford法进行核蛋白定量,以识别NF-κB p65不同抗原表位的2种抗NF-κB单克隆抗体为基础,建立可定量检测人外周血NF-κBp65活化量水平的双抗体夹心酶联免疫吸附实验法。应用已建立的NF-κB p65定量检测方法测定了68例微小病变型肾病综合征患者和20名健康人外周血中NF-κB p65活化量。结果本方法批内、批间变异系数分别为(9.78±3.99)%、(12.51±4.53)%,灵敏度为0.030mg/L,平均回收率为95.8%。与NF-κB突变型寡核苷酸不发生交叉反应。微小病变型肾病综合征患者治疗前外周血中NF-κB p65活化量较健康人显著增高(P<0.01),治疗后与治疗前NF-κB p65活化量差异有统计学意义(P<0.01),但与健康人NF-κB p65活化量差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究建立的人外周血中NF-κB p65活化量定量检测方法快速、特异且可靠,为临床监测NF-κB p65活化情况提供了条件。