大鼠抑郁障碍参与启动心血管组织NF-κB表达增强

目的探讨强迫游泳抑郁模型大鼠抑郁障碍与炎性标记物的相关性。方法健康SD大鼠随机分为对照组和模型组,应用21 d强迫游泳实验建立大鼠抑郁模型,模型组大鼠包括SS组(应激+0.9氯化钠注射液腹腔注射)和SI组(应激+丙米嗪腹腔注射)。应用透射免疫比浊法和酶联免疫法检测外周血炎性标记物hsCRP、MCP-1水平,应用免疫组织化学染色法检测血管组织NF-κB P65、MCP-1表达。结果应激后外周血hsCRP和MCP-1含量明显高于对照组(P<0.05),血管组织中MCP-1为35.6±7.5,NF-κB P65为31.2±6.5,表达显著增强(P<0.05),药物干预组外周血MCP-1显著回降(P<0.05),血管组织炎性标志物表达减少。结论抑郁障碍通过NF-κB表达增强进而启动炎性反应。

大鼠急性脑缺血再灌注后NOS、NF-κB的表达及意义

目的：研究大鼠急性脑缺血再灌注（I／R）后不同时间段脑组织不同部位一氧化氮合酶（NOS）、核转录因子（NF～κB）的表达及意义。方法：采用Pulsineui-Brierley法建立大鼠I/R模型。72只大鼠随机分为对照组、缺血30min组（1组）、缺血30min再灌注后0、2、4、6、8、10、12h组，于在脑组织臂旁核、室旁核、杏仁核、蓝斑所在部位作冠状切片，分别进行HE和免疫组化染色，光镜下观察各组脑组织的病理改变，并比较各组大鼠脑组织不同部位的表达。结果：脑I／R2h组脑组织神经细胞肿胀。少量炎性细胞浸润。I／R8h组脑组织神经细胞核碎裂、消失，间隙增宽，结构疏松，神经细胞局部溶解、液化性坏死范围较广。与对照组相比，其余各组脑组织不同部位NF—κB的表达均明显上调。差异有统计学意义（P均〈0．05），1／R2、4、6、8、10、12h组NOS表达明显上调，差异有统计学意义（P〈0.05）。脑缺血再灌注损伤诱导NOS表达于8h时达高峰，8～12h呈下降趋势。NF-κB表达于0～8h呈上升趋势，8～12h较稳定。结论：NOS、NF-κB在脑组织损伤过程中发挥调控作用。一氧化氮（NO）在调控中起双重作用。

NF-κBp65在豚鼠内耳的表达与分布

目的 :观察NF -κBp6 5 (nuclearfactor -kappaBp6 5 ,NF -κBp6 5 )在正常豚鼠内耳的表达与分布。方法 :健康杂色豚鼠 6只 ,取耳蜗和内淋巴囊组织 ,石蜡包埋切片 ,用大鼠NF -κBp6 5单克隆抗体行免疫组织化学 (SABC法 )常规染色 ,以正常豚鼠肾脏组织作阳性对照。结果 :在正常豚鼠内耳中 ,NF -κBp6 5主要表达于螺旋韧带和内淋巴囊及其周围组织。细胞内定位主要在胞浆内 ,仅个别细胞胞核有NF -κBp6 5表达。结论 :螺旋韧带和内淋巴囊在正常情况下含有较多的NF -κB ,提示螺旋韧带和内淋巴囊重要的功能之一是产生和分泌细胞因子 ,它们可能是调控内耳炎性反应的“中枢”部位。

NF-κB、Bcl-2与酒精性肝病

酒精性肝病(ALD)是由于长期过度饮酒而引发的一系列肝脏损害疾病。现研究表明肝细胞的凋亡对该病的发生、发展起着十分重要的作用。其中核因子κB(NF-κB)、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)与ALD关系密切。ALD患者肝细胞内活化的NF-κB,通过刺激大量炎性细胞因子释放,引发肝组织炎症、纤维化、坏死和凋亡,同时通过调控凋亡蛋白酶(Caspase)、Bcl-2、死亡受体等基因来干预肝细胞凋亡;被激活的Bcl-2,除本身具有抗凋亡功能外,还与NF-κB以复合物的形式发挥抗凋亡作用,同时与同家族促凋亡蛋白Bax以二聚体的形式依比例对肝细胞凋亡发挥抑制或促进作用。肝细胞凋亡和抗凋亡的动态失衡将成为酒精性肝病发病的重要途径之一。

猪NF-κB p65/p50亚基的原核表达及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响

为了研究经原核表达的猪细胞核转录因子NF-κB p65/p50融合蛋白对猪繁殖与呼吸综合病毒(PRRSV)体外增殖影响,本文采用RT-PCR技术扩增出编码成熟p50区和p65开放阅读框(ORF),将其克隆至pET21a(+)中,转化至Rosetta感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)对表达产物进行鉴定;纯化复性后添加到DMEM细胞维持液中,观察p65/p50对Marc145细胞毒性,确定最佳使用浓度;探讨最佳浓度的p65/p50对PRRSV体外感染增殖活力的影响,通过实时荧光定量PCR方法研究PRRSV感染时相,绘制PRRSV增殖曲线。成功构建了大量以包涵体形式表达Mr均约为70kD的p65/p50融合蛋白的p65/p50-pET21a(+)原核表达载体;Western-blot显示p50和p65重组蛋白可分别与兔抗人p50多克隆血清、兔抗人p65纯化抗体反应。确定p65/p50最佳添加浓度为0.4μg/mL。通过实时荧光定量PCR技术研究PRRSV感染时相,结果表明NF-κB p65/p50可促进PRRSV感染Marc-145CPE出现及病毒早期增殖;但CPE出现后,病毒增殖受到抑制,病毒滴度水平显著降低(P<0.05)。该结果为进一步研究PRRS的发病机理及治疗策略提供了新思路。

烧伤患者血清对单核细胞核因子κB核移位的影响

目的 观察烧伤患者血清 (以下称烧伤血清 )对单核细胞核因子κB(NF κB)异二聚体p5 0、p6 5核移位及核抑制因子κBα(IκBα)降解的影响 ,进一步探讨烧伤血清对单核细胞活化的作用。 方法 收集体外培养的人外周血单核细胞 (PBMC),分别用正常人血清、烧伤血清、烧伤血清 +吡咯烷二硫代氨基甲酸盐 (PDTC)刺激PBMC(依次分为对照组、烧伤血清组、PDTC组 ) ,应用激光共聚焦显微镜观察血清刺激 30、6 0、12 0、4 80min后PBMC的p5 0、p6 5核移位 ;采用Western印迹法检测刺激 30、6 0、90、12 0min时PBMC的IκBα蛋白降解情况。 结果 与对照组比较 ,刺激 30min后烧伤血清组PBMC中p5 0、p6 5即发生核移位 ,30～ 6 0min达高峰 ,12 0min后核内聚集减少 ,回复至刺激前状态。刺激 30min后烧伤血清组PBMCIκBα发生降解 ,刺激 6 0min后含量几乎为零 ,与对照组比较差异有非常显著性意义 (P <0.0 1),12 0min后表达水平逐渐恢复。PDTC组PBMCIκBα降解 [刺激 6 0min后含量为 (11 5 7± 1.98)× 10 4积分灰度值 ]及p5 0、p6 5核移位程度比烧伤血清组轻 (P <0 0 1)。 结论 烧伤血清可导致PBMCIκBα降解和 p5 0、p6 5核移位 ,进而活化NF κB,诱导PBMC分泌细胞因子。

猪核转录因子C-Rel亚基的克隆及PRV体外感染PK-15细胞对C-Rel转录时相的影响

核转录因子κB是普遍存在于真核细胞中的转录调节因子,其信号通路在细菌、病毒感染宿主致病过程中起关键作用,直接调控宿主先天性免疫反应及细胞增殖、分化和凋亡,它的异常活化可能是PRV感染导致免疫抑制的重要原因。为进一步了解NF-κB C-Rel亚基序列特征及PRV对C-Rel mRNA转录时相的影响,本试验采用RT-PCR从猪外周血淋巴细胞中扩增NF-κB C-Rel ORF,获得阳性质粒后测序,进行相关生物信息学分析;运用实时荧光定量PCR技术对PRV感染PK-15细胞后不同时期C-Rel mRNA的转录水平进行定量分析。序列分析结果表明:所扩增猪C-Rel亚基ORF长1 773bp,编码590aa;猪C-Rel核苷酸序列与不同动物的C-Rel核苷酸序列相似性较高;大部分位于细胞核内(76.0%),无信号肽及跨膜区。荧光定量结果表明:与对照组相比,感染后0~4h,C-Rel转录水平下调,2和4h差异显著(P<0.05);4~12h,快速上调,12h达到转录高峰(P<0.01);12h后逐渐下降,24~120h,维持在较低水平,其中36h差异极显著(P<0.01),48、72和120h差异显著(P<0.05)。本研究推断PRV感染早期较弱的先天性免疫应答可能与C-Rel活化水平低下有关。

聚合酶链反应Array法检测寻常性银屑病皮损核因子κB相关信号通路

目的检测维吾尔族银屑病患者皮损组织与核因子KB（NF—κB）相关的84个信号分子的表达，初步探讨表达明显异常的信号分子。方法收集8例新疆维吾尔族银屑病患者皮损组织，同时收集患者的正常皮肤组织作为对照，提取组织总RNA，逆转录生成cDNA后，聚合酶链反应Array法（PCR—Array）检测NF—κB相关的84个信号分子表达水平，以2倍为上调或者下调的检验标准。结果84种信号分子中，22种信号分子表达上调，7种下调。其中，上调最为明显的分子为胱冬肽酶募集结构域（CARD11）及粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（CSF2），下调最为明显的为肿瘤坏死因子超家族成员5（CD40）、白介素10（IL-10）及B细胞K轻肽基因增强子核因子抑制因子ε（NFKBIE）。结论在检测的银屑病患者皮损组织中，NF—κB信号通路相关的多种分子可能处于被激活状态或抑制状态。