钩藤降压解郁方抑制TLR4/NF-кB信号通路对高血压并发抑郁症大鼠海马小胶质细胞极化的影响

目的探讨钩藤降压解郁方(钩藤、天麻、地龙、葛根等)调控TLR4/NF-кB信号通路对高血压并发抑郁症(HD)大鼠海马小胶质细胞极化的影响。方法将40只原发性高血压大鼠随机分为5组:模型组、阳性药组及中药(钩藤降压解郁方)高、中、低剂量组,每组8只;另取8只SD大鼠作为对照组。采用连续42 d慢性应激(CUMS)结合孤养的方式复制HD模型。造模同时给药干预,中药高、中、低剂量组分别给予钩藤降压解郁方29.61、14.81、7.40 g·kg^(-1)灌胃给药;阳性药组给予左旋氨氯地平0.45 mg·kg^(-1)+氟西汀1.8 mg·kg^(-1)灌胃给药;灌胃体积10 mL·kg^(-1),每天1次,连续42 d。采用无创血压计于给药前及每周最末日上午测量大鼠尾动脉收缩压;造模开始后的第2周和最后1周各进行1次糖水偏好行为学检测;造模结束后进行水迷宫实验;ELISA法测定血清炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-10水平;HE染色法及尼氏染色法观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫荧光双染法检测海马区小胶质细胞M1(CD16)、M2(CD206)型表达情况;Western Blot法检测海马组织中TLR4、NF-κB p65蛋白的表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠第1~6周的尾动脉收缩压均显著升高(P<0.01);糖水偏好率显著下降(P<0.01);逃避潜伏期明显延长(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间占比显著降低(P<0.01);血清TNF-ɑ、IL-1β含量显著上升(P<0.01),IL-10含量显著下降(P<0.01);胞核深染,胞质固缩,细胞凋亡明显;海马小胶质细胞CD206/CD16荧光强度比明显降低(P<0.05);海马组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,给药组大鼠第1~6周的尾动脉收缩压均显著降低(P<0.01);糖水偏好率均明显上升(P<0.05);血清TNF-ɑ、IL-1β含量显著下降(P<0.01),IL-10含量显著上升(P<0.01);尼氏体丰富,细胞凋亡明显减少。阳性药组及钩藤降压解郁方高剂量组大鼠的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间占比明显增加(P<0.05);海马小胶质细胞CD206/CD16荧光强度比明显升高(P<0.05,P<0.01);海马组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论钩藤降压解郁方可能通过抑制TLR4/NF-кB通路调节HD大鼠海马小胶质细胞极化状态,调控炎症因子分泌,减轻海马神经元损伤。

IL-34介导的NF-кB信号通路对根尖牙乳头干细胞成牙成骨定向分化的调节作用

目的:探讨白细胞介素-34(IL-34)介导的核因子кB(NF-кB)对根尖牙乳头干细胞(SCAPs)成牙/成骨定向分化调节作用。方法:使用酶消化法从小鼠根尖牙乳头组织传代培养SCAPs;流式细胞术鉴定SCAPs中CD44、CD90、CD45及集落刺激因子1受体(CSF-1R)的表达;实验分为4组:空白对照组、IL-34组(100 ng/mL IL-34)、CSF-1R组(100 ng/mL IL-34+25 ng/mL anti-CSF-1R)、NF-кB组(100 ng/mL IL-34+1umol/L BMS-345541)。通过蛋白质印迹法(Western blot)分析各组30、60、120 min时SCAPs胞浆中NF-кB关键蛋白p-IкBα、IкBα、p-P65及P65蛋白的表达情况;矿化诱导4组SCAPs 3、7、14 d时,茜素红染色和半定量分析比较各组细胞的矿化结节形成能力;通过RT-qPCR检测各组SCAPs中成骨相关基因Runt相关转录因子-2(RUNX2)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨钙素(OCN)mRNA水平。结果:流式细胞术显示,SCAPs中CD44(90.4%)、CD90(93.5%)阳性表达,造血干细胞CD45(3.1%)阴性表达,SCAPs表达CSF-1R(23.2%)阳性。与对照组比较,IL-34组SCAPs胞浆蛋白内p-IкBα、p-P65表达水平上调,矿化诱导3、7、14 d矿化结节形成量增多,细胞中RUNX2、DSPP、OCN mRNA相对表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与IL-34组比较,CSF-1R组和NF-кB组SCAPs胞浆蛋白内p-IкBα、p-P65表达水平下调(P<0.05),矿化诱导3、7、14 d矿化结节形成量减少,细胞中RUNX2、DSPP、OCN mRNA相对表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-34可通过IL-34/CSF-1R调节SCAPs中NF-кB信号通路,并通过IL-34/CSF-1R/NF-кB信号调节SCAPs的成牙/成骨定向分化能力。

通脉消斑汤上调PPARα抑制NF-кB减轻缺氧复氧受损心肌细胞炎症反应

目的:探讨通脉消斑汤上调过氧化物酶体增生因子活化受体α(PPARα)抑制NF-кB保护缺氧复氧受损心肌细胞炎症反应。方法:建立大鼠H9C2细胞缺氧复氧模型,将细胞分为3组:对照组(Ⅰ组)、缺氧复氧组(Ⅱ组)、缺氧复氧加通脉消斑汤组(Ⅲ组)。CCK8检测不同浓度通脉消斑汤对大鼠H9C2活力影响;缺氧复氧以及加用通脉消斑汤对细胞活力的影响。免疫荧光观察PPAR缺氧复氧前后及加用通脉消斑汤后变化,NF-кB P65核转移以及磷酸化NF-κB P65(p-NF-κB P65)胞核内表达变化。Western Blot检测PPAR、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达的变化。结果:与空白对照组比较,缺氧复氧组H9C2细胞活力降低,加用通脉消斑汤后,细胞活力升高(P﹤0.05)。免疫荧光显示缺氧复氧组细胞PPAR核内表达较空白对照组降低,加用通脉消斑汤组细胞,PPAR较前升高(P﹤0.05);缺氧复氧组细胞出现NF-κB P65核转移,通脉消斑汤组核转移减少;与空白对照组比较,磷酸化NF-κB在缺氧复氧组表达升高,加用通脉消斑汤组降低。Western Blot结果显示PPAR在缺氧复氧组表达较空白对照组降低,在通脉消斑汤升高;磷酸化NF-κB、细胞间粘附分子1(ICAM1)在缺氧复氧组表达升高,同样在通脉消斑汤组降低。结论:通脉消斑汤上调PPARα,抑制NF-κB,保护缺氧复氧受损心肌细胞。

柏益前列康对非细菌性前列腺炎大鼠NF-кB信号通路的影响

目的:探讨柏益前列康颗粒(BQG)对角叉菜胶所致慢性非细菌性前列腺炎大鼠NF-κB信号通路的影响。方法:1%角叉菜胶复制慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型,评估BQG对大鼠前列腺器官指数、组织病理形态以及大鼠前列腺组织中炎症因子IL-8、TNF-α及VEGF表达水平的影响,Western blot检测前列腺组织中NF-κB通路相关分子蛋白表达水平。结果:BQG可以降低前列腺器官指数,减轻前列腺组织内炎症反应。与模型组相比,BQG显著降低前列腺组织中炎症因子IL-8、TNF-α、VEGF表达水平及转录因子p-IκKα、p-IκBα、NF-κBP65、p-NF-κBP65蛋白表达水平(P<0.05)。结论:BQG可抑制角叉菜胶所致大鼠慢性非细菌性前列腺炎,其作用机制可能与抑制NF-кB信号通路有关。

天麻素通过调控NF-кB/NLRP3信号通路对BV2细胞炎症损伤的保护作用

目的探讨天麻素对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞炎症反应的调控作用以及相关机制。方法实验分为正常组,模型组(LPS,1μg/mL),天麻素低、高剂量组(10、100μmol/L),米诺环素组(1μmol/L)。MTT法检测细胞存活率,ELISA法检测细胞上清液中分泌物IL-1β、TNF-α水平,RT-qPCR法检测细胞IL-1β、TNF-αmRNA表达,Griess法检测细胞上清液NO水平,Western blot法检测细胞iNOS、TLR4、I-κBα、p-IκBα、胞核及胞浆NF-κB p65、NLRP3、cleaved caspase-1、cleaved IL-1β蛋白表达。免疫沉淀法检测NLRP3与ASC之间的相互作用以及NLRP3的泛素化水平;Western blot法检测ASC寡聚化水平。结果天麻素能够抑制LPS诱导的BV2细胞炎症相关因子NO、IL-1β、TNF-α的分泌,降低TNF-α、IL-1βmRNA表达,抑制NF-κB p65的入核,下调LPS诱导的BV2炎症相关蛋白iNOS、TLR4、p-IкBα、NLRP3、cleaved caspase-1、cleaved IL-1β的表达。同时天麻素可以促进NLRP3泛素化,抑制ASC的寡聚化,从而抑制NLRP3与ASC的结合,阻碍NLRP3炎症小体的组装。结论天麻素能抑制BV2小胶质细胞炎症损伤,其机制可能与抑制NF-κB活化及NLRP3炎症小体激活有关。

腹腔液中NF-кB、NLRP3的水平与子宫内膜异位症患者临床特征的相关性分析

目的通过检测子宫内膜异位症(EMs)患者及对照组患者腹腔液中核转录因子-кB(NF-кB)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)浓度,探讨NF-кB及NLRP3在EMs发病机制中的作用及意义。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定120例EMs患者和65例对照组患者腹腔液NF-кB、NLRP3浓度,分析其与内异症临床特征的相关性。采用SPSS22.0软件对所有患者临床资料数据进行对比统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果实验组腹腔液NF-кB浓度(371.90±57.64)pg/mL显著高于对照组(333.55±23.58)pg/mL;实验组腹腔液NLRP3浓度(347.66±70.79)pg/mL显著高于对照组(298.01±40.66)pg/mL;内异症患者腹腔液中NF-κB、NLRP3的表达与内异症r-AFS分期、病理类型、有无痛经密切相关,与疼痛程度无明显相关性。结论子宫内膜异位症患者腹腔液中NF-кB、NLRP3浓度的升高可能在内异症发生和发展的过程中发挥了至关重要的作用.

塞来昔布通过阻断NF-кB信号通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期阻滞的相关研究

背景与目的:研究表明塞来昔布能抑制人乳腺癌细胞增殖、诱导其凋亡,但其对肿瘤细胞周期的作用机制尚不明确。本实验研究塞来昔布是否通过阻断NF-кB信号通路对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及周期产生影响。方法:MTT法和流式细胞术观察塞来昔布对MDA-MB-231细胞增殖、周期分布的影响;应用RT-PCR和Western印迹法检测经塞来昔布干预该细胞24h后,细胞周期相关因子及NF-кB信号途径中p-IκBα的变化。结果:塞来昔布可显著抑制MDA-MB-231细胞生长,呈时间剂量依赖性。高浓度塞来昔布可改变细胞进程,将其阻滞于G0/G1期。塞来昔布作用24h后,细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4呈剂量依赖性表达下降(P<0.05)。同时,细胞中p-IκBα表达随药物浓度增加而下降(P<0.05)。结论:塞来昔布能显著抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导细胞G0/G1期阻滞,其作用机制可能是通过抑制IκBα的磷酸化阻断NF-кB信号通路,进而下调其下游基因CyclinD1对细胞周期进行调控。

癌相关成纤维细胞通过Gro-α激活NF-кB核转位和VEGF表达促进卵巢癌的生长

背景与目的：卵巢癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts，CAF）促进上皮肿瘤的发生，其分泌的趋化因子即生长调节致癌基因α（growth-regulated oncogene alpha，Gro-α）蛋白在肿瘤间质微环境中促进上皮卵巢癌的发生，但其作用机制并不清楚。本研究拟测定Gro-α蛋白是否通过激活间质成纤维细胞中NF-кB核转位和VEGF表达，促进卵巢癌的生长。方法：本研究采用ELISA法测定了两株卵巢癌CAF和两株正常卵巢组织成纤维细胞（normal fibroblasts，NF）条件培养基（conditioned medium，CM）中Gro-α的表达；用CAF-CM或Gro-α分别处理NF，并以NF-кB抑制剂处理作为对照；用蛋白质印迹法（Western blot）测定样品处理前后NF-кB和血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等分子的变化；然后用CAF或NF分别与卵巢癌细胞系OVCA429混合接种BALB/c裸小鼠，或在有、无NF-кB抑制剂PS1145处理的NF中，用CAF-CM或Gro-α处理后，分别与OVCA429混合接种动物，观察和比较动物移植瘤生长及移植瘤组织中微血管形成情况。结果：Gro-α在CAF中比在NF中高5-6倍；与对照组相比，用CAF条件培养基或Gro-α处理的NF中NF-кB p65的核转位升高，且VEGF上升，但血管生成抑制因子-血小板反应蛋白1下降；用NF-кB抑制剂同时处理NF，可以逆转其VEGF和TSP-1的表达水平；动物试验结果发现CAF要比NF更易促进肿瘤生长，而CAF-CM或Gro-α处理的NF细胞可以促进动物移植瘤的快速增长和移植瘤组织中微血管的生成，但用NF-кB抑制剂处理的NF则抑制肿瘤生长和血管形成能力。结论：卵巢癌CAF在肿瘤微环境中通过自分泌Gro-α，激活NF-кB核转位和VEGF表达，促进卵巢癌组织血管增生和肿瘤的生长。

β-七叶皂甙钠对大鼠局灶性脑缺血再灌注后NF-кB、ICAM-1、VCAM-1表达的影响

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织缺血区不同时间点NF-кB、ICAM-1、VCAM-1蛋白表达的变化,及β-七叶皂甙钠干预效果。方法采用大鼠大脑中动脉闭塞法(MCAO)制作局灶性脑缺血再灌注模型,用免疫组织化学方法观察大鼠脑缺血再灌注不同时间段,NF-кB、ICAM-1、VCAM-1蛋白的表达。并在大鼠于脑缺血前24h、1h及再灌注即刻分别腹腔给予β-七叶皂甙钠5mg/kg,2h MCAO,再灌注24h、48h后取脑,运用TTC染色测算脑梗死体积,免疫组化染色检测NF-кB、ICAM-1、VCAM-1蛋白表达,分析β-七叶皂甙钠的干预效应。结果(1)脑缺血后缺血区脑组织NF-кB及ICAM-1、VCAM-1表达均增加,NF-kB于再灌注后12～24h表达达高峰,Ⅰ- CAM-1于再灌注后24h表达达高峰,VCAM-1于再灌注后24～48h表达达高峰。(2)NF-кB的表达与血管内皮I- CAM-1、VCAM-1的表达呈正相关。(3)β-七叶皂甙钠能显著降低脑缺血再灌注后24h和48h缺血区NF-кB、ICAM- 1及VCAM-1的表达增加。(4)β-七叶皂甙钠能明显减轻脑缺血再灌注后的脑组织损伤,再灌注24h脑梗死体积减少41.8%。结论(1)脑缺血再灌注后NF-кB、ICAM-1、VCAM-1大量表达,这可能是脑缺血再灌注损伤机制之一。(2)脑缺血后NF-кB的活化可能与微血管内皮细胞ICAM-1、VCAM-1蛋白表达调控有关。(3)β-七叶皂甙钠能够减轻脑缺血后的脑组织损伤,有神经保护作用。

椒目油_(A2)对不同时相哮喘小鼠肺组织NF-кB信号通路及炎症因子表达的影响

目的:探讨椒目油A2(ZSOA2)对不同时相哮喘小鼠肺组织核因子-кB(NF-кB)信号通路和炎症细胞因子的影响。方法:采用腹腔注射20%Al(OH)3+10%卵蛋白(OVA)混合液致敏并每天1次呼吸道滴入50μL(0.4%OVA磷酸缓冲液pH=7.4)制备小鼠哮喘模型。在滴入后24 h、48 h、3 d、7 d、14 d分别处死小鼠,ELISA法测定肺灌洗液(BALF)中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、干扰素-γ(IFN-γ)含量;HE染色法检测肺组织病理形态学及伊红染色计数炎性细胞分类;Western blotting法测定肺组织NF-кB信号通路蛋白表达。结果:ZSOA2组能显著减少哮喘小鼠各时点肺组织嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞(LY)(P<0.05);降低各时点BALF中IL-5、IL-4,升高IFN-γ的水平;下调肺组织中细胞黏附分子-1(ICAM-1)、血管内皮黏附分子-1(VCAM-1)、核因子抑制蛋白-α激酶(IKK-α)、磷酸化核因子抑制蛋白(p-IкB)的表达,上调肿瘤坏死因子受体1(TNF-R1)和磷酸化核因子-кB65(p-NF-кB65)蛋白表达水平。结论:ZSOA2治疗OVA诱发小鼠哮喘是下调肺组织内NF-кB信号通路中IKK-α和p-IкB表达,抑制细胞因子和趋化因子的释放与产生,使炎性细胞浸润程度减弱,而产生治疗哮喘的作用。

缺血后处理下调大鼠脑缺血再灌注时TLR4和NF-кB表达

目的探讨缺血后处理(IP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注时Toll样受体4(TLR4)和核因子-кB(NF-кB)表达的影响。方法将110只成年健康雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组(n=10)、缺血再灌注(I/R)组和后处理(IP)组,后两组根据再灌注的不同时间各分为6h、12h、24h、48h、72h 5个亚组(n=10)。建立局灶缺血再灌注和缺血后处理模型。观察大鼠的神经行为学评分、脑梗死体积、额顶叶皮层TLR4、NF-кB蛋白及mRNA表达情况。结果与I/R组相比,IP组大鼠神经行为学评分显著改善,脑梗死体积明显减少(P<0.05)。TLR4、NF-кB蛋白在I/R组和IP组的表达于再灌注6h时开始升高,24h达高峰。与I/R各相应亚组比较,IP各亚组TLR4、NF-кB蛋白表达均明显降低(P<0.05)。TLR4、NF-кB mRNA在I/R组和IP组的表达时间曲线与蛋白相一致。结论IP可通过抑制TLR4和NF-кB的表达,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,改善神经功能。

沙苑子黄酮对MCF-7细胞增殖抑制与诱导凋亡作用及其对NF-кB表达的影响

目的研究沙苑子总黄酮(FAC)对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用、诱导凋亡作用以及其对NF-кB表达作用影响。方法以不同浓度(0.5,0.25,0.125,0.0625mg/ml)处理MCF-7细胞6,12,24,48,72h后,SRB法测定细胞增殖抑制;FITC-AnnexinⅤ/PI双染法检测凋亡率变化;用Westernblot法检测NF-кB蛋白表达。结果 SRB法显示,0.5,0.25mg/ml浓度沙苑子黄酮作用24,4872h以及0.125mg/ml作用48,72h后MCF-7细胞增殖抑制作用与对照组相比差异具有显著性(P<0.01);0.0625mg/ml作用48,72h后以及0.125mg/ml作用24h后对MCF-7的增殖抑制作用与对照组相比也有差异性(P<0.05)。FITC-AnnexinⅤ/PI双染法FCM(flowcytometry)检测显示,不同浓度沙苑子黄酮(0.5,0.25,0.125,0.0625mg/ml)作用72h后,MCF-7细胞早期凋亡率分别为71.46%,60.34%,51.27%,46.83%,晚期凋亡率分别为4.12%,3.27%,2.59%,1.26%。与对照组比较0.5,0.25,0.125mg/ml组早、晚期凋亡率差异具有显著性(P(0.01),0.0625mg/ml组的早、晚期凋亡率也有差异性(P(0.05),0.5mg/ml剂量组的早、晚期凋亡率与5-Fu组比较差异无显著性(P(0.05)。Westernblot检测NF-κB表达,再用BandLeader软件分析。结果 0.125,0.25,0.5mg/ml浓度组与对照组相比NF-кB表达减少差异具有显著性(P<0.01);0.0625mg/ml组与对照组相比NF-кB表达也有差异性(P<0.05)。结论沙苑子黄酮对MCF-7具有增殖抑制和诱导凋亡作用;其作用可能与其下调NF-кB表达有关。

猪颈总动脉支架内再狭窄动物模型的建立及PPAR-γ与PI3K/Akt和NF-кB的表达变化

目的使用巴马小香猪建立颈总动脉支架内再狭窄动物模型,探讨该模型中过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPAR-γ)与核转录因子NF-кB和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)的表达变化。方法采用猪股动脉暴露、颈总动脉球囊扩张及支架释放的方法建立猪颈总动脉支架植入动脉模型,3 m后,数字减影血管造影(DSA)及HE染色分析支架内狭窄情况,免疫组织化学和Western blot印迹检测支架血管段和正常颈总动脉PPAR-γ、PI3K/Akt及NF-кB的表达变化。结果支架植入术后3 m,支架植入组颈总动脉支架内明显狭窄,支架段血管NF-кB和P-Akt表达较正常对照组明显上调,PPAR-γ的表达较正常对照组明显下调。结论本实验使用猪股动脉暴露、颈总动脉球囊过度扩张及支架释放的方法,成功建立猪颈总动脉支架内再狭窄动物模型,支架植入组可能通过上调NF-кB和P-Akt的表达及下调PPAR-γ的表达来导致支架内再狭窄的发生。

基于TLR4/MyD88/NF-кB信号通路研究十一方药酒对兔膝骨关节炎的保护作用

目的研究十一方药酒(以下简称“SYF”)对木瓜蛋白酶诱导的兔膝骨关节炎(KOA)的保护作用及机制。方法将35只兔随机分为空白组、模型组、阳性组(双氯芬酸二乙胺乳胶剂200 mg/kg)、SYF高剂量组(386 mg/kg)、SYF低剂量组(97 mg/kg),每组7只(均为雄性4只、雌性3只)。除空白组外,其余各组兔于第1、4、7天从右后肢膝关节腔注入木瓜蛋白酶混合液(含2%木瓜蛋白酶与0.03 mol/L L-半胱氨酸)0.5 mL复制KOA模型,空白组注射等体积生理盐水。从第15天开始于各组兔右后肢膝关节涂抹药物,每天给药2次,连续20 d,同时在第0、8、14、35天,用游标卡尺测量兔右后肢膝关节直径计算其肿胀度。实验结束后,采用酶联免疫吸附测定法检测滑膜组织白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E(2 PGE2)的水平;制作滑膜组织苏木精-伊红(HE)染色切片,观测病理学形态变化;采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测滑膜组织Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/细胞核因子(NF-кB)信号通路中TLR4、MyD88、NF-кB p65 mRNA相对表达水平;采用Western blot法检测滑膜组织TLR4、MyD88、NF-кB p65、磷酸化NF-кB p65(p-NF-кB p65)蛋白相对表达水平。结果与空白组比较,模型组兔膝关节肿胀度升高,滑膜组织病理性损伤严重,滑膜组织中IL-1β、TNF-α、PGE2水平均显著升高(P<0.05),TLR4、MyD88、NF-кB p65 mRNA和TLR4、MyD88、p-NF-кB p65蛋白相对表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各给药组兔右后肢膝关节肿胀度与滑膜组织病理损伤程度均有显著改善,滑膜组织中IL-1β、TNF-α、PGE2水平均显著降低(P<0.05),TLR4、MyD88、NF-кB p65 mRNA相对表达水平和TLR4、MyD88(SYF低剂量组除外)、p-NF-кB p65蛋白相对表达水平均显著降低(P<0.05)。结论SYF对木瓜蛋白酶诱导的兔KOA有保护作用,其作用机制与降低炎症因子IL-1β、TNF-α、PGE2水平及下调TLR4/MyD88/NF-кB信号通路相关。

5F诱导的HepG2细胞凋亡与NF-кB活性抑制有关

目的调查中草药半边旗(PsL)提取物Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法通过生存及细胞凋亡分析检测5F对HepG2的增殖抑制效果。同时,采用免疫印迹法评价5F对细胞株HepG2细胞核NF-кB/p65、胞浆IкBα表达的影响。结果 MTT分析证实5F处理呈剂量依赖、时间依赖方式抑制了HepG2增殖。形态分析及Annexin V-EGFP染色则确认了5F诱导的细胞凋亡。而且,该凋亡伴随着IкBα表达的提高、NF-кB/p65表达的降低。结论 5F所诱导HepG2细胞凋亡与IкB生成导致的NF-кB活性抑制有关。

转录因子NF-кB的核内活性调控

NF-κB家族蛋白是一类在免疫、炎症、发育和肿瘤的发生发展中具有至关重要作用的转录因子。因此,它在细胞核内的活性受到了复杂而严密的调控。本文综合近年来的研究成果,描述了NF-κB转录因子与DNA之间动态结合的过程,以及相互选择的关系;总结了组蛋白修饰以及NF-κB转录因子自身翻译后修饰对于NF-κB转录活性的影响;列举了对于NF-κB活性起到正调控作用的共激活因子和负调控作用的共抑制因子;最后还描述了NF-κB在核内被降解的过程。

熊果酸对THP-1细胞HMGB1表达和NF-кB活性的影响

目的研究熊果酸(UA)对人单核细胞系THP-1细胞HMGB1表达和NF-кB活性的影响。方法用不同浓度的UA(0、0.1、1、5和10μmol/L)作用细胞后进行如下检测:1)MTT检测细胞增殖;2)RT-PCR法检测HMGB1和P65 mRNA表达;3)Western blot检测HMGB1和P65蛋白的表达;4)荧光素酶报告基因转染,质粒p NF-κB-luc瞬时转染THP-1细胞,转染40 h后加1μmol/L UA作用,于转染48 h后进行荧光素酶活性测定。结果 1)随着UA浓度的增高,可明显抑制THP-1细胞的增殖;2)不同浓度的UA对THP-1细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达,呈现出一定的双向性,且以1μmol/L UA作用最强(P<0.05);3)UA可增强P65 mRNA和蛋白表达以及NF-κB活性。结论UA可影响单核细胞HMGB1表达和NF-кB活性。

前列腺素E1对大鼠脂肪肝缺血再灌注损伤中NF-кB和ICAM-1的表达的影响

目的探讨PGE1对脂肪肝缺血再灌注损伤的保护作用及可能的机制。方法 42只雄性Wistar大鼠建立脂肪肝模型,随机分成实验组和对照组。对大鼠门静脉进行插管,实验组给予5μg/mL PGE1,以0.1mL/kg·min速度持续给药15 min,对照组给予等量生理盐水,然后随即行Pringle’法阻断肝门15 min。分别于再灌注1、6及24 h,测定动脉血清中生化酶水平(ALT、AST),Western Blot的方法检测p-NF-кB p65的表达,免疫组织化学染色检测ICAM-1的表达。结果脂肪肝缺血再灌注损伤早期ALT、AST、p-NF-кB p65及ICAM-1表达均逐渐升高,6 h达高峰,随后逐渐降低。PGE1干预后可以明显减少脂肪肝缺血再灌注损伤所引起的ALT、AST、p-NF-кB p65及ICAM-1的表达。结论术前、术中持续输注PGE1对脂肪肝缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其作用通过抑制NF-кB的核转位,继而下调ICAM-1表达实现。

NF-кB与COX-2在胃癌及转移淋巴结中的表达研究

目的:探讨NF-кB与COX-2在胃癌原发灶及淋巴结转移灶中的表达关系及临床意义。方法:采用免疫组织化学方法(S-P法)对胃癌原发灶,第一站淋巴结转移灶中的NF-кBp65及COX-2蛋白表达进行检测。结果:胃癌组织中NF-кBp65和COX-2蛋白表达在有淋巴结转移组的阳性表达率分别为79.55%和72.73%,大于无淋巴结转移组48.28%和41.38%,二者比较差异有显著性(P<0.01);NF-кBp65及COX-2蛋白在第一站淋巴结转移灶中的阳性表达率分别为95.45%和88.64%,高于胃癌原发灶81.82%和70.45%,两者比较差异有显著性(P<0.05)。结论:NF-кB和COX-2对于胃癌可能是一个与转移相关因子,通过调节相应的基因共同参与了胃癌的淋巴转移。