脂肪来源干细胞移植促进大鼠脑梗死周边区皮质结直肠癌缺失蛋白(DCC)和神经丝蛋白200(NF-200)的表达

目的研究脂肪来源干细胞(ADSC)移植对大鼠脑梗死周边区皮质中结直肠癌缺失蛋白(DCC)和神经丝蛋白200(NF-200)表达的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组和ADSC组。采用改良Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞脑梗死模型。ADSC组大鼠于造模后24 h经颈动脉注射入50μL用PKH-26标记的ADSC悬液(含约2×10^6个细胞),模型组大鼠注射等剂量的生理盐水。于造模后第7、14天,在荧光显微镜下观察脑组织中ADSC的迁移情况,采用Western blot法检测脑梗死周边区皮质DCC、 NF-200的蛋白水平,免疫荧光法检测脑梗死周边区皮质中DCC、NF-200的表达和分布。结果 ADSC组大鼠脑组织中可检测到PKH-26标记的ADSC,且大部分位于脑梗死周边区皮质中。造模后第7、14天,模型组DCC的表达均高于假手术组,而NF-200的表达均低于假手术组;ADSC组DCC和NF-200的表达在各个时间点均高于模型组。在梗死周边区皮质, DCC主要表达于NF-200阳性的神经元轴突中。结论经颈动脉移植的ADSC可以迁移至脑梗死周边区皮质,并可能通过促进该区域DCC、NF-200的表达,从而强化神经轴突的再生修复。

头穴透刺对急性脑梗死大鼠神经丝蛋白-200的影响

目的研究头穴透刺对急性脑梗死大鼠神经丝蛋白-200(NF-200)的影响,探讨针刺对脑梗死大鼠神经可塑性影响的机制。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、针刺组(C组)。通过建立大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,测定以上各组在7 d、14 d、28 d不同时间点NF200 mRNA变化情况。结果头穴透刺组脑组织NF-200的表达与假手术组、造模组相比差异有统计学意义(P<0.05);而在不同时间窗内头穴透刺组,模型组与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.01)。表明头穴透刺可以促进脑组织神经丝蛋白-200的表达。结论头穴透刺能够提高脑缺血后神经功能,促进肢体功能恢复,增加神经丝蛋白-200的表达,发挥对脑组织神经细胞可塑性的调节作用。

大鼠视网膜神经细胞体外培养

目的 建立视网膜神经层分散细胞的培养方法 ,以进一步对视网膜神经元细胞 (尤其是视网膜神经节细胞 )和神经胶质细胞进行体外实验研究。方法 取出生后 1～ 3d的SD乳鼠的视网膜 ,用胰酶消化法制备分散细胞悬液后 ,接种于置有包被poly D lysine玻片的 2 4孔培养板中培养 ,倒置相差显微镜观察细胞生长规律。培养第 7d ,用抗神经元特异性核 (NeuN)抗体和抗神经丝 (Neurofilament 2 0 0 ,NF 2 0 0 )抗体分别标记视网膜神经元细胞和神经节细胞 (RGCs) ,并计算每 10个高倍镜下的细胞数以及RGCs所占百分数。结果 体外培养的视网膜神经元细胞经历了贴壁、重聚、迁移和相互接触的过程 ,有突起样生长 ,其中RGCs占神经元的 5 5 %左右。结论 视网膜神经层分散细胞体外培养成功 ,并有较好的RGCs生长率 ,为进一步进行视网膜疾病的研究创造了条件。

硫酸软骨素酶ABC联合骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤后神经功能的恢复作用

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)移植联合硫酸软骨素酶ABC(chondro-itinrase ABC,Ch ABC)降解对脊髓损伤后神经功能修复作用。方法成年雄性SD大鼠60只,制作脊髓损伤模型并按随机数字表法分成4组(n=15):假手术组(A组)、Ch ABC降解组(B组)、BMSCs移植组(C组)、Ch ABC联合BMSCs移植组(D组)。4组分别在术后7、14 d观察记录动物情况并处死动物进行标本检测。伤后7、14 d,BBB评分评价大鼠后肢运动感觉功能;伤后7 d TUNEL法检测神经细胞凋亡情况;伤后14 d,HE染色测损伤区总面积;免疫组化法观察胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经丝蛋白-200(NF-200)和勿动蛋白A(Nogo-A)的表达。结果伤后7 d各组BBB评分比较差异无统计学意义(P>0.05);伤后14 d,4组BBB评分分别为(6.33±1.00)、(7.25±0.96)、(7.33±0.58)、(9.75±0.96)分。D组BBB评分明显高于其他3组(P<0.05);伤后14 d,HE染色结果显示,4组损伤区均形成空洞,4组空洞相对面积分别为(4.44±0.18)、(3.70±0.21)、(3.23±0.22)、(2.33±0.31)mm2,D组空洞面积显著小于其他3组(P<0.05);伤后14 d GFAP/Nogo-A免疫组化染色结果显示D组GFAP/Nogo-A表达低于他3组(P<0.05);NF-200免疫组化染色结果显示D组阳性表达显著高于其他3组(P<0.05);伤后7 d TUNEL法检测结果显示D组阳性细胞数显著低于其他3组(P<0.05)。结论 Ch ABC联合BMSCs移植可以溶解胶质瘢痕,减少神经元细胞凋亡,促进神经纤维再生并越过脊髓损伤区域,对脊髓损伤后有明显的修复作用。

脂肪来源的干细胞移植对脑缺血大鼠神经轴突再生的影响

目的:探讨脂肪来源的干细胞(ADSC)移植对脑缺血大鼠神经轴突生长以及神经胶质酸性蛋白(GFAP)、神经突蛋白(Neuritin)、神经微丝蛋白200(NF-200)表达的影响。方法:54只清洁级成年雄性SD大鼠,随机分为3组:假手术组(Sham组)、模型组(MCAO组)及MCAO+ADSC治疗组(ADSC组),每组18只。采用改良Zea-Longa线栓制法大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,ADSC移植前用DAPI标记,ADSC组于造模成功1 d后经侧脑室注射入ADSC(1×106),分别于术后7 d、14 d、28 d观察其恢复情况,并断头取脑,通过免疫荧光、Western blot法检测脑缺血组织中GFAP、Neuritin、NF-200表达情况。结果:ADSC组缺血周边区脑组织中能观察到DAPI染色的阳性细胞;ADSC组与MCAO组相比在各个时间点脑组织中GFAP阳性细胞表达明显降低(P<0.05),神经突蛋白和神经微丝蛋白200表达明显增高(P<0.05)。结论:ADSC移植后可引起脑缺血后期组织中Neuritin、NF-200有效表达,并抑制GFAP阳性细胞增生,促进了神经轴突再生和修复。

睡眠剥夺后大鼠皮质、海马和杏仁核微管相关蛋白-2及神经丝蛋白的表达变化

目的探讨睡眠剥夺后大鼠皮质、海马和杏仁核微管相关蛋白-2(MAP-2)及神经丝蛋白(NF-200)表达的变化。方法采用改良小平台水环境法制作大鼠睡眠剥夺模型,大鼠随机分为睡眠剥夺组(SD组)、环境对照组(TC组)和空白对照组(CC组)。SD组包括睡眠剥夺6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d共7个时点,每个时间点5只大鼠,CC组5只。免疫组织化学法观察MAP-2和NF-200阳性表达。结果睡眠剥夺5d和7d时,皮质、CA1、CA2、CA3、齿状回和杏仁核MAP-2和NF-200阳性表达减少(P<0.05,P<0.01)。结论睡眠剥夺可导致脑组织MAP-2和NF-200表达减少。

壳聚糖作载体的神经干细胞移植修复脑损伤研究

目的:探讨壳聚糖作载体的NSCs移植及NGF的应用对大鼠TBI的修复作用。方法:用低温冷冻干燥法制备壳聚糖多孔支架。将从鼠胚前脑中分离的NSCs进行扩增,并标记BrdU。Feeney法制备SD大鼠TBI模型,随机分为3组:损伤对照组清创后不做移植;NSCs+支架移植组行壳聚糖作载体的NSCs移植;NSCS+支架+NGF移植组行壳聚糖作载体的NSCs移植,并在其中加入NGF。术后3个月在损伤区或移植区注射BDA追踪剂,行避暗回避和跳台试验。脑切片行Nissl染色、BrdU与NF-200免疫荧光双标及BDA组化染色。结果:两移植组的认知功能较损伤对照组明显改善,含NGF的移植组改善更加显著。Nissl染色见损伤对照组创伤区形成烧杯状空洞、海马萎缩变形。而两移植组创伤区有移植物填充并与宿主整合,创伤侧海马萎缩变形不明显;两移植组在移植区均可见BrdU与NF-200免疫荧光双标细胞,含NGF移植组中的双标细胞数量多、胞体大、突起多且长;BDA组化染色显示两移植组移植区内的细胞突起已延伸至宿主脑组织,含NGF的移植组向宿主脑组织延伸的突起较多。结论:大鼠TBI后行壳聚糖作载体的NSCs移植,可以改善大鼠的认知功能,NSCs可以向神经元分化并与宿主脑组织建立联系,NGF对其具有促进作用。

NGF对小鼠骨髓基质细胞体外诱导分化作用

为观察NGF等对小鼠骨髓基质细胞的诱导分化作用,从小鼠骨髓中分离培养基质细胞并传至第3代,采用bFGF预诱导24 h,NGF、维甲酸、β-巯基乙醇等诱导24 h后,进行NF-200、GFAP、fibronectin免疫荧光染色,荧光显微镜观察免疫阳性细胞。结果表明:诱导后小鼠骨髓基质细胞形态改变不明显,但出现表达NF-200、GFAP的细胞,而表达fibronectin的细胞减少,对照组几乎无NF-200和GFAP免疫阳性细胞,主要为表达fibronectin细胞。结论:NGF等可以在体外诱导小鼠骨髓基质细胞分化成表达NF-200和GFAP细胞。

基于SERS的大鼠脑组织免疫分析

将常规免疫组织化学法与表面增强拉曼散射光谱(SERS)结合,建立了一种简便、快速测定大鼠脑组织中神经元特异性骨架蛋白的新方法.将所制备的SERS免疫胶体金标签加入至大鼠脑组织冰冻切片,研究了经免疫识别后组织的SERS光谱,在脑组织切片中得到了探针分子对巯基苯甲酸(MBA)的特征峰(1076,1589 cm-1).对比了不同浓度抗体对SERS信号及免疫组化染色的影响,结果表明,与传统的免疫组化法相比,SERS法可以简化步骤,缩短实验时间,同时展现出更高的检测灵敏度和选择性.