转录因子NF-E2相关因子2-抗氧化转录元件信号路径细胞保护作用的研究进展

转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)是机体内一个重要的保护性转录分子,广泛分布于机体的各个器官中。在生理状态下,Nrf2以非活性形式存在于细胞质内;当机体处于应激状态时被激活,并通过多种途径来增强机体的抗氧化、解毒、抗凋亡等功能。其中,以Nrf2和抗氧化转录元件(ARE)为核心的Nrf2-ARE信号路径就是Nrf2增强机体抗氧化、解毒功能最重要的保护性信号路径。文章对有关Nrf2-ARE信号路径细胞保护作用的研究进展进行综述。

转录因子NF-E2相关因子2对急性肺损伤小鼠的保护作用研究

目的探讨转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)对急性肺损伤(ALI)小鼠的保护作用及其机制。方法采用随机数字表法将小鼠分为对照组、ALI组、Nrf2干扰溶剂对照组(干扰溶剂组)和Nrf2干扰组4组,每组9只。Nrf2干扰组于尾静脉注射Nrf2小干扰RNA(si RNA),干扰溶剂组尾静脉注射等量干扰溶剂,对照组和ALI组于尾静脉注射等量0.9%氯化钠溶液,1次/d,连续3d。第4天时,ALI组、干扰溶剂组和Nrf2干扰组腹腔注射脂多糖(LPS)10mg/kg制备内毒素诱发ALI模型,对照组则腹腔内注射等量0.9%氯化钠溶液。注射LPS或0.9%氯化钠溶液6h后,麻醉开腹,从下腔静脉取静脉血,采用ELISA法检测血清IL-6、TNF-α水平。光镜下观察肺组织形态学变化,并进行肺损伤评分,测定并计算小鼠肺湿重/干重比值。采用Western blot法检测肺组织Nrf2核蛋白表达水平,采用比色法检测肺匀浆组织中髓过氧化物酶(MPO)、一氧化氮合酶(iNOS)水平。结果与对照组比较,ALI组、干扰溶剂组和Nrf2干扰组肺组织病理学损伤评分、湿重/干重比值、IL-6、TNF-α、MPO、iNOS水平升高,Nrf2核蛋白表达水平上调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与ALI组比较,Nrf2干扰组肺组织病理学损伤评分、湿重/干重比值、IL-6、TNF-α、MPO、iNOS水平升高,NRF2核蛋白表达水平下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 Nrf2 siRNA可下调Nrf2核蛋白表达水平,从而加重LPS诱导的小鼠ALI的严重程度,使血清促炎症因子水平和肺组织中氧化应激损伤指标升高,提示Nrf2对ALI的保护作用与其抗炎和抗氧化作用有关。

自体原位肝移植术后早期胃氧化损伤及其与NF-E2相关因子2的关系

【目的】探讨SD大鼠自体原位肝移植后16 h内胃病理学变化特点,胃黏膜氧化损伤及NF-E2相关因子2(Nrf2)表达的变化。【方法】将24只SPF级SD大鼠随机均分为假手术组(Sham,n=6)、自体原位肝移植再灌注后4 h组(R4h)、自体原位肝移植再灌注后8 h组(R8h)和16 h组(R16h)。假手术组在麻醉后只进行开腹和血管的分离,不进行肝脏的阻断和灌注;其余各自体原位肝移植组则进行自体肝移植手术,观察胃组织病理学变化特点、羟自由基(·OH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及Nrf2蛋白表达的变化。【结果】自体原位肝移植引起了各组大鼠明显的胃黏膜损害,其中R4h组损伤最严重。与假手术组相比,自体原位肝移植后4 h和8 h胃黏膜的·OH及MDA水平均明显升高,伴随SOD、CAT活性的明显降低。Nrf2蛋白在自体原位肝移植再灌注后4 h表达下调,在8 h和1 6 h逐渐恢复至假手术组水平。相关分析显示,胃黏膜损伤评分与·OH和MDA含量呈正相关,与SOD和CAT活性呈负相关(P<0.05);Nrf2蛋白表达含量与胃黏膜损伤评分、·OH含量和MDA含量呈负相关,与CAT活性呈正相关(P<0.05)。【结论】大鼠自体原位肝移植引起胃损伤,胃损伤与修复与氧化和抗氧化能力变化一致;胃黏膜Nrf2表达增强可能有利于胃的自我修复。

siRNA干扰NF-E2相关因子2对喉鳞状细胞癌化疗敏感性的影响

目的探讨小片段干扰RNA(siRNA)干扰NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)对人喉癌Hep2细胞化疗敏感性的影响及凋亡的差异。方法体外培养人喉癌细胞系Hep2,设立实验组和对照组,实验组(Hep2/siRNA组)采用脂质体转染法,转染siRNA至Hep2细胞系,对照组(Hep2/siRNA-control组)转染空质粒siRNA-control。经Western Blot验证其转染效果后,采用CCK-8法检测计算Hep2/siRNA与Hep2/siRNA-control经不同浓度梯度顺铂(分别为1、2、4、8、16μg/ml)处理后的细胞增殖抑制率及IC50值。通过凋亡试剂盒分别染色Hep2/siRNA与Hep2/siRNA-control细胞系,采用流式细胞仪检测两组细胞的凋亡率。结果实验组的Nrf2蛋白表达比对照组发生下调,经不同浓度梯度顺铂处理24h后,Hep2/siRNA细胞系增殖抑制率相对Hep2/siRNA-control逐渐升高,顺铂浓度为4μg/ml时,对照组细胞增殖率为35.55%±6.14%,而实验组细胞增殖率为46.07%±5.21%,IC50值下调,细胞凋亡率由17.1%(对照组)升高至26.6%(实验组)。结论 siRNA干扰Nrf2基因可增强Hep2细胞系对顺铂的敏感性。

NF-E2相关因子2对视网膜细胞保护作用的研究进展

核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)介导的抗氧化还原通路在细胞氧化应激损伤过程中起到重要的保护作用。在氧化应激的刺激下,Nrf2可以启动多种细胞保护性基因的表达从而维持细胞稳态。因此,在治疗氧化应激损伤的疾病时,药物诱导Nrf2通路表达上调成为了一个新的研究方向。我们主要从视网膜神经细胞和视网膜血管内皮细胞两个方面总结了Nrf2在视网膜病变中的细胞保护作用的相关研究进展。

新型硫化氢供体8L通过上调NF-E2相关因子2的表达拮抗H_2O_2损伤H9c2心肌细胞

目的探讨新型硫化氢供体8L对氧化应激诱导心肌细胞损伤的保护作用及NF-E2相关因子2(Nrf2)有关的分子机制。方法用活性氧供体过氧化氢(H2O2)处理培养的大鼠H9c2心肌细胞,建立心肌细胞损伤的体外模型以模拟急性缺血再灌注诱导的心肌损伤;在H2O2处理前给予8L预处理观察其对心肌细胞的保护作用。为了明确Nrf2的作用,在H2O2处理或8L预处理前给予其选择性抑制剂鸦胆苦醇预处理。细胞计数试剂盒8比色法检测细胞存活率,试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放,罗丹明123染色结合荧光照相术检测线粒体膜电位(MMP),Western Blot法检测核内Nrf2的表达。结果 H9c2心肌细胞经0~600μmol/L H2O2处理6 h可浓度依赖性地降低细胞存活率,且半数有效浓度约为400μmol/L。400μmol/L H2O2处理H9c2心肌细胞6 h可使LDH释放增加,MMP降低,并增加细胞核内Nrf2的表达(P均<0.01)。在用400μmol/L H2O2处理前,先用50、100和200μmol/L 8L预处理1 h,可将细胞存活率从(52.6±4.3)%分别提高至(72.5±6.3)%、(83.1±5.2)%和(85.7±4.9)%。200μmol/L 8L预处理1 h还可明显抑制H2O2诱导的LDH释放(P<0.01)及MMP受损(P<0.05),但可易化H2O2诱导的Nrf2表达上调(P<0.01)。另外,10μmol/L鸦胆苦醇预处理1 h不但可加重H2O2诱导的心肌细胞损伤(P<0.01),还可拮抗8L的心肌细胞保护作用(P<0.01)。结论硫化氢供体8L可减轻氧化应激诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与上调Nrf2有关。

NF-E2相关因子2通路对线粒体功能的调控作用

NF-E2相关因子2(Nrf2)是CNC碱性亮氨酸拉链家族成员之一,在维持细胞氧化-还原稳态、调节细胞能量代谢、炎症反应、凋亡和自噬等细胞反应中发挥着重要作用。线粒体是细胞合成ATP的主要场所,也是细胞内活性氧自由基的主要来源之一。近年来,越来越多的研究提示,Nrf2通路可通过多种方式或机制调控线粒体功能,进而调节细胞对外源性物质的反应与有害结局,包括调节活性氧自由基水平、抑制线粒体膜电位下降、促进ATP合成、保护线粒体脂肪酸氧化和氧化磷酸化以及线粒体生物合成等,同时也可调节线粒体完整性和线粒体自噬。此外,Nrf2通路对毒物诱导的线粒体兴奋效应也具有重要影响。本文综述了近年来Nrf2通路对线粒体功能的调控作用及其机制。

转录因子NF-E2相关因子在间歇性低氧大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的保护机制

目的研究转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)在间歇性低氧(IH)对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的影响。方法制作成年SD大鼠心肌I/R模型,48只大鼠分为随机3组:假手术组(n=16)、I/R组(n=16)、IH+I/R组(n=16)。假手术组将生理盐水注进尾静脉,低氧处理(先给予2 min 6%~8%低氧,再进行3 min氧和处理,每次循环5次)制作IH动物模型,垫扎球囊法制作心肌I/R动物模型。术后检测心肌丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量。术后48 h处死,通过Western blot法检测Nrf2蛋白表达。结果 I/R组及IH+I/R组的心肌细胞MDA含量分别为16.82±6.26 nmol/L、7.53±4.18 nmol/L,GSH含量分别为132.17±3.54 mg/L、172.15±5.63 mg/L,CK-MB含量分别为2 601±3.75 U/L、1 538±2.87 U/L。I/R组及IH+I/R组Nrf2蛋白表达分别为0.217±1.326、0.872±4.538(P<0.05)。与假手术组比较,I/R组CK-MB、MDA升高,GSH含量、Nrf2蛋白表达降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);与I/R组比较,IH+I/R组MDA、CK-MB含量降低,GSH含量、Nfr2蛋白表达升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论间歇性低氧在大鼠心肌缺血损伤中具有心脏保护作用,其保护机制与Nrf2表达升高有关。

NF-E2相关因子2对糖尿病模型小鼠视网膜内细胞及血管的保护作用

目的探讨NF-E2相关因子2(Nrf2)对糖尿病视网膜细胞及血管的保护作用。方法 8周龄雄性Nrf2^(+/+)(野生型)和Nrf2^(-/-)C57BL/6小鼠60只随机分为模型组和对照组,共4组,每组各15只。模型组小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ,45mg/kg),连续注射5 d;对照组小鼠注射同体积的枸橼酸缓冲液。模型组和对照组小鼠初次注射后每周测空腹血糖及体重,至第10周取视网膜。采用免疫印迹法检测视网膜内Nrf2激活的下游蛋白血红素加氧酶-1(HO-1)的表达情况;免疫荧光染色检测具有多种剪接形式的RNA结合蛋白(RBPMS)阳性的视网膜节细胞(RGCs)及胆碱乙酰转移酶(Ch AT)阳性的无长突细胞(ACs)并计数;采用过碘酸-希夫和苏木素染色,观察视网膜内无细胞毛细血管并进行定量分析。结果 STZ诱导1周后,野生型和Nrf2^(-/-)模型组小鼠血糖急剧升高,体重开始显著下降,随着周龄的增长体重无明显增加;对照组小鼠血糖值无明显升高,体重呈正常缓慢增长趋势。STZ诱导糖尿病10周后,RBPMS和Ch AT染色发现,Nrf2~(^(-/-))糖尿病小鼠视网膜内RGCs和ACs数量显著降低(P<0.05);过碘酸-希夫和苏木素染色显示,Nrf2^(-/-)糖尿病小鼠视网膜内出现无细胞毛细血管;免疫印迹法显示,野生型小鼠模型组中Nrf2激活的下游蛋白HO-1表达升高。结论 Nrf2对糖尿病视网膜细胞及血管具有保护作用,其可能是通过诱导HO-1上调发挥作用。

翻译后修饰对转录因子NF-E2相关因子2功能的调控

抗氧化反应组件(AREs)普遍存在于编码抗氧化和/或解毒酶基因的启动子区域,为这些基因的转录启动所必需;而这些基因的表达对维持细胞内氧化还原稳态,抵抗活性氧类(ROS)引起的细胞损伤发挥重要作用。转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,NRF2)作为抗氧化反应中的关键转录因子,可以与ARE结合,启动其下游靶基因,在氧化应激及亲电子剂应激中发挥重要的调控作用,广泛参与炎症、增殖、凋亡、细胞分化、组织再生和代谢等过程;因此,激活NRF2有望成为治疗肿瘤及其他与氧化、炎症相关疾病的新策略。蛋白质的翻译后修饰,对蛋白质空间构象、稳定性及其与其他蛋白质间相互作用具有重要作用。因此,探究NRF2的翻译后修饰如磷酸化、乙酰化和泛素化的修饰过程等,对深入了解NRF2的功能及调控机制至关重要,并与某些疾病的发生发展密切相关。本文对近年来翻译后修饰对NRF2的活性及功能的调控进行综述。

5，6-二氢环戊烯并1，2-二硫杂环戊烯-3-硫酮对2型糖尿病大鼠视网膜核因子NF-E2相关因子及血红素氧合酶-1表达的影响

目的 观察Ⅱ相酶诱导剂5,6-二氢环戊烯并1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮（CPDT）对2型糖尿病大鼠视网膜核因子NF-E2相关因子/抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）信号通路及氧化应激的影响，探讨CPDT保护糖尿病大鼠视网膜的机制。方法 35只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、造模组2个组，造模组中造模成功者再随机分为糖尿病组、CPDT干预组2个组。正常组、造模组分别有8、27只大鼠。糖尿病组和CPDT干预组给予高脂高糖饲料饲养2个月，大鼠空腹12 h后按体重35 mg/kg腹腔注射链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型。CPDT干预组成模后1周开始在高脂高糖饲料中添加CPDT。8周后检测3组大鼠血糖、血清丙二醛（MDA）含量，检测正常组和糖尿病组大鼠血脂含量。逆转录聚合酶链反应检测3组大鼠视网膜Nrf2、血红素氧合酶-1（HO-1） mRNA表达，蛋白免疫印迹法检测Nrf2、HO-1蛋白表达，免疫组织化学法检测Nrf2、HO-1在视网膜的表达。结果 25只大鼠成功建立2型糖尿病大鼠模型，成功率为92.6%。糖尿病组大鼠血脂水平较正常组显著升高（F总胆固醇=65.866，F甘油三酯=25.441，F低密度脂蛋白=38.889，P=0.000）。各组间大鼠血糖值比较，差异有统计学意义（χ^2=25.812，P=0.000），且糖尿病组大鼠血糖显著高于正常组和CPDT干预组。各组间大鼠血清MDA含量比较，差异有统计学意义（F=59.545，P=0.000），糖尿病组大鼠血清MDA高于正常组（t=10.523，P=0.000）和CPDT干预组（t=7.766，P=0.000）。各组大鼠视网膜Nrf2、HO-1 mRNA比较，差异有统计学意义（FNrf2=19.503，PNrf2=0.000；F HO-1=9.737，P HO-1=0.001）。与糖尿病组相比，CPDT干预组大鼠视网膜Nrf2、HO-1 mRNA表达明显增高（tNrf2=3.399，P Nrf2=0.002；tHO-1=2.167，P HO-1=0.039）。各组大鼠视网膜Nrf2、HO-1蛋白比较，差异有统计学意义（FNrf2=112.823，F HO-1=119.361，P=0.000）。与糖尿病组相比，CPDT干预组大鼠视网膜Nrf2、HO-1蛋白表达明显增高（tNrf2=6.203，t HO-1=6.388，P=0.000）。免疫组织化学检测结果显示，Nrf2、HO-1蛋白主要表达于视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层，各组大鼠视网膜Nrf2、HO-1蛋白表达量比较，差异有统计学意义（F Nrf2=16.206，F HO-1=46.790，P=0.000）。CPDT干预组大鼠视网膜Nrf2、HO-1蛋白的表达量高于糖尿病组（tNrf2=3.172，P Nrf2=0.003；tHO-1=6.321，P HO-1=0.000），糖尿病组高于正常组（t Nrf2=2.679，P Nrf2=0.011；t HO-1=3.482，PHO-1=0.001）。结论 CPDT可能通过激活Nrf2/ARE信号通路，诱导Nrf2和HO-1的表达，降低血糖、血清MDA含量，从而减轻2型糖尿病大鼠视网膜的氧化应激损伤。

NF-E2相关因子抗氧化应激损伤作用的研究状况

NF-E2相关因子(Nrf2)是存在于细胞核内的一种重要的抗氧化应激转录因子,可以调控一系列抗氧化酶、抗凋亡蛋白基因的编码,与下游抗氧化反应元件(ARE)结合形成Nrf2-ARE通路,是促进下游II相解毒酶和多种细胞保护蛋白的表达的关键通路,在抗氧化应激损伤的研究中有着重要意义。本文主要从Nrf2与氧化应激的关系,Nrf2调控因子、Nrf2-ARE通路及Nrf2在相关疾病中的作用这些方面作了收集与探讨。

原花青素对氯氰菊酯致小鼠小脑组织氧化损伤及核转录因子NF-E2相关因子2、血红素氧合酶-l表达的影响

目的研究原花青素(proanthocyanidin,PC)对氯氰菊酯(cypermethrin,CYP)所致小鼠小脑组织氧化损伤及核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-l(HO-1)表达的影响。方法将50只雄性昆明小鼠随机分为5组:双蒸水对照组,染毒组(以CYP 10 mg/kg进行灌胃),PC保护组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(分别以50、100和200mg/kg PC预先给小鼠灌胃,再以10 mg/kg CYP染毒)。连续3周经口灌胃,之后颈椎脱臼法处死小鼠,检测小脑组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;免疫组化分析Nrf2在小脑组织中的表达;RT-PCR检测Nrf2及HO-1 mRNA的表达。结果染毒组小鼠小脑组织MDA含量升高,GSH-Px、T-SOD、CAT活性降低;Nrf2胞核阳性细胞比例增加;Nrf2及HO-1 mRNA表达增加,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。与染毒组相比,PC保护组MDA水平降低,T-SOD、GSH-Px、CAT活性增加;胞核Nrf2阳性细胞逐渐减少;Nrf2及HO-1 mRNA表达下降,与染毒组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 CYP暴露可诱导小鼠小脑组织氧化损伤,使Nrf2由胞质向胞核转位,同时诱导下游靶基因HO-1的表达;抗氧化剂PC能够使活化的Nrf2及HO-1mRNA表达回调至基础水平,从而拮抗CYP所致的氧化损伤。

高氧暴露对早产新生大鼠肺组织转录因子NF-E2相关因子2和Keap1表达的影响

目的探讨高氧暴露对早产新生大鼠肺组织中转录因子NF-E2相关因子2（ nuclearfactor-erythroid 2-related factor 2, Nrf2）和胞浆蛋白伴侣分子Keap1表达的影响。方法早产新生SD大鼠生后1d完全随机设计方法分为两组：高氧组与空气组。高氧组持续暴露于常压氧舱中，氧质量浓度〉85％；空气组置于同一室常压空气中。两组分别于高浓度氧或空气暴露后1…4710、14d提取肺组织标本。采用石蜡包埋切片行HE染色，观察肺组织的病理学变化。采取RT-PCR方法测定Nrf2和KeaplmRNA水平的动态表达。Westernblot检测Nrf2蛋白水平的表达。结果（1）与空气组相比，高氧组4、7d早产鼠肺组织Nrf2mRNA表达显著增强（4d：0．314±0．064VS．0．521±0．086，7d：0．440±0．121VS．0．658±0．076），10d出现下降趋势，14d明显减弱（P〈0．05）。（2）与空气组相比，高氧组1、4d肺组织中KeaplmRNA表达均显著增强（1d：0．352±0．052VS．0．547±0．075，4d：0．363±0．074VS．0．658±0．076）（P〈0．05），但7d后呈下降趋势，10、14d明显减弱（P〈0．05）。（3）与空气组相比，高氧暴露1、4d，Nrf2蛋白水平表达稍增强（P〉0．05）；7d后Nrf2蛋白呈下降趋势，其表达较空气组减弱，但7d两者相比差异无统计学意义（P〉0．05），而10、14d显著减弱（10d：1．325±0．464VS．0．755±0．348，14d：1．662±0．474VS．0．867±0．115）（P〈0．05）。结论氧化暴发诱导肺组织中Nrf2与Keapl的异常表达，调节机体氧化应激水平，参与高氧肺损伤发病过程。高氧暴露可能通过上调Nrf2活性，提高机体抗氧化，在减轻高氧肺损伤过程中发挥一定抗氧化作用。

转录因子NF-E2相关因子2与肝脏疾病的关系

肝脏作为人体代谢最旺盛的器官,易受氧化应激等损伤.近年来越来越多的研究表明,多种类型的肝脏疾病如肝炎、肝纤维化、肝硬化、肝癌等均与氧化应激损伤密切相关.转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）是机体调节抗氧化应激反应的核心转录因子.其与抗氧化反应元件（ARE）结合,进而启动ARE介导的靶基因的转录,增强细胞对氧化应激的抗性.Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）-Nrf2-ARE抗氧化通路在肝脏疾病的发病机制中起重要作用.

转录因子NF-E2相关因子2信号通路在金属污染物毒理学作用中的机制及其研究进展

镉、铅和砷等重金属和类金属是重要的环境污染物,金属污染物引起的氧化应激是其引起健康损害的重要毒理学机制。转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)信号通路是细胞抗氧化应激的中枢调节者,在细胞介导的抗氧化应激防御反应中具有重要作用。本研究主要介绍了镉、铅和砷对Nrf2信号通路的作用及其机制,并综述了锌、铬、铜在毒理学作用中对Nrf2信号通路的影响。

莱菔硫烷激活核转录因子NF-E2相关因子2通路在拮抗汞所致肝脏氧化损伤中的作用

目的探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)通过诱导核转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erthroid 2-related factor 2,Nrf2)通路激活对汞所致肝脏氧化损伤的拮抗作用及其机制。方法将60只健康成年SPF级Wistar大鼠按体重随机分成6组,分别为对照(生理盐水)组,DMSO对照组,0.6、1.2、2.4 mg/kg氯化汞染毒组及SFN预处理(2.4 mg/kg氯化汞+2 mg/kg SFN)组,每组10只,雌雄各半。采用皮下注射SFN溶液,其余各组皮下注射生理盐水,DMSO对照组皮下注射DMSO;2 h后,腹腔注射氯化汞溶液,染毒容量均为5 ml/kg,每日1次,连续染毒3 d。测定血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)及丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)活力和肝细胞ROS水平以及肝组织Nrf2、血红素单加氧酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基(γ-GCSh)的m RNA及蛋白的表达水平。结果与对照组比较,各剂量氯化汞染毒组大鼠血清LDH、ALT活力(除0.6 mg/kg氯化汞染毒组ALT活力外)和肝细胞ROS水平以及1.2 mg/kg氯化汞染毒组大鼠肝组织HO-1 m RNA的表达水平和2.4 mg/kg氯化汞染毒组大鼠肝组织Nrf2、HO-1、γ-GCSh m RNA的表达水平及1.2、2.4 mg/kg氯化汞染毒组大鼠肝组织Nrf2、HO-1、γ-GCSh蛋白的表达水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);且随着氯化汞染毒剂量的升高,大鼠血清LDH、ALT活力和肝细胞ROS水平及肝组织Nrf2、HO-1、γ-GCSh蛋白和m RNA的表达水平均呈逐渐上升的趋势。与2.4 mg/kg氯化汞染毒组比较,SFN预处理组大鼠血清LDH、ALT的活力和肝细胞ROS水平均较低,而肝组织Nrf2、HO-1、γ-GCSh蛋白和m RNA的表达水平均较高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 SFN可通过诱导Nrf2-ARE通路激活,促使肝细胞Nrf2及其下游抗氧化酶HO-1、γ-GCSh表达,进而清除细胞内过量的ROS,从而拮抗汞所致肝脏氧化应激损伤。

海藻糖激活核因子E2相关因子2改善缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤的研究

目的通过建立氧糖剥夺-缺氧复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤模型模拟心肌缺血再灌注损伤,探讨海藻糖对OGD/R大鼠H9C2心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H9C2细胞分为对照组、OGD/R组、海藻糖组(OGD/R+海藻糖)、联合组(OGD/R+海藻糖+ML385)。四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖能力,并通过检测乳酸脱氢酶及Hoechst/丙啶碘化物染色检测细胞膜受损情况。Western blot检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)及其下游相关蛋白表达;活性氧、线粒体膜电位检测氧化应激水平;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果与对照组比较,OGD/R组细胞活力明显降低。与OGD/R组比较,不同浓度海藻糖干预能显著提升细胞活力,与海藻糖浓度呈正相关(P<0.01);与OGD/R组比较,海藻糖组线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Nrf2、血红素加氧酶1和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸醌氧化还原酶1、Bcl-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)表达明显增高,活性氧、丙二醛、应答元素结合蛋白1、Bax、Bax/Bcl-2、裂解型Caspase-3表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与海藻糖组比较,联合组活性氧、丙二醛及肿瘤坏死因子α、白细胞介素(interleukin,IL)1βmRNA、IL-6 mRNA表达明显增高,MMP、GSH水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);联合组Bax、Bax/Bcl-2、裂解型Caspase-3表达明显高于海藻糖组(1.77±0.08 vs 1.20±0.20,3.41±1.45 vs 0.99±0.15,4.10±1.05 vs 1.79±0.52,P<0.01),Bcl-2、Caspase-3表达明显低于海藻糖组(0.58±0.21 vs 1.23±0.25,0.87±0.25 vs 1.45±0.31,P<0.01)。结论海藻糖可以被视为一种Nrf2激活剂,通过激活Nrf2抑制氧化应激和凋亡,改善OGD/R诱导的心肌细胞损伤。

汉族脓毒症患者转录因子NF-E2相关因子2基因启动子-617C/A单核苷酸多态性的研究

目的 探讨转录因子NF-E2相关因子2（NRF2）启动子-617C/A多态性与脓毒症的易感性、严重程度及预后的关系.方法 应用DNA直接测序法检测浙江温州地区174例汉族脓毒症患者和203例健康体检者的NRF2启动子-617位点多态性,分析NRF2-617C/A与脓毒症易感性、严重程度及预后的关系.结果 （1）脓毒症者NRF2-617位点突变率（CA＋ AA）明显高于健康体检者（59.2％比46.3％;P =0.012）.（2）一般脓毒症者和严重脓毒症者NRF2-617基因型（CA＋ AA）分布差异有统计学意义（47.5％比65.5％;P=0.033）,但脓毒症休克者与无休克者（61.8％比57.1％;P=0.221）、脓毒症死亡者与存活者间无明显差别（56.8％比66.7％;P=0.258）.（3）非条件logistic回归分析显示：NRF2-617位点C→A突变与脓毒症易感性（OR=1.584,95％ CI1.025～2.447,P=0.038）及发生严重脓毒症（OR=0.453,95％ CI0.233～0.878,P=0.019）有关.结论 NRF2-617位点C→A突变与脓毒症易感性及发生严重脓毒症相关,但与脓毒症是否发生休克及预后无关.

人参皂甙Rbl在核因子NF-E2相关因子2／血红素氧合酶-1通路减轻肠缺血再灌注致急性肺损伤中的分子机制

目的探讨人参皂甙Rbl对肠缺血／再灌注致急性肺损伤的保护效应及核因子NF-E2相关因子2（Nrf2）／血红素氧合酶-1（HO-1）通路参与该效应的分子机制。方法成年雄性C57BL／6J小鼠随机分为5组：假手术组（S组）；肠缺血／再灌注组（I／R组）；再灌注＋Rbl组（I／R＋Rbl组）；全反式维甲酸（ATRA）＋再灌注组（ATRA＋I／R组）；ATRA＋再灌注＋Rbl组（ATRA＋I／R＋Rbl组）。采用肠缺血／再灌注模型，Westernblot检测肺组织Nrf2、HO-1表达变化；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测肺组织肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6、IL-10水平；检测超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量；检测肺湿／干比及肺组织病理损伤评分。结果与S组比较，其他4组Nrf2、HO-1蛋白表达，TNF-α、IL-6、MDA含量，肺组织湿／干重比及肺组织病理评分增高（P〈0．05）；与I／R组比较，I／R＋Rbl组Nrf2，HO-1蛋白表达，TNF-α，IL-6，MDA含量，肺组织彤干重比及肺组织病理评分降低（P〈0．05）；与1／R＋Rbl组比较，ATRA＋I／R组，ATRA＋I／R＋Rbl组Nrf2、HO-1蛋白表达，TNF-α、IL-6、MDA含量，肺组织湿／干重比及肺组织病理评分增高（P〈0．05）。SOD活性、IL-10水平与上述变化相反。结论肠缺St／再灌注可引起急性肺损伤，人参皂甙Rbl后处理能通过激活Nrf2／HO-1通路减轻肠缺血／再灌注所致肺损伤。