蛇床子素通过NF-kB信号通路调控退变髓核细胞的细胞外基质表达、炎症反应及凋亡

目的 研究蛇床子素对退变髓核细胞的细胞外基质表达、炎症反应和凋亡的作用及其潜在机制。方法 采用氧糖剥夺(Oxygen Glucose Deprivation, OGD)培养建立退变髓核细胞模型,将细胞分为:对照组(正常培养)、OGD组(OGD培养)、蛇床子素组(OGD培养+蛇床子素处理)、PDTC组(OGD培养+NF-κB通路抑制剂PDTC处理)和蛇床子素+PDTC组(OGD培养+蛇床子素+PDTC处理)。采用Western blot检测细胞中Ⅱ型胶原(Collagen typeⅡ,Col2al)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、P65和p-P65蛋白表达,ELISA法检测细胞培养液中炎性因子血清白细胞介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 与对照组比较,OGD组细胞中Col2al、Aggrecan蛋白相对表达水平明显降低,细胞培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高,细胞凋亡率明显升高,细胞中p-P65蛋白表达明显升高;与OGD组比较,蛇床子素组和PDTC组细胞中Col2al、Aggrecan蛋白相对表达水平明显升高,细胞培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低,细胞凋亡率明显降低,细胞中p-P65蛋白表达明显降低,而蛇床子素+PDTC组上述指标改变最为明显。结论 蛇床子素可能通过抑制核因子激活的B细胞的κ轻链增强(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的活性,促进退变髓核细胞的细胞外基质合成、抑制退变髓核细胞的炎症反应和凋亡。

BET抑制剂(+)-JQ1通过调节NF-KB信号通路保护小鼠急性肝衰竭实验研究

目的探讨溴结构域和额外末端结构域(BET)抑制剂(+)-JQ1对脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-Gal)诱导的小鼠急性肝衰竭(ALF)的保护作用及其作用机制。方法将47只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=15)、模型组(n=17)和(+)-JQ1干预组(n=15),采用腹腔注射LPS/D-Gal联合诱导ALF模型,其中在干预组造模前2 h腹腔注射(+)-JQ1。在造模4 h后每组处死5只小鼠,其余小鼠继续喂养至72 h,观察存活率。采用ELISA法检测血清TNF-α,采用RT-qPCR法和Western bloting法分别检测mRNA和蛋白表达。结果模型组72 h小鼠存活率为16.7%(2/12),(+)-JQ1干预组为60.0%(6/10,P>0.05);ALF组血清ALT水平为(2779.0±200.6)U/L,显著高于对照组[(44.9±2.5)U/L,P<0.05],血清AST水平为(2885.0±143.6)U/L,显著高于对照组[(76.0±5.7)U/L,P<0.05],而(+)-JQ1干预组血清ALT和AST水平较模型组显著降低[分别为(948.7±46.3)U/L和(1704.0±42.1)U/L,P<0.05];ALF组肝组织TNF-αmRNA水平为(103.7±23.0),显著高于对照组[(1.2±0.2),P<0.05],IL-6 mRNA水平为(73.4±15.8),显著高于对照组[(1.1±0.1),P<0.05],IL-1B mRNA水平为(13.5±2.7),显著高于对照组[(1.0±0.1),P<0.05],而经(+)-JQ1干预后,三种细胞因子mRNA水平均较模型组显著降低[分别为(12.8±1.2)、(11.7±0.7)和(1.5±0.3),P<0.05];ALF组血清TNF-α水平(631.6±57.5)U/L,显著高于对照组[(2.5±0.5)U/L,P<0.05],而(+)-JQ1干预组血清TNF-α水平为(139.8±8.1)U/L,显著低于ALF组(P<0.05);ALF组肝组织P65和IKB蛋白表达显著增强,而(+)-JQ1干预后显著减弱。结论(+)-JQ1对ALI小鼠肝脏具有保护作用,可能通过调节NF-KB信号通路下调促炎细胞因子的表达,从而减轻肝组织炎症反应。

加味香连丸对急性放射性肠炎大鼠NF-kB信号通路的影响

目的 探究加味香连丸对急性放射性肠炎大鼠核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 将40只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、加味香连丸组、思密达组。对除正常组外的3组大鼠予直线加速器6-MV的X射线单次全腹部照射,总剂量12 Gy,剂量率200 cGy/min,建立急性放射性肠炎模型。照射后12 h开始灌胃,观察各组大鼠形态学、体质量变化;利用光学显微镜下观察及图像分析软件对比各组肠组织病理改变,并用ELISA法测定肠组织Toll样受体4(TLR-4)、NF-κB p65、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果 模型大鼠均出现急性放射性肠炎症状,小肠组织不同程度地出血、坏死。加味香连丸组TLR-4、NF-κB p65及相关炎症因子IL-6、TNF-α含量与正常组比较未见明显差异(P> 0.05)。结论 加味香连丸对急性放射性肠炎大鼠NF-κB信号通路存在影响,能改善相关炎症指标,阻止炎症信号放大,对肠道黏膜起到一定的保护作用。

艾灸对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织TLR4/NF-kB信号通路影响

目的探讨艾灸对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织TLR4/NF-kB信号通路的影响。方法30只SD大鼠随机分为正常组、模型组和艾灸组,每组10只。模型组和艾灸组大鼠于左后肢足趾皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)制备佐剂性关节炎(AA)模型;造模成功后,艾灸组取左侧足三里施灸;正常组和模型组仅常规饲养,不做任何干预。3组均于15 d后用足趾容积测量仪测量大鼠左后肢足趾容积。用苏木精-伊红(HE)染色观察左后肢足趾关节滑膜组织形态,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠左后肢足趾关节滑膜组织白细胞介素(IL)-1b和肿瘤坏死因子(TNF)-a的浓度。用荧光定量PCR法(RT-q PCR)检测左后肢足趾关节滑膜组织Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-kB信号通路中髓样分化因子(Myd)88、TLR4、NF-kB p65、NF-kB抑制因子a(IkBa)、IkB激酶复合物b(IkKb)的m RNA表达量。结果与正常组比较,模型组大鼠足趾容积显著升高(P<0.01),滑膜细胞出现增生,组织中可见大量炎细胞浸润,滑膜表面细胞排列不整齐,滑膜组织IL-1b和TNF-a浓度升高(P<0.01),而且Myd88、TLR4、NF-kB p65、IkBa、IkKb的m RNA表达均明显升高(P<0.01);与模型组比较,艾灸组大鼠足趾容积和滑膜组织上述各项指标水平均明显降低(P<0.01)。结论艾灸能够通过抑制TLR4/NF-kB信号通路降低AA模型大鼠滑膜炎症反应,缓解足趾肿胀。

健脾养血祛风方对树突状细胞TLRs/MyD88/NF-kB信号通路的干预机制

目的探究健脾养血祛风方对树突状细胞(DCs)Toll样受体(TLRs)经典MyD 88-NF-κB信号通路的影响。方法从小鼠骨髓分离单核细胞并诱导培养为树突状细胞。采用流式细胞术检测小鼠DCs表面分子CD80和CD86的表达情况;CCK8检测健脾养血祛风方对DCs细胞活力的影响;RT-q PCR检测TLR2、TLR3、TLR4和TLR9表达水平,同时检测下游信号相关蛋白IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB表达;ELISA检测IL-4、IL-10、INF-γ、IL-12水平。结果在不影响细胞活力的前提下,50μg/mL健脾养血祛风方能明显增加TLR2、TLR3、TLR4和TLR9的表达(P<0.01),同时能促进DCs中IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB水平(P<0.01)。此外,50μg/mL、75μg/mL健脾养血祛风方还可增加INF-γ、IL-12的释放(P<0.01),抑制IL-4、IL-10的生成(P<0.01)。结论健脾养血祛风方可促进DCs的TLRs/MyD 88/NF-κB信号通路激活,从而调控炎症因子表达,使Th1/Th2细胞因子网络平衡体系向Th1方向倾斜,缓解特应性皮炎(AD)。

基于“TLR4/NF-kB”信号通路研究“加味四妙丸”治疗急性痛风性关节炎大鼠的作用机制

[目的]观察"加味四妙丸"治疗急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)大鼠的疗效,并基于"TLR4/NF-kB"信号通路探讨"加味四妙丸"作用机制。[方法]108只SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组、"加味四妙丸"低、中、高剂量组,每组18只。除正常组外,其余大鼠参照Coderre造模方法膝关节腔注射尿酸钠悬浊液制作AGA模型,治疗4d后,计算各时间点受试关节肿胀指数,光学显微镜观察受试关节滑膜组织病理学变化,采用ELISA法检测关节腔冲洗液IL-1β、TNF-α的含量,免疫组化法检测关节滑膜组织TLR4、NF-kB、p-NF-kB蛋白表达,RT-PCR法检测滑膜组织TLR4m RNA表达。[结果]与正常组比较,模型组大鼠膝关节肿胀指数显著升高(P<0.01),关节滑膜组织炎性改变明显,滑膜组织中TLR4、NF-kB、p-NF-kB蛋白表达量和TLR4m RNA表达量显著上调(P<0.01),关节腔冲洗液中IL-1β、TNF-α含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,"加味四妙丸"中、高剂量组大鼠治疗后关节肿胀指数显著下降(P<0.01),关节滑膜组织炎性改变明显减轻,滑膜组织中TLR4、NF-kB、p-NFkB蛋白表达量和TLR4m RNA表达量均显著下调(P<0.01),关节腔冲洗液中IL-1β、TNF-α含量显著下降(P<0.01)。[结论]"加味四妙丸"可能通过抑制"TLR4/NF-kB"信号通路,从而抑制IL-1β、TNF-α的产生,起到治疗AGA的作用,且其疗效与药物剂量有一定相关性。

NF-kB信号通路与椎间盘退变的研究进展

椎间盘退变性改变的发生和发展是一个复杂的过程，其结果是导致椎间盘源性疼痛、椎间盘突出症、椎体滑脱、椎管狭窄等脊柱退行性病变的首要诱因。核转录因子-kB（nuclear factor-kappaB，NF-kB）是一个多向性核转录因子，可调节多种细胞因子、酶等基因的表达，其中大部分酶的功能是基质降解作用，导致细胞外基质含量的减少，是近年来在椎间盘退变方面研究较为热点的一种。本文就NF—kB信号通路与其在椎间盘退变发挥的作用做一简单介绍。1

蛛网膜下腔出血患者TLR4/NF-κB信号通路变化及意义

目的探究蛛网膜下腔出血患者Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路变化及意义。方法选取作者医院2018-05/2021-06月收治的60例蛛网膜下腔出血患者作为观察组,另选取同期体检健康者60例作为对照组。比较两组TLR4/NF-κB信号通路相关因子表达,分析蛛网膜下腔出血患者TLR4/NF-κB信号通路相关因子与神经功能损害美国国立卫生院卒中量表(national institutes of health stroke scale,NIHSS)评分的关系。比较不同预后患者发病第1、3、7、14天外周血TLR4/NF-κB信号通路相关因子,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,评价TLR4/NF-κB信号通路相关因子对蛛网膜下腔出血患者预后的预测价值,分析TLR4/NF-κB信号通路相关因子与蛛网膜下腔出血患者预后不良风险的关系。结果观察组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达均高于对照组,组间比较差异有统计学意义(P均<0.05)。蛛网膜下腔出血患者入院当天NIHSS评分为(11.24±3.12)分,根据Pearson相关性模型分析可知,蛛网膜下腔出血患者TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达均与NIHSS评分呈正相关关系(P<0.05)。不同组别间患者TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量差异有统计学意义(F组间=8.037、19.348,P均<0.001),不同时间点患者TLR4 mRNA相对表达量差异有统计学意义(F时间=5.128、16.207,P均<0.001),且时间与组间存在交互效应(F交互=6.497、18.032,P=0.015、<0.001)。预后不良组患者发病第1天TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量较预后良好组患者差异无统计学意义(P>0.05)。预后不良组患者发病第3天、7天、14天TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均高于预后良好组患者(P均<0.05)。预后不良组患者、预后良好组患者发病第3天TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量升至最高(P均<0.05);发病第7天、14天TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量均较发病第3天明显下降,且发病第14天降至最低(P均<0.05)。以预后不良作为阳性样本,预后良好作为阴性样本,绘制ROC曲线,结果显示,发病第3、7、14天TLR4 mRNA、NF-κB mRNA联合预测蛛网膜下腔出血患者预后的AUC分别为0.854、0.894、0.915,较各指标单独诊断价值明显提高。Logistic回归分析显示,TLR4 mRNA、NF-κB mRNA仍与蛛网膜下腔出血患者预后不良有关(P均<0.05)。结论蛛网膜下腔出血后TLR4/NF-κB信号通路被激活,TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达明显上调,且TLR4/NF-κB信号通路与蛛网膜下腔出血患者早期脑损伤有关,为临床治疗提供了新思路,有助于改善患者预后。

基于NF-kB信号通路探讨芍药苷对LPS诱导的人软骨细胞炎症及退变的作用机制

目的观察芍药苷(PF)对于脂多糖(LPS)诱导的人软骨细胞炎症及退变的影响,并初步探索其作用机制。方法取2019年04月—2019年10月于北京中医药大学第三附属医院行全膝关节置换术的原发性膝关节骨性关节炎(KOA)患者术中废弃的软骨组织,用胰酶和胶原酶消化成软骨细胞。用CCK-8法检测不同浓度PF对软骨细胞活力的影响,选取合适浓度用于后续实验。将软骨细胞随机分为5组,即空白组,模型组以及PF低、中、高浓度组,除空白组外,其余4组均予以LPS诱导模拟关节炎环境,PF低、中、高浓度组分别给予10、20、50μmol/L的PF进行干预。使用qPCR法检测各组细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶13(MMP13)及聚蛋白多糖酶5(ADAMTS5)含量;Western-blot法检测各组细胞中核转录因子(NF-kB p65)、核转录因子kB抑制剂激活酶(IkK)及核转录因子kB抑制剂(IkB)表达水平。结果CCK-8结果显示10、20、50μmol/L的PF可以显著提高人软骨细胞增殖活力,而过高浓度(200μmol/L)的PF会抑制软骨细胞活力。qPCR结果显示,PF各组与模型组比较IL-1β、IL-6、TNF-α含量及MMP13、ADAMTS5表达水平均降低(均P<0.05);Western-blot结果显示,PF各组与模型组比较NF-kB p65及IkK表达水平明显降低,而IkB表达明显升高(均P<0.05)。结论芍药苷可以阻止NF-kB通路激活,抑制软骨细胞炎症及延缓软骨退变,是一种潜在的治疗KOA的药物。

夏枯草口服液对STAT3和NF-KB信号转导通路的影响

目的 探讨夏枯草口服液对炎症相关STAT3和NF-KB信号通路的抑制作用.方法 应用稳定转染STAT1-luciferase和STAT3-luciferase报告基因质粒的HepG2细胞及稳定转染NF-KB-luciferase报告基因质粒的293细胞,分别研究夏枯草口服液对STAT3和NF-KB信号通路的影响.结果 夏枯草口服液10 mg/ml、5mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml和0.1mg/ml对STAT3信号通路抑制率分别为98.39%、96.77%、81.53%、57.18%和15.73%,IC50为0.4591mg/ml,对NF-KB信号通路抑制率分别为99.92%、99.48%、91.29%、58.36%和-11.30%,IC50为0.3719 mg/ml.结论 夏枯草口服液抗炎作用的机制可能与抑制STAT3和NF-KB信号通路有关.

淫羊藿苷提高SIRT6酶活性及抑制小鼠NF-κB炎症信号通路的实验研究

目的观察淫羊藿苷（Icrrin，ICA）对组蛋白去乙酰化酶SIRT6的激活作用及对老年小鼠体内NF-kB（p65）、SIRT6蛋白表达及NF—kB信号通路下游炎症细胞因子表达的影响。方法以体外酶学实验观察ICA对SIRT6的激活作用并绘制不同剂量浓度激活效率曲线。选取24月龄老年组（N=11）、24月龄＋ICA干预组（N=12）和3月龄青年组小鼠（N=10）的心、肝、肌肉组织，用Westernblot检测NF-kB（p65）和SIRT6蛋白表达水平；采用ELISA法柃测小鼠血清中肿瘤坏死网子α（TNF—α）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）、白细胞介素-2（IL-2）和白细胞介素-6（IL-6）的含量。结果体外酶学实验显尔ICA随着药物浓度的下降，对SIRT6逐渐呈现激活效应，在10。mol／L浓度时达到最大激活效应为142％。小鼠实验显示ICA干预后，心脏、肝脏与肌肉组织中NF—kB（p65）蛋白表达与老年小鼠比较呈现下调趋势，而SIRT6蛋白表达较老年小鼠则呈现上调趋势；与青年小鼠比较，老年小鼠血清中炎症细胞TNF-α、ICAM-1、IL-2、IL-6的含量均明显上调（P〈0．05、P〈0．01）；与老年小鼠比较，ICA干预后小鼠血清中炎症因子TNF-α、ICAM-1、IL-2、IL-6的含量均明显下降（P〈0．05、P〈0．01）。结论ICA对SIRT6的酶活性具有显著的激活效应，且在极低的药物浓度下仍对SIRT6有激活作用；ICA能上调老年小鼠组织中SIRT6蛋白表达，抑制NF—kB（p65）蛋白表达及下调下游炎症细胞因子的产生，提示ICA延缓炎性衰老的作用机制及干预新靶点与NF—kB信号通路和组蛋白去乙酰化酶SIRT6密切相关。

电针天枢穴对溃疡性结肠炎大鼠NF-κB信号通路的影响

目的:探讨电针天枢穴对溃疡性结肠炎(UC)大鼠NF-κB信号通路的影响。方法:SD大鼠60只随机分为3组:空白组、模型组和电针组,每组各20只,其中模型组和电针组采用TNBS溶液灌肠造模,造模后电针组给予针刺双侧天枢穴电针,空白组和模型组动物每天同一时间放置笼中固定。通过光镜下观察大鼠肠黏膜组织病理学改变,记录分析溃疡性结肠炎结肠黏膜损伤指数(CMDI);酶联免疫吸附法(ELISA法)测定大鼠血清白介素1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α);qRT-PCR法检测肠粘膜NF-κB p65 mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠溃疡性结肠炎结肠黏膜损伤指数明显升高(P<0.01),血清IL-1、IL-6、TNF-α明显升高(P<0.05),NF-κB p65mRNA的表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,电针组大鼠溃疡性结肠炎结肠黏膜损伤指数明显降低(P<0.05),血清IL-1、IL-6、TNF-α明显降低(P<0.05),NF-κB p65 mRNA的表达明显降低(P<0.05)。结论:电针天枢穴可以抑制肠道炎症反应,降低NF-κB的表达,从而达到改善UC炎症状态及免疫应答的作用。

冠心康对动脉粥样硬化LDLR^(-/-)小鼠肝组织MAPKs/NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响

目的观察冠心康对LDLR^(-/-)小鼠肝组织MAPKs/NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。方法将24只雄性LDLR^(-/-)小鼠随机分为模型组,冠心康低、中、高剂量组,以C57BL/6J小鼠为对照组。除对照组外,每组给予高脂饲料喂养12周。对照组、模型组每日给予200μL 0.9%NaCl溶液灌胃,冠心康低、中、高剂量组分别每日给予7.24 g/kg、14.48 g/kg、28.96 g/kg的中药煎剂200μL灌胃,共12周。采用生化检测方法检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)水平;油红O染色法观察小鼠斑块面积;HE染色法观察小鼠肝组织结构;Western blot测定细胞外调节蛋白激酶(Erk1/2),分子量为38 kDa的促分裂素愿活化蛋白激酶(P38),c-Jun氨基末端激酶(JNK),核因子κB抑制蛋白(IκB),核因子κB蛋白表达(NF-κB);RT-PCR、ELISA法检测白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA及含量;免疫荧光法观察TNF-α表达。结果与模型组比较,冠心康各剂量组小鼠血清TC、TG、ALT、AST水平降低(P<0.05),主动脉斑块面积减少,肝组织病理变化改善,肝组织Erk1/2,P38,JNK,IκB,NF-κB水平降低(P<0.05),肝组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达下调(P<0.05),血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量减少(P<0.05),肝组织TNF-α表达减少(P<0.05)。结论冠心康可通过抑制MAPKs/NF-κB信号通路,减轻LDLR^(-/-)小鼠肝脏炎症,进而改善动脉粥样硬化。

NF—KB信号通路与肺部炎症疾病

核转录因子-KB（NF—KB）是一种多效性的转录因子，其受细胞因子、趋化因子、氧化应激、细菌脂多糖等刺激而活化后，参与机体炎症反应、免疫反应、细胞凋亡和肿瘤等多种生物进程。大量研究证明，NF—KB信号通路通过介导多种细胞因子的表达参与了急性肺损伤、慢性阻塞性肺疾病、肺纤维化等肺部炎症疾病。因此，本文就NF—KB信号通路与肺部炎症疾病的发生、发展及作用机制做一简要的综述，希望为NF—KB成为治疗肺部炎症疾病作用靶点提供有用的信息。

加味大黄牡丹皮汤对急性盆腔炎模型大鼠子宫、卵巢的保护作用及NF-κB信号通路的影响

目的探讨加味大黄牡丹皮汤对急性盆腔炎模型大鼠子宫、卵巢的保护作用及NF-kB信号通路的影响。方法取10只大鼠为对照组,另取30只大鼠建立盆腔炎大鼠模型,将大鼠按随机数字表法随机分为模型组(混合菌液接种法制备)、加味大黄牡丹皮汤组(加味大黄牡丹皮汤6.0 g/kg)、阿奇霉素组(阿奇霉素1.7 mg/kg)o第1次感染8 d后,收集大鼠外周血、子宫、卵巢,酶联免疫吸附试验检测血清中IL-6、IL-8、TNFp的含量;右侧子宫和卵巢HE染色观察组织结构和病变特点,并评估炎症细胞浸润程度;蛋白质印迹法和逆转录聚合酶链反应检测NF-KBp65 JkB«相对蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠子宫和卵巢病理病变明显,可见大量炎症细胞浸润,炎症细胞的组织学半定量评分升高,血清中IL-6、IL-8、TNF-a含量升高,子宫和卵巢组织中NF-KBp65 JKBa相对蛋白表达水平上调,差异有统计学意义(P V0.05)。与模型组比较,加味大黄牡丹皮汤组和阿奇霉素组大鼠炎症细胞浸润情况相对改善,组织学半定量评分降低,血清中IL-6、IL-8、TNF-a含量降低,子宫和卵巢组织中NF-KBp65 JKBa相对蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05).结怡加味大黄牡丹皮汤通过减少炎症细胞的浸润和抑制细胞因子IL-6,IL-8,TNF-a的过量产生,对急性盆腔炎大鼠子宫、卵巢有一定的保护作用。

Wnt1诱导分泌蛋白-1通过NF-κB通路促进食管鳞癌细胞的增殖和侵袭转移

目的:探讨Wnt1诱导分泌蛋白-1(Wnt1 induced secreted protein-1,WISP-1)在食管鳞癌细胞侵袭转移的作用机制。方法:体外培养人食管鳞癌细胞株Eca109、TE-8和正常食管上皮细胞Het-1a,荧光定量PCR和蛋白质印迹检测WISP-1表达。将食管鳞癌细胞株Eca109和TE-8分为空白对照组、阴性对照组和WISP-1 siRNA组,利用CCK8法检测各组细胞增殖改变;流式细胞术分析不同处理组细胞凋亡率;Transwell实验检测细胞侵袭能力变化;蛋白质印迹法检测细胞中VEGF-A,VEGF-C,MMP2,MMP9以及NF-κB通路相关蛋白的表达量;酶联免疫吸附法测定培养上清液中VEGF-C和MMP9分泌量。结果:荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,食管鳞癌细胞中WISP-1表达量高于正常食管上皮细胞(P<0.01);CCK8和流式细胞术结果显示,下调WISP-1后,食管鳞癌细胞株增殖明显抑制(P<0.05),凋亡率无明显影响;蛋白质印迹结果显示,下调WISP-1对VEGF-A和MMP2表达无明显影响,而VEGF-C和MMP9表达明显得到抑制;酶联免疫吸附结果显示,VEGF-C和MMP9分泌量随WISP-1下调也出现明显下降(P<0.05);下调WISP-1后,食管鳞癌细胞株侵袭能力明显降低(P<0.01);下调WISP-1表达显著抑制NF-κB磷酸化并促进IκBα的磷酸化,抑制NF-κB信号活化水平。结论:WISP-1可通过NF-κB通路,增加MMP9,VEGF-C的表达和分泌,促进食管鳞癌细胞增殖及侵袭转移的能力。

金丝桃苷对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭的影响

目的探讨金丝桃苷(hyperin)对卵巢癌细胞SKOV3的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法将SKOV3细胞分为:正常对照组、金丝桃苷组和阳性对照顺铂组。MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blot检测cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、Bcl-2、p65和p-IκB-α的蛋白表达;划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果与正常对照组相比,金丝桃苷处理显著抑制SKOV3的细胞增殖(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05),上调cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9而下调Bcl-2的蛋白水平(P<0.05),降低细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),减少p65和p-IκB-α的蛋白水平(P<0.05),抑制NF-κB信号通路的激活,且以上作用均随金丝桃苷处理浓度的增大而增强。结论金丝桃苷抑制SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,这可能与抑制NF-κB信号通路有关。

高压氧联合儿茶素通过调控TRAF6/NF-κB信号通路抑制人骨髓基质HS-5细胞的炎症反应

目的探讨高压氧(HBO)联合儿茶素(Can)对脂多糖(LPS)诱导的人骨髓基质HS-5细胞炎症反应的影响及其作用机制。方法将一部分状态良好的正常HS-5细胞分为对照组(DMEM培养基),另一部分HS-5细胞随后通过LPS构建骨髓炎症细胞模型后再分为4组:模型组(培养基中加入1.0μg/ml LPS)、HBO组(培养基中加入1μg/ml LPS+0.2 MPa HBO处理)、Can组(培养基中加入1.0μg/ml LPS+150μmol/L Can)及联合组(培养基中加入1μg/ml LPS+150μmol/L Can+0.2 MPa HBO处理)。采用CCK-8法检测各组HS-5细胞的增殖情况,通过ELISA法测定HS-5炎症细胞液中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的表达水平,流式细胞术检测各组HS-5炎症细胞的凋亡情况,Western blotting实验检测HS-5炎症细胞TLR6/NF-κB信号通路蛋白的表达水平。结果CCK-8法检测结果显示,浓度150μmol/L Can对1.0μg/ml LPS诱导的HS-5细胞增殖产生抑制作用,并以此为参照建立骨髓HS-5炎症细胞模型。流式细胞术检测结果显示,联合组HS-5炎症细胞存活率[(13.99±1.25)%]明显低于模型组[(46.69±4.27)%]、HBO组[(39.28±3.74)%]和Can组[(23.14±2.20)%],差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组、HBO组和Can组比较,联合组HS-5炎症细胞内TLR6和p-NF-κB蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论Can联合HBO对HS-5炎症细胞具有很强的抗炎作用,其作用机制可能是通过调节TLR6/NF-κB信号通路来抑制LPS诱导产生的骨髓炎症反应,这将为骨伤患者的治疗提供新的思路。

瑞香素在TNF-α诱导的CIA大鼠成纤维样滑膜细胞NF-κB信号通路中的抑炎作用

目的探讨瑞香素(DAP)对TNF-α诱导的CIA大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)炎症反应的影响,阐明瑞香素调节NF-κB信号通路减轻炎症反应的分子机制。方法将FLS细胞分为FLS组,Model组,DAP组,TP组;采用免疫蛋白印迹法、免疫荧光染色法检测P65,P-P65在CIA大鼠FLS内的蛋白表达及定位情况;采用Real-Time PCR、酶联免疫吸附法检测各组细胞相关炎症因子的mRNA相对表达量及上清中的含量。结果 DAP组中P-P65蛋白相对表达量显著低于Model组(P<0.05);同时DAP组中P-P65的荧光强度较Model组明显减弱;DAP组中IL-6,TGF-β,ICAM-1的mRNA相对表达量和细胞上清分泌水平明显低于Model组(P<0.05),而IL-10的mRNA相对表达量和细胞上清分泌水平明显高于Model组(P<0.05)。结论 TNF-α可诱导FLS细胞中NF-κB信号通路活化,瑞香素可降低NF-κB信号通路中P65的磷酸化水平,调节相关炎症因子的分泌,减少炎症反应。

中药制剂毛萼乙素对免疫球蛋白类别转换的作用

目的研究中药制剂毛萼乙素(EriB)对免疫球蛋白类别转换(CSR)的作用。方法以不同剂量的EriB(0、0.75、1.5和2.0μmol/L)处理脂多糖(LPS)刺激下的B淋巴细胞系1B4.B6细胞,采用MTT和流式细胞术检测细胞的生长状态,并分别采用ELISA、RT-PCR和Western blotting方法检测免疫球蛋白的产生及其CSR的效率以及CSR相关基因的表达水平,采用报告基因法检测EriB对NF-κB的转录调控作用。结果随着EriB浓度的升高,B细胞增殖及CSR均出现障碍。进一步实验证实EriB通过抑制IKKα的活性阻断IκB磷酸化,进而抑制NF-κB1活化入核;同时直接抑制NF-κB1的转录从而导致其表达水平降低。结论EriB可通过NF-κB信号通路抑制CSR的发生。