苦参碱对特应性皮炎炎症、氧化应激和伤口愈合的影响

目的评估苦参碱对体外特应性皮炎(AD)模型中HaCaT角质形成细胞的炎症、氧化和迁移反应及伤口愈合的影响。方法采用MTT法评估苦参碱的细胞毒性,依据实验结果,将HaCaT细胞分为对照组,模型组,苦参碱0.05、0.1和0.2 mmol/L组,模型组采用10μg/L肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/干扰素-γ(IFN-γ)刺激HaCaT细胞24 h,苦参碱0.05、0.1和0.2 mmol/L组分别用相应浓度的苦参碱预处理细胞1 h,然后用10μg/L TNF-α/IFN-γ刺激24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定白细胞介素(IL)-6、IL-8和IL-1β和胸腺和活化调节趋化因子(TARC)、巨噬细胞衍生趋化因子(MDC)、调节活化正常T细胞表达和分泌的因子(RANTES)的水平;实时荧光定量PCR检测抗氧化基因表达水平;划痕愈合实验分析细胞迁移;免疫组织化学分析核因子(NF)-κB p65的核易位;Western blot检测p38、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p65蛋白的磷酸化水平。结果与模型组比较,苦参碱0.1和0.2 mmol/L组降低IL-6、IL-1β、IL-8和趋化因子的表达,增强超氧化物歧化酶(SOD)1、SOD2、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的表达,并促进划痕愈合率(P<0.05)。此外,苦参碱0.1和0.2 mmol/L可抑制p38、ERK和p65蛋白的磷酸化及p65的核易位。结论苦参碱具有抗炎和抗氧化特性,并刺激角质形成细胞AD模型的伤口闭合。

枸杞多糖对肝内胆汁淤积模型大鼠肝脏预防保护作用的研究

目的 探讨枸杞多糖(LBP)对肝内胆汁淤积模型大鼠肝脏损伤的预防保护作用。方法 SPF级雄性SD幼龄大鼠,设阴性对照组、模型组、LBP 50、150、450 mg/kg剂量组,以及阳性对照组,每组各10只。构建大鼠肝内胆汁淤积模型,模型组、LBP各剂量组及阳性对照组,予60mg/kg α-萘异硫氰酸酯,每隔1天给药一次,第2周开始改为每隔3天给药一次,持续6周。第2周起,各剂量组每天予不同剂量的LBP,阳性对照组予熊去氧胆酸,模型组大鼠予蒸馏水。6周后采集血液及肝组织样本,测定血清生化指标、凝血功能指标及白细胞分类计数指标,检测肝组织中的炎症因子含量以及Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、核转录因子(pNF-κB)及髓分化因子88(MyD88)蛋白的表达量,观察大鼠肝脏的病变情况。结果 与阴性对照比较,模型组大鼠血清γ-谷氨酰转移酶(γ-GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)、总血红素(TBiL)、胆固醇(CHOL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,血液白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYMP)、中性粒细胞(NEUT)、单核细胞(MONO)及嗜酸性粒细胞(EO)计数,纤维蛋白原(FIB)含量均升高(均P <0.05),肝组织中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6及巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)含量增加,TLR4、pNF-κB、MyD88蛋白表达水平上调(均P <0.05)。肝脏可见多量炎症细胞浸润、胆管增生、纤维组织增生等病理性改变,组织形态学观察评分上升(均P <0.05);与模型组比较,LBP450mg/kg组大鼠血清γ-GGT、TBA、TBiL、ALT水平,血液WBC、LYMP、NEUT计数,FIB含量均下降(均P<0.05),肝组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、MIP-2含量降低,TLR4、pNF-κB、MyD88蛋白的表达水平下调(均P<0.05),肝脏组织形态学观察评分下降(均P <0.05),肝脏损伤减轻,LBP 150 mg/kg组大鼠血液FIB含量均下降,TLR4蛋白的表达水平下调(均P<0.05)。结论 LBP对肝内胆汁淤积模型大鼠肝脏损伤有缓解和保护功效,其作用机制可能与下调TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白的表达,抑制过度炎症反应有关。

微小核糖核酸mmu-miR-8114和mmu-miR-3473b在细粒棘球蚴致敏小鼠中的调控作用

目的探索微小核糖核酸(miRNAs)在通过细粒棘球蚴感染引起的小鼠过敏反应中的调节作用。方法建立小鼠体内棘球蚴病动物模型,收集脾脏单核细胞进行转录组测序。比较过敏性小鼠和非过敏小鼠之间mRNAs和miRNAs的差异表达。使用Targetscan和miRanda软件预测mRNAs和miRNAs之间的靶向调控关系,并通过蛋白质—蛋白质相互作用(PPI)网络分析,识别核心基因,通过富集分析探讨核心基因的生物学作用。最后利用qRT-PCR和Western blot验证关键结果。结果过敏与非过敏小鼠之间存在1642个差异表达的mRNAs。对18个差异表达的miRNAs进行分析,鉴定出60个差异表达的靶标基因,其中在PPI网络中连通度最大的前10个基因被认定为核心基因。富集分析显示核心基因主要参与NF-kappa B信号通路。基于miRNAs与mRNAs之间的负调控作用以及双荧光素酶报告系统发现mmu-miR-8114与Atf3以及mmu-miR-3473b与Myd88具有靶向调控关系,并与NF-kappa B信号通路有关。通过qRT-PCR验证了mmu-miR-8114和mmu-miR-3473b在过敏小鼠中下调表达,Atf3、Myd88、Socs3在过敏小鼠中上调表达。qRT-PCR和Western blot结果发现NF-kappa B信号通路在过敏小鼠中的活性增加。结论本研究揭示了mmu-miR-8114和mmu-miR-3473b通过NF-kappa B信号通路调控导致小鼠过敏反应的重要作用,为理解细粒棘球蚴感染引起的过敏反应机制提供了新的见解。

益肺灸治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期临床疗效及对NF-κB/TGF-β1/Smad2信号通路影响

目的探讨益肺灸治疗慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)稳定期临床疗效及对核因子κB(NF-κB)/转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad2信号通路影响。方法选择河南中医药大学第一附属医院于2022年1月—2024年1月COPD稳定期患者80例,按随机表法分为对照组与观察组40例。对照组常规西医治疗,观察组在对照组基础上结合益肺灸治疗。两组治疗周期3个月。比较两组临床疗效,急性加重次数和住院次数;治疗前后呼吸困难、6 min步行距离(6MWD)和生活质量,肺功能,血清NF-κB、TGF-β1和Smad2水平变化。结果观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。观察组急性加重次数和住院次数均少于对照组(P<0.05)。两组治疗后MMRC评分和CAT评分低于治疗前,6MWD高于治疗前(P<0.05);观察组治疗后MMRC评分和CAT评分低于对照组,而6MWD高于对照组(P<0.05)。两组治疗后FVC和FEV_(1)/FVC高于治疗前(P<0.05);且观察组高于对照组(P<0.05)。两组治疗后血清NF-κB、TGF-β1和Smad2水平低于治疗前(P<0.05);且观察组低于对照组(P<0.05)。结论益肺灸治疗COPD稳定期临床疗效显著,其机制可能与下调NF-κB/TGF-β1/Smad2信号通路表达有关。

超声心动图参数及外周血T淋巴细胞亚群、NF-κB、CD64水平预测新生儿败血症预后的价值

【目的】探讨超声心动图参数及外周血T淋巴细胞亚群、核因子-κB(NF-κB)、簇分化抗原64(CD64)水平预测新生儿败血症预后的价值。【方法】选取2020年1月至2023年2月本院收治的95例新生儿败血症,根据预后情况将其分为存活组(n=80)和死亡组(n=15)。比较两组患儿超声心动图参数[左室短轴缩短率(FS)、升主动脉内径(AAO)、左室射血分数(LVEF)]、心肌损伤标志物[肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)]、T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+))、NF-κB、CD64水平;采用Logistic多因素回归分析新生儿败血症预后不良的相关影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析心电图指标及实验室指标预测新生儿败血症预后的临床价值。【结果】两组患儿肌酸激酶CK、CK-MB水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);存活组FS、AAO及LVEF高于死亡组患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患儿CD8^(+)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);存活组患儿CD3^(+)、CD4^(+)水平高于死亡组,NF-κB、CD64水平低于死亡组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患儿中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、C反应蛋白(CRP)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);存活组患儿白细胞计数(WBC)低于死亡组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素回归分析显示:FS、LVEF、CD64是影响新生儿败血症预后的相关因素(P<0.05)。FS、LVEF、CD64联合预测新生儿败血症预后的ROC曲线下面积为0.948,明显高于各指标单独预测的0.827、0.895和0.877(P<0.05)。【结论】FS、LVEF联合CD64检测对新生儿败血症预后有良好的预测价值,临床可通过密切监测上述指标及时判断新生儿败血症预后,采取相关干预措施。

清解化攻方调控NLRP3/TLR4/NF-κB信号通路对重症急性胰腺炎小鼠模型胰腺组织的保护作用

目的观察清解化攻方对重症急性胰腺炎(SAP)小鼠模型的治疗作用,探索清解化攻方抗炎症反应的作用机制。方法将36只C57BL/6J雄性小鼠随机分成空白组,模型组,清解化攻方低、中、高剂量组,西药组(乌司他丁),每组6只,除空白组小鼠,余各组小鼠采用逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠建立SAP模型,清解化攻方低、中、高剂量组在造模后分别予以清解化攻方1、2、4 g/kg灌胃,西药组在造模后予以腹腔注射乌司他丁(5×10^(4) U/kg),共干预7 d。采用苏木素-伊红染色观察胰腺组织病理改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠α-淀粉酶、脂肪酶、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18和TNF-α水平;RTqPCR检测胰腺组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)mRNA表达水平;免疫组化检测胰腺组织NLRP3、TLR4、NF-κB的阳性表达率;Western Blot技术检测NLRP3、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6蛋白的表达水平。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与空白组相比,模型组小鼠胰腺组织结构弥漫性破坏、胰腺小叶间隔局灶性扩张、腺泡萎缩和大量炎症细胞浸润,α-淀粉酶、脂肪酶、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18和TNF-α含量明显升高(P值均<0.05),NLRP3、TLR4、NF-κB mRNA表达水平及阳性表达率均明显上升(P值均<0.05),NLRP3、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6蛋白表达均明显上调(P值均<0.05)。与模型组相比,清解化攻方各剂量组和西药组可见小鼠胰腺组织结构稍紧密、完整,胰腺腺泡细胞排列有序,伴少量炎症细胞浸润和胰腺小叶出血灶,α-淀粉酶、脂肪酶、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18和TNF-α含量明显下降(P值均<0.05),NLRP3、TLR4、NF-κB mRNA表达水平及阳性表达率均明显降低(P值均<0.05),NLRP3、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6蛋白表达水平均明显减弱(P值均<0.05)。结论清解化攻方可能通过抑制NLRP3/TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白的激活,减少炎症介质的释放,防止炎症级联反应增强,进而对SAP小鼠胰腺组织发挥保护作用。

基于网络药理学和分子对接技术的灵芝改善2型糖尿病作用机制

目的应用网络药理学方法探讨灵芝在改善2型糖尿病(T2DM)中的作用机制。方法通过TCMSP筛选灵芝化学成分,使用SWISS Target Prediction导入主要成分的SMILE name获取单个基因名;结合DisGeNET和GeneCards获取疾病基因;利用Venn数据库筛选出交集靶点;在微生信平台构建活性成分和疾病靶点网络;利用STRING和Cytoscape数据库构建PPI网络;使用DAVID数据库进行GO和KEGG功能富集分析;使用AutoDock数据库进行分子对接。结果灵芝和2型糖尿病的共同靶点有146个;PPI网络包含灵芝和2型糖尿病共同目标有146个节点和2201条“边”;筛选出灵芝5个活性成分及与T2DM相关靶点146个;重要活性成分包括Methyl lucidenate F、环氧灵芝醇A、赤灵芝酸E、赤芝酮A、Methyl lucidenate Q,核心靶点包括PGR、PTPN1、NR3C2等;KEGG主要通路富集于卵母细胞减数分裂、NF-kappa B信号通路、长寿调节途径等;分子对接结果显示,化合物和重要靶位之间具有很强的融合作用。结论本研究进一步发现了灵芝中含有Methyl lucidenate F、环氧灵芝醇A、赤紫芝酸e、赤芝酸A、Methyl lucidenate Q等活性成分,为灵芝治疗2型糖尿病的核心组分,通过控制关键治疗靶点NR3C2和HSD11B2,影响NF-kappaB binding信息通路,从而达到改善2型糖尿病的效果。

血必净注射液联合乌司他丁注射液治疗脓毒症并发急性肺损伤的效果及对HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨血必净注射液联合乌司他丁注射液治疗脓毒症合并急性肺损伤的临床效果及对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 采用随机数字表法将2022年1—12月接受治疗的140例脓毒症并发急性肺损伤患者分为研究组70例和对照组70例。2组均按指南给予基础治疗,在此基础上研究组给予血必净注射液联合乌司他丁注射液治疗,对照组给予血必净注射液治疗,2组疗程均为2周。比较2组临床疗效,治疗前后血清HMGB1、TLR4及NF-κB水平,血清炎性因子水平,并记录2组不良反应。结果 治疗后研究组总有效率为91.43%(64/70)优于对照组的75.71%(53/70)(P<0.05)。治疗后2组血清HMGB1、TLR4、NF-κB、超敏C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、降钙素原水平均降低,且研究组低于对照组(P<0.05,P<0.01)。2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 血必净注射液联合乌司他丁注射液治疗脓毒症并发急性肺损伤患者临床效果较好,可有效降低血清HMGB1、TLR4、NF-κB和炎性因子水平,且安全性较高。

松果菊苷对雨蛙素诱导的急性胰腺炎大鼠模型胰腺及肝损伤的影响与机制

目的通过建立急性胰腺炎(AP)大鼠模型,研究松果菊苷(ECH)对雨蛙素诱导的AP大鼠模型胰腺及肝损伤的改善作用及机制。方法24只SD大鼠随机分为空白组(Con组)、对照组(Con+ECH组)、AP组和AP+ECH组4组,每组各6只。AP模型构建前7 d给予10 mg/kg ECH腹腔注射,雨蛙素末次给药24 h后,腹主动脉取血,分离血清行ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)、GGT、ALP、Alb、TBil、胆碱酯酶(ChE)、血淀粉酶(Amy)、脂肪酶(LPS)等生化检测;HE染色检测胰腺和肝组织病理学改变;透射电镜观察胰腺和肝组织微观结构改变;ELISA检测肝组织匀浆中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平;免疫组化分析胰腺和肝组织中TNF-α和p-p65 NF-κB水平;Western Blot检测肝组织中NF-κB通路蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q或Dunnett’s T3检验。结果与Con组相比,AP组大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS指标均明显增高(P值均<0.01);肝组织匀浆液IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α水平均增加(P值均<0.01)。ECH干预降低AP大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS水平,并能抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌。HE染色观察可见ECH干预后胰腺组织中腺泡细胞空泡变性和炎性细胞浸润较AP组减轻,肝细胞坏死较AP组减轻。透射电镜检查镜下见ECH干预后肝和胰腺细胞内线粒体肿胀程度较AP组减轻。ECH干预后能部分逆转AP大鼠胰腺和肝组织中p-p65 NF-κB、TNF-α的表达增加。此外,AP大鼠肝组织中MyD88、p-IκBα、p-IKKα、p-p65表达上调,而ECH干预后能部分逆转。结论松果菊苷可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB途径来改善AP诱发的胰腺和肝损伤。

茯苓甘草合剂辅助西药对慢性阻塞性肺疾病合并肌肉衰减患者NF-κB信号通路的影响

目的探讨茯苓甘草合剂辅助西药对慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肌肉衰减NF-κB信号通路的影响及分子机制。方法选取2020年8月至2022年8月COPD合并肌肉衰减患者104例,作为研究对象随机数字表法分为对照组和观察组,每组52例。对照组给予西药治疗,观察组给予西药+茯苓甘草合剂治疗。统计2组中医疗效、不良反应及治疗前后中医证候积分、NF-κB mRNA、蛋白及因子[白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、营养状况指标[转铁蛋白(Tf)、血红蛋白(Hb)、白蛋白(ALB)]、肌肉衰减相关指标[握力试验、起立-行走计时测试(TUGT)、5次坐立试验(FTSST)、肌少症筛查问卷(SARC-F)]。结果观察组中医治疗总有效率[86.54%(45/52)]高于对照组[67.31%(35/52)](P<0.05);治疗1个月、3个月后观察组中医证候积分低于对照组(P<0.05);治疗1个月、3个月后观察组NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、IL-8、IL-1、TNF-α低于对照组(P<0.05);治疗3个月后观察组握力高于对照组,FTSST、TUGT、SARC-F评分低于对照组(P<0.05);治疗期间,2组均未出现明显不良反应。结论茯苓甘草合剂辅助西药治疗COPD合并肌肉衰减效果确切,可通过抑制NF-κB信号通路,减轻炎性反应,改善患者营养状态,有效改善临床症状,且安全性高。

活性维生素D对高糖条件下肾小管上皮细胞肾素的影响

目的研究活性维生素D对高糖条件下大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)肾素、(前)肾素受体[(Pro)renin receptor,PRR]、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的影响及NF-κB在其中所起的作用。方法将体外培养的NRK-52E细胞分为7组,分别命名为对照组、高糖组、高糖+PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸铵)组、高糖+0.1/1.0/10.0/100.0 nM帕立骨化醇组。分别用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测各组肾素、PRR、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达,用染色质免疫沉淀-定量PCR检测NF-κB p65与肾素基因启动子的关系。结果与对照组相比,高糖组肾素、PRR、NF-κB的表达均有增加(P<0.05)。与高糖组相比,高糖+PDTC组肾素和NF-κB的表达下降(P<0.05),高糖+100.0 nM帕立骨化醇组肾素、PRR、NF-κB的表达均下调(P<0.05),染色质免疫沉淀-定量PCR证明NF-κB直接与肾素的基因启动子区域结合。结论活性维生素D可能通过抑制NF-κB减少高糖诱导的肾小管上皮细胞肾素的表达。

补阳还五汤对气虚血瘀型冠心病患者心功能的疗效

目的探讨补阳还五汤对气虚血瘀型冠心病患者心功能的疗效。方法回顾性选择2018年1月至2022年10月宁波大学附属第一医院诊断为冠心病且中医辨证均为气虚血瘀证的患者90例。其中60例左心室射血分数(LVEF)降低患者为心力衰竭(下称心衰)组,30例心功能正常为对照组。心衰组中30例患者给予补阳还五汤(补阳还五汤亚组)治疗4个疗程,另30例为西药治疗亚组,比较两亚组LVEF、6 min步行距离、氨基末端脑钠肽前体(pro-BNP)水平。检测核因子κB(NF-κB)信号通路相关基因(CCL4、CFLAR、ERC1、BCL2L1)m RNA表达水平。结果补阳还五汤亚组治疗后pro-BNP水平低于西医治疗亚组,6 min步行距离大于西医治疗亚组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。补阳还五汤亚组患者治疗后LVEF、6 min步行距离较治疗前增加,pro-BNP水平则较治疗前下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。补阳还五汤亚组治疗后CCL4、CFLAR和ERC1的m RNA表达水平低于西药治疗亚组,且低于治疗前,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论补阳还五汤能够改善气虚血瘀型冠心病患者的心脏功能,这可能与下调NF-κB信号通路介导的炎症反应相关。

姜黄素对帕金森病模型小鼠的神经保护作用及其机制

目的探究姜黄素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(Parkinson disease,PD)模型小鼠的神经保护作用及其机制。方法将72只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为Control组(A组)、MPTP组(B组)和MPTP+姜黄素组(C组)。实验前5 d,B、C组小鼠每天腹腔注射MPTP 30 mg/kg,A组小鼠腹腔注射等量生理盐水;第6天始,C组小鼠每天腹腔注射姜黄素(溶于DMSO)50 mg/kg,A、B组小鼠每天腹腔注射等量的DMSO,连续7 d。给药结束后,采用行为学实验评估各组小鼠的运动、学习和记忆力功能。实验第15天,取各组小鼠黑质区,ELISA法检测TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,蛋白印迹法检测CD86和NF-κB的相对含量,荧光免疫组织化学染色检测TH阳性神经元的数量。结果与B组相比,A、C组小鼠的下降时间明显减少,脱落潜伏期和交替百分比明显增加(F=17.29~19.28,P<0.05),黑质中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显减少(F=31.73~80.97,P<0.05),黑质中CD86、NF-κB蛋白的表达明显减少(F=24.93、55.61,P<0.05),黑质中TH阳性神经元的数量显著增加(F=47.64,P<0.05)。结论姜黄素可有效改善PD模型小鼠的行为障碍,发挥神经保护作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路,致小胶质细胞活化抑制、炎性反应发生降低、多巴胺能神经元退化减轻有关。

6-姜烯酚对急性肺损伤小鼠肺水肿的治疗作用及机制研究

目的:观察6-姜烯酚(6-SH)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠肺水肿的治疗作用,探究可能的作用机制。方法:采用随机数字表法将40只无特定病原体(SPF)级Balb/c小鼠分为对照组、模型组、6-姜烯酚组、地塞米松组,每组10只。鼻腔滴注LPS构建ALI模型,对照组滴注等量生理盐水。30 min后,给予6-姜烯酚组灌胃(100 mg/kg);地塞米松组给予腹腔注射(5 mg/kg);对照组和模型组给予灌胃等量生理盐水,24 h后结束实验,收集样本。测定肺组织湿/干重比(W/D)和肺系数;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定白细胞计数和总蛋白浓度;观察肺组织病理学改变、计算病理评分;测定BALF上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及白细胞介素-6(IL-6)水平;检测肺组织中Toll样受体4/核因子κB/水通道蛋白(TLR4/NF-κB/AQPs)信号通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组肺组织损伤明显,病理评分、肺系数、W/D增加(P<0.01),白细胞计数、总蛋白浓度及TNF-α、IL-1β、IL-6的水平升高(P<0.01);与模型组比较,6-姜烯酚组的肺系数和W/D降低(P<0.01或P<0.05),白细胞计数、总蛋白浓度以及TNF-α、IL-1β、IL-6的水平降低(P<0.01或P<0.05),AQP1和AQP5的蛋白表达水平升高(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p65以及p-NF-κB p65的表达水平降低(P<0.01或P<0.05)。结论:6-姜烯酚可能通过调控TLR4/NF-κB/AQPs信号通路发挥其抗炎作用和改善肺组织水液代谢与转运,有效缓解ALI小鼠的肺组织水肿。

优化溃结方对溃疡性结肠炎大鼠结肠Toll样受体/髓样分化因子88/核转录因子κB信号通路的影响

目的观察优化溃结方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠Toll样受体/髓样分化因子88/核转录因子κB(TLR/MyD88/NF-κB)信号通路的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、优化溃结方组、柳氮磺吡啶组,每组10只。除空白组外,其余3组均参考三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇二次致炎法结合束缚法建立UC气滞血瘀型大鼠模型。造模成功后优化溃结方组大鼠予优化溃结方药液1.674 g/(kg·d)灌胃,柳氮磺吡啶组大鼠予柳氮磺吡啶药液0.54 g/(kg·d)灌胃,空白组、模型组不予任何治疗。14天后检测各组大鼠血清白细胞介素17A(IL-17A)、IL-10、IL-22水平,结肠组织MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达水平。结果与空白组相比,模型组血清IL-17A、IL-22水平显著升高(P<0.05),IL-10水平显著下降(P<0.05);与模型组相比,优化溃结方组、柳氮磺吡啶组IL-17A、IL-22水平显著降低(P<0.05),IL-10水平显著升高(P<0.05);优化溃结方组IL-17A、IL-22、IL-10水平与柳氮磺吡啶组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组相比,模型组结肠组织MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达均显著增加(P<0.05);与模型组相比,柳氮磺吡啶组、优化溃结方组MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达均显著下降(P<0.05);优化溃结方组MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达与柳氮磺吡啶组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论优化溃结方可能通过调节TLR/MyD88/NF-κB信号通路,降低炎症因子水平,减轻炎症反应,修复结肠组织的超微结构,从而修复UC大鼠结肠黏膜屏障功能。

吴茱萸碱调节NF-κB通路对膝骨关节炎巨噬细胞极化的影响

目的探索吴茱萸碱(EV)调节核转录因子-κB(NF-κB)通路对膝骨关节炎(OA)大鼠巨噬细胞极化的影响。方法取SD大鼠采用关节腔内注射碘乙酸钠(MIA)法建立膝骨OA模型,随机分为模型组、EV低剂量(6.9 mg/kg)组、EV高剂量(13.8 mg/kg)组、EV高剂量(13.8 mg/kg)+佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)(2μg/kg)组,每组10只,另取10只大鼠关节腔内注射等量生理盐水设为对照组,以EV和PMA分组干预后检测各组大鼠关节压痛阈值、关节肿胀率、关节活动度与步态评分;番红O-固绿、HE染色分别检测各组大鼠软骨与滑膜组织病理形态;流式细胞术检测各组大鼠关节滑膜组织巨噬细胞极化情况;ELISA法检测各组大鼠血清与关节液中促炎因子[白细胞介素(IL)-6、IL-1、IL-1β]水平;免疫印迹法检测大鼠关节软骨与滑膜组织NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠软骨与滑膜组织形态发生明显病理损伤变化,关节压痛阈值、关节活动度明显降低(均P<0.05),关节肿胀率、滑膜厚度、步态评分、软骨病理评分、滑膜病理评分、滑膜组织M1型巨噬细胞占比与M1/M2比值、血清与关节液中IL-6、IL-1、IL-1β水平、软骨与滑膜组织p-核因子κB抑制因子α(p-IκB-α)/IκB-α、p-NF-κB p65/NF-κB p65明显升高(均P<0.05);与模型组比较,EV低剂量组、EV高剂量组大鼠软骨与滑膜组织形态病理损伤均减轻,关节活动度、滑膜组织M2型巨噬细胞占比均升高(均P<0.05),关节肿胀率、滑膜厚度、步态评分、软骨病理评分、滑膜病理评分、滑膜组织M1型巨噬细胞占比与M1/M2比值、血清与关节液中IL-6、IL-1、IL-1β水平、软骨与滑膜组织p-IκB-α/IκB-α、p-NF-κB p65/NF-κB p65均降低(均P<0.05),高剂量EV的作用更强;PMA可减弱EV对OA大鼠上述各指标的作用。结论EV可通过阻止NF-κB信号通路激活而促使M2型巨噬细胞极化并抑制M1型巨噬细胞极化,进而减轻膝骨OA大鼠炎症,改善其关节疼痛、肿胀、活动受限等症状。

IL-6对种植体周围炎大鼠牙龈组织中TNF-α表达的影响

目的 探究白细介素(IL-6)对种植体周围炎大鼠牙龈组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的机制。方法 按照随机数字表法将40只大鼠分为假手术组(sham组)、种植体周围炎大鼠模型组(PI组)、种植体周围炎大鼠模型给予IL-6抑制剂Tocilizumab组(Tocilizumab组)、在Tocilizumab组的基础上给予NF-κB/p65激活剂LPS组(LPS组),每组10只。观察种植体周围软组织袋深度(PPD)、探诊出血(BOP)、出血指数(BI)和牙龈指数(GI)。测量种植体周围骨高度和骨密度(Micro-CT法);检测种植体周围牙龈组织炎症浸润(HE染色);RT-PCR检测种植体周围牙龈组织中IL-6、TNF-α mRNA表达;检测牙龈组织中p-p65蛋白表达(蛋白质印迹法)。结果 与sham组比较,PI组大鼠种植体软组织中PPD(近颊、远颊、近舌、远舌)、BOP、BI和GI均明显增加(P<0.05);与PI组比较,Tocilizumab组大鼠种植体软组织中PPD(近颊、远颊、近舌、远舌)、BOP、BI和GI均明显降低(P<0.05);与Tocilizumab组比较,种植体软组织中PPD(近颊、远颊、近舌、远舌)、BOP、BI和GI均明显增加(P<0.05)。与sham组比较,PI组大鼠种植体骨高度、牙槽骨密度明显降低,IL-6、TNF-α mRNA和p-p65蛋白表达增加(P<0.05);与PI组比较,Tocilizumab组大鼠种植体骨高度、牙槽骨密度明显升高,IL-6、TNF-α mRNA和p-p65蛋白表达低于(P<0.05);LPS组大鼠种植体骨高度、牙槽骨密度低于Tocilizumab组,IL-6、TNF-α mRNA和p-p65蛋白表达高于Tocilizumab组(P<0.05)。结论 IL-6抑制剂可通过抑制牙髓组织中NF-κB通路激活,进而抑制种植体周围炎大鼠牙龈组织中TNF-α释放,从而减轻大鼠种植体周围炎发展。

肾小管HIF-1α/miR-23a通路在脓毒血症急性肾损伤中的作用机制

目的探讨肾小管低氧诱导因子-1α(HIF-1α)/MicroRNA-23a(miR-23a)通路在脓毒血症急性肾损伤(SA-AKI)中的作用及相关作用机制。方法体外培养人近曲小管上皮细胞(HK-2细胞),采用脂多糖(LPS)处理HK-2细胞构建SA-AKI细胞模型。LPS处理的HK-2细胞分为LPS组、NC siRNA组、HIF-1αsiRNA组、anti-miR-NC组、anti-miR-23a组、HIF-1αsiRNA+miR-NC组、HIF-1αsiRNA+miR-23a组,以正常培养的HK-2细胞作为空白对照组(Control组)。采用qRT-PCR法检测细胞中HIF-1α、miR-23a基因表达;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞中炎性因子[白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平;Western blot法检测细胞中HIF-1α蛋白、NF-κB通路蛋白表达。结果与Control组比较,LPS组HK-2细胞中HIF-1α蛋白和mRNA表达水平、miR-23a mRNA表达水平均升高,细胞活力降低,细胞凋亡率、细胞中IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高(P<0.05)。与LPS组比较,HIF-1αsiRNA组HK-2细胞中HIF-1α蛋白和mRNA表达水平、miR-23a mRNA表达水平均降低,细胞活力升高,细胞凋亡率、细胞中IL-6、IL-1β和TNF-α水平均降低(P<0.05)。与LPS组比较,anti-miR-23a组HK-2细胞中miR-23a mRNA表达水平降低,细胞活力升高,细胞凋亡率、细胞中IL-6、IL-1β和TNF-α水平均降低(P<0.05)。与HIF-1αsiRNA组比较,HIF-1αsiRNA+miR-23a组HK-2细胞中miR-23a mRNA表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率、细胞中IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高(P<0.05)。与Control组比较,LPS组HK-2细胞p-NF-κB-p65/NF-κB-p65、p-IκBα/IκBα比值均升高(P<0.05)。与LPS组比较,HIF-1αsiRNA组和anti-miR-23a组HK-2细胞p-NF-κB-p65/NF-κB-p65、p-IκBα/IκBα比值均降低(P<0.05)。与HIF-1αsiRNA组比较,HIF-1αsiRNA+miR-23a组HK-2细胞p-NF-κB-p65/NF-κB-p65、p-IκBα/IκBα比值均升高(P<0.05)。结论肾小管HIF-1α通过调控miR-23a表达调节NF-κB信号通路,从而参与LPS诱导的肾小管上皮细胞损伤。

利拉鲁肽对2型糖尿病肾病大鼠细胞焦亡、炎症细胞浸润及对NF-κB通路的影响

目的探究利拉鲁肽(liraglutide,LIR)对2型糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠细胞焦亡、炎症细胞浸润及对核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路的影响。方法选取45只大鼠,随机选取10只为对照组,其余35只大鼠建立DN模型,30只大鼠建模成功,并随机分为3组(DN组及LIR高、LIR低剂量组),各10只。LIR低、高剂量组分别给予LIR 100、200 g·kg^(-1)·d^(-1),对照组及DN组给予等量的生理盐水。连续灌胃给药2周后,测量大鼠肾功能指标血清炎症因子水平,炎症细胞计数评估炎症细胞浸润情况,TUNEL染色法检测DNA损伤情况;检测细胞焦亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)及NF-κB通路相关蛋白的表达量。结果与对照组比较,DN组空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、24 h尿蛋白(urine total protein,UTP)及血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、及白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)水平升高,炎症细胞计数增多,TUNEL阳性细胞率升高,Caspase-1、IL-1β、IL-18、Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、p-NF-κB/NF-κB及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达上调(P<0.05);与DN组比较,LIR低、高剂量组FBG、UTP及BUN水平降低,TNF-α、IL-1β及IL-6水平降低,炎症细胞计数减少,TUNEL阳性细胞率降低,Caspase-1、IL-1β、IL-18、TLR4、p-NF-κB/NF-κB及NLRP3蛋白表达下调(P<0.05);与LIR低剂量组比较,LIR高剂量组FBG、UTP及BUN水平降低,TNF-α、IL-1β及IL-6水平降低,炎症细胞计数减少,TUNEL阳性细胞率降低,Caspase-1、IL-1β、IL-18、TLR4、p-NF-κB/NF-κB及NLRP3蛋白表达下调(P<0.05)。结论LIR能够改善2型DN大鼠炎症细胞浸润,抑制细胞焦亡,其作用机制可能抑制NF-κB通路有关。

海藻希瓦菌对小鼠结直肠腺瘤发生发展及其免疫微环境的影响

目的 明确海藻希瓦菌(S.algae)对小鼠结直肠腺瘤发生发展的影响及探讨其对免疫微环境的调控作用。方法 将24只小鼠分为3组:对照组、偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)组、AOM/DSS+S.algae组。比较各组小鼠的生存状态和结直肠腺瘤情况。取AOM/DSS组、AOM/DSS+S.algae组小鼠结直肠组织进行转录组测序,利用基因集富集分析和免疫浸润分析其免疫相关通路、免疫细胞和免疫因子的变化。结果 与AOM/DSS组相比,AOM/DSS+S.algae组小鼠体质量、存活率均下降,血便情况加重,生存状态较差、结直肠长度缩短(P均<0.05),平均腺瘤数量及大小增多(P均<0.05)。与AOM/DSS组相比,AOM/DSS+S.algae组炎症反应增强(P <0.05),促炎细胞因子白介素(IL)-2、IL-6、IL-12、IL-17、干扰素、肿瘤坏死因子(P均<0.05)和IL-1β的产生呈上升趋势,抑炎细胞因子IL-4、IL-10、IL-13(P均<0.05)和转化生长因子β呈抑制趋势,初始B细胞和效应B细胞(P <0.05)呈增多趋势,且激活小鼠体内核因子-κB(NF-κB)信号通路。结论 S.algae可能通过激活免疫信号(如活化B细胞和激活NF-κB通路),形成促肿瘤免疫微环境,进而促进结直肠腺瘤发展。