FHL2通过NF-κB信号通路调节THP-1巨噬细胞泡沫化

目的 明确4个半LIM结构域蛋白(FHL2)是否能够通过调节核因子κB(NF-κB)信号通路影响巨噬细胞泡沫化。方法 构建FHL2过表达质粒及合成FHL2小干扰RNA(si-FHL2),分别转染至人单核/巨噬细胞系THP-1中,Western blot检测FHL2表达;使用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激细胞,ELISA检测细胞IL-6、IL-1β、TNF-α等细胞因子的表达;油红O染色检测细胞泡沫化程度;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果 转染过表达FHL2质粒的细胞中FHL2表达量升高(P<0.01),而转染si-FHL2的细胞表达量降低(P<0.05);敲低FHL2能够下调炎性细胞因子的分泌(P<0.01);FHL2下调能够缓解THP-1巨噬细胞泡沫化;同时,FHL2下调抑制NF-κB信号通路的活化(P<0.05),而在过表达FHL2组中结果呈相反趋势。结论 下调FHL2的表达可通过抑制NF-κB信号通路活化,降低炎性细胞因子的分泌,缓解巨噬细胞的泡沫化。

Hsa-miR-650通过靶向RAC1抑制NF2阴性脑膜瘤的生长

目的本文旨在确定NF2表达阴性脑膜瘤中潜在的miRNA-mRNA轴,研究它们的靶向关系,并确定它们的生物学功能。方法从基因表达数据库(GEO)下载包含与NF2阴性脑膜瘤相关数据的GSE17792数据集。使用R软件中的limma包确定差异表达的mi RNA(De MiRNAs)。应用miRWalk 2.0数据库获取De MiRNAs的靶基因。利用相互作用基因检索工具(STRING)数据库构建蛋白质相互作用(PPI)网络,并通过Cytoscape软件确定核心基因。对筛选出的miRNA进一步验证其表达和生物学作用。结果在NF2阴性脑膜瘤肿瘤样本与蛛网膜组织对照组比较中发现了86个差异mi RNA,其中包括52个上调的mi RNAs和34个下调的miRNAs。在这些差异miRNA中鉴定出与274个靶基因相关的14个mi RNAs,并基于这些数据构建miRNA-靶基因网络。通过cyto Hubba分析显示,在PPI网络中有两个mi RNAs(hsa-miR-650和hsa-miR-623)位于前20个关键核心基因之中。进一步的定量逆转录PCR(q RT-PCR)实验证实,相对于正常脑组织,hsa-miR-650在NF2阴性脑膜瘤中的表达显著增高。下调hsa-miR-650抑制了NF2阴性脑膜瘤细胞的增殖并诱导细胞凋亡。最后,确定RAC1是hsa-miR-650的靶基因。结论Hsa-miR-650作为肿瘤促进剂,可能作为治疗NF2阴性脑膜瘤患者的治疗靶点。

PAK1和NF2/Merlin的拮抗作用驱动少突胶质细胞髓鞘膜扩张

在中枢神经系统中,少突胶质细胞(OL)髓鞘的形成依赖于肌动蛋白细胞骨架从聚合到解聚的转变。触发这种转变的分子机制尚未阐明。本研究确定P21活化激酶1(PAK1)是OL中肌动蛋白解聚的主要调节因子。我们的结果表明,PAK1以激酶抑制形式在OL中积累,从而触发肌动蛋白分解,进而导致髓鞘膜扩张。值得注意的是,PAK1结合伙伴的蛋白质组学分析使我们能够确定NF2/Merlin是其内源性抑制剂。本研究表明,OL中的Nf2敲低会导致PAK1活化、肌动蛋白聚合和OL髓鞘膜扩张减少。通过使用PAK1抑制剂治疗可以挽救这种影响。本研究还提供了证据表明,少突胶质细胞中特定的Pak1功能丧失会刺激体内髓鞘增厚。总体而言,我们的数据表明PAK1和NF2/Merlin对OL肌动蛋白细胞骨架的拮抗作用对于髓鞘的正常形成至关重要。这些发现对研究脱髓鞘疾病和神经发育障碍的机制和治疗有着重要意义。

基于ERK1/2-GSK3β-NFκB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响

目的 研究基于细胞外信号调节激酶(ERK)1/2-糖原合成酶激酶(GSK)3β-核因子(NF)κB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响。方法 40只SD大鼠随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余建立慢性肾衰竭(CRF)模型,建模成功后分为模型组、治疗组(芪黄苁蓉通便散贴)、药物对照组(复元四红散)各10只。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肾功能、氧化应激相关指标水平,苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察肾组织病理形态学,采集粪便检测肠道细菌种类及数量,Western印迹检测ERK1/2-GSK3β-NFκB通路相关蛋白。结果 与健康组相比,模型组尿素氮、血肌酐、尿酸、丙二醛、肠球菌、肠杆菌、ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β、p-GSK3β、NFκBp65、p-NFκBp65、单核细胞趋化蛋白-1、细胞间黏附分子-1升高,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、双歧杆菌、乳酸杆菌水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善,且以治疗组效果显著(P<0.05)。健康组肾组织结构正常;模型组肾小球变形,肾小管扩张,大量炎性细胞浸润;与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善。Masson染色显示,健康组结构正常;模型组出现肾组织肾小管发生变性、萎缩、破坏及再生等病理改变,间质中单核与淋巴细胞浸润及胶原纤维表达最多;治疗组与药物对照组肾小管、间质的病理改变得到有效改善,蓝色胶原纤维沉积也呈下降趋势。结论 芪黄苁蓉通便散贴可能是通过抑制ERK1-2-GSK3β-NF-κB通路的激活,改善CRF大鼠肠道菌群及肾功能。

芒果苷通过Nrf-2/HO-1/HMGB1/NF-κB通路减轻链脲佐菌素诱导的大鼠视网膜病变的机制探讨

目的:探讨芒果苷对链脲佐菌素(STZ)诱导的大鼠视网膜病变的影响。方法:采用1%STZ腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。采用酶联免疫吸附法检测血清和视网膜组织细胞因子水平,并采用试剂盒测量口服葡萄糖耐量(OGTT),以及血清和视网膜组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。采用苏木精伊红染色法(HE)染色评价视网膜组织病理变化。Western blot检测糖尿病大鼠视网膜组织核因子相关因子2(Nrf-2)及其下游信号通路的变化。结果:芒果苷可显著改善糖尿病大鼠OGTT,增加血清和视网膜组织中的SOD,降低MDA水平。芒果苷还可显著降低糖尿病大鼠的血清和视网膜组织细胞因子水平,调节视网膜组织中Nrf-2、血红素加氧酶-1(HO-1)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白的表达。结论:芒果苷可能通过Nrf-2/HO-1/HMGB1/NF-κB通路改善STZ诱导的大鼠视网膜组织视网膜病变、氧化应激和炎性反应。

宫颈癌组织中NHERF1、NF2蛋白表达水平及临床预后意义

目的:分析宫颈癌组织中钠氢交换子调节因子1(NHERF1)、NF2蛋白表达水平及临床预后意义。方法:选取2015年1月—2017年7月我院病理检查确诊的80例宫颈癌癌组织标本及相应的癌旁组织(距肿瘤边缘2cm处)标本。采用免疫组织化学染色法检测所有标本组织中NHERF1、NF2表达水平,并分析NHERF1、NF2表达与宫颈癌患者临床病理特征及预后的关系。结果:宫颈癌组织中NHERF1、NF2阳性表达率分别低于癌旁组织NHERF1、NF2阳性表达率(P<0.05)。NHERF1、NF2表达水平与宫颈癌患者临床分期、分化程度、淋巴结转移存在显著关系(P<0.05)。NHERF1阳性、阴性宫颈癌患者5年生存率分别为66.67%、32.08%,二者差异有统计学意义(P<0.05);NF2阳性、阴性患者5年生存率分别为68.97%、29.41%,二者差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析得出:不同临床分期、分化程度、淋巴转移、NHERF1及NF2表达宫颈癌患者5年生存率比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归模型分析得出:临床Ⅲ/Ⅳ期(OR=2.28)、低分化(OR=3.38)、淋巴转移(OR=4.73)、NHERF1阴性(OR=3.35)、NF2阴性(OR=2.49)均为宫颈癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:宫颈癌组织中NHERF1、NF2蛋白均呈低表达水平,且表达水平与临床病理特征及预后有关,有望作为临床评估宫颈癌预后的有效标志物。

黄芪、莪术配伍对胃癌MKN-45细胞COX-1、COX-2、NF-κB、VEGF、MMP-2表达的影响

目的观察黄芪、莪术配伍对胃癌MKN-45细胞VEGF、COX-1、COX-2、NF-κB、MMP-2表达的影响。方法以黄芪、莪术配伍作用于MKN-45细胞,并设塞莱希布组、黄芪组、莪术组和空白组相对照。通过ELISA法检测VEGF的水平变化,用RT-PCR以及Western blot方法检测加药后人胃癌细胞COX-1、COX-2、NF-κB、MMP-2的mRNA及COX-2蛋白表达情况。结果各药物组对VEGF表达的抑制效应起始于48 h,配伍组作用大于黄芪组和莪术组。各药物对COX-2 mRNA、NF-κB mRNA和MMP-2 mR-NA均有抑制作用。对COX-2的抑制以塞莱希布组和配伍组最明显,且呈时间依赖性。对NF-κB mRNA的抑制作用起始于48 h,配伍组在作用72 h后对其抑制作用最显著。对MMP-2的抑制作用以塞莱希布组和配伍组较明显,72 h时的作用最强。Western blot曝光结果可见,各组细胞在72kD处可见特异性的COX-2蛋白表达条带。进行灰度分析发现:各药物组对COX-2的抑制作用呈时间依赖性,以中药配伍和塞莱希布的抑制作用最强。结论黄芪、莪术配伍可能是通过对COX-2和NF-κB的调控影响MMP-2、VEGF的表达,从而抑制肿瘤细胞的浸润、转移。

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF-kB

目的：为了探讨ＥＢ病毒（ＥＢＶ）中ＬＭＰ１的致瘤机制，对鼻咽癌ＬＭＰ１激活重要的核转录因子ＮＦ－_ＫＢ的机制进行了研究。方法：①以ＬＭＰ１阴性的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２及表达载体（ｐＳＧ５）的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ｐＳＧＳ为对照，采用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法在稳定表达ＬＭＰ１的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中证实ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２是否直接结合形成免疫共沉淀复合物；②在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系导入ＴＲＡＦ２表达质粒或不同剂量ＴＲＡＦ２显性负性突变体（ＴＲＡＦ２Ａ６－ ８６）表达质粒，以 ＮＦ－ｋＢ报道基因方法确定 ＬＭＰ1是否通过 ＴＲＡＦ2活化 ＮＦ－ｋＢ ；③将ＬＭＰ１（１－２３１）（ＣＴＡＲ２缺失区）或ＬＭＰ１△１８７－３５１（ＣＴＡＲＩ缺失区）及不同剂量ＴＲＡＦ２Ａ６－８６瞬时导入ＨＮＥ２中以证实ＬＭＰ１ ＣＴＡＲ１或ＣＴＡＲ２是否介导了这种效应；④以转染或未转染ＴＲＡＦ２６－８６的ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系为材料，应用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法，确定ＴＲＡＦ２△６－８６是否竞争性抑制ＴＲＡＦ２与ＬＭＰ１结合。结果：①在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２形成复合物?

COX-2、NF-κB、WT-1、PTEN在恶性腹膜间皮瘤中的表达及与预后的关系

目的研究恶性腹膜间皮瘤组织中环氧合酶-2(COX-2)、核因子-κB(NF-κB)、Wilm’s瘤基因-1(WT-1)、PTEN的表达及与预后的关系。方法选取2011—2013年经病理确诊的恶性腹膜间皮瘤33例,应用免疫组织化学SP法检测病变腹膜组织中COX-2、NF-κB、WT-1及PTEN的表达,并分析与年龄、性别、血小板升高、石棉接触、CA125升高、腹水、淋巴结转移、临床分期等指标的关系。对所有患者进行随访,分析标志物与预后的关系。结果 33例恶性腹膜间皮瘤中,COX-2、NF-κB、WT-1及PTEN的阳性表达率分别为63.64%、51.52%、72.73%和21.21%。4项指标与年龄、性别、血小板升高、石棉接触、CA125升高、腹水、淋巴结转移、临床分期均无相关性(P>0.05)。COX-2和NF-κB分别与PTEN呈负相关。单因素和多因素生存分析显示,PTEN阴性表达患者生存时间短,而COX-2与NF-κB阳性表达患者生存时间短。PTEN是影响恶性腹膜间皮瘤预后的独立风险因素。结论高表达COX-2及NF-κB提示预后不良,PTEN是影响恶性腹膜间皮瘤的独立预后因素。

B7-1与B7-2对调节人IL-2基因的转录因子NF-κB和AP-1的相同作用

为了解B7共刺激对细胞因子 ,特别是对IL 2mRNA及转录因子NF κB和AP 1的影响 ,探讨B7介导的IL 2调节的分子机制 ,在异基因混合淋巴细胞反应 (MLR)体系中分别或联合加入抗B7 1、抗B7 2单克隆抗体和CTLA 4Ig以阻断B7/CD2 8信号传导 ,通过竞争性PCR定量检测其对IL 2和IL 4mRNA的影响 ,并初步测定IFN γmRNA的改变 ,同时用转染MHCⅡ类分子及联合转染等量B7 1或B7 2的NIH3T3转基因细胞tDR7,tDR7/B7 1和tDR7/B7 2刺激CD2 8+ T细胞 ,通过DNA 蛋白结合实验观察B7对IL 2转录因子NF κB和AP 1的影响。结果表明 :抗B7 2单抗和CTLA 4Ig可明显抑制B7介导的IL 2和IL 4mRNA合成 ,而抗B7 1单抗仅有轻度抑制作用 ,2种或 3种抗体联合应用时抑制作用相加。MLR 1 - 6小时 ,单独tDR7即可诱导NF κB的表达 ,联合转染B7早期对其结合活力无明显影响 ,6小时后tDR7诱导作用减弱 ,B7却可显著延长tDR7的诱导作用至 72小时。tDR7早期同样可诱导AP 1的表达 ,联合转染B7分子在 2 4小时内对其有一定的抑制作用 ,而在反应后期可延长tDR7对AP 1的上调作用 ,B7 1与B7 2间作用未见明显不同。结论 :B7通过减少IL 2mRNA降解和影响基因转录而上调IL 2分泌 ,并可同时影响多种细胞因子分泌 ;在转录水平B7 1与B7 2作用未见明显不同 。

自发性高血压大鼠海马区MCP-1、COX-2、NF-κB表达及神经元损伤的增龄性变化

目的观察16、32、64周龄自发性高血压大鼠(SHR)海马区炎症相关因子COX-2(环氧合酶-2)、MCP-1(单核细胞趋化蛋白-1)及NF-κB(核转录因子-κB)的表达水平和海马CA1区神经元改变,探讨增龄性高血压脑损伤过程中的炎症反应机制。方法雄性SHR及正常对照威斯塔京都大鼠(WKY)各15只,各随机分为3组,每组5只:16周组、32周组和64周组。采用尾动脉测压法测定各组大鼠收缩压(SBP),尼氏染色法观察海马CA1区神经元损伤情况,Real time PCR法检测海马COX-2、MCP-1mRNA表达水平,Western blot法检测NF-κB蛋白表达水平。结果随着年龄升高,SHR大鼠SBP明显升高,海马区NF-κB表达及MCP-1、COX-2mRNA表达均升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05),海马CA1区神经元减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论随增龄和血压升高,SHR海马CA1区神经元丢失明显;NF-κB活化及MCP-1、COX-2等炎症因子表达升高可能参与了高血压认知下降的病理过程。

大鼠血管新生内膜形成过程中NF-κB的活化和ICAM-1及COX-2表达的变化

目的:探讨大鼠血管内膜增生过程中NF-κB活化与内膜炎性增生的相互关系。方法:Westernblotting分析血管壁中NF-κB p65、IκBα及其下游炎性基因ICAM-1和COX-2的表达;用免疫沉淀分析检测NF-κB p65的苏氨酸磷酸化。结果:内皮剥脱后,血管总蛋白与核蛋白中p65的含量于术后7 d达峰值;术后21 d下降但仍高于0、1 d组;但胞浆p65含量无明显变化。p65苏氨酸磷酸化水平与NF-κB核转位成负相关关系。IκBα于术后1 d表现出一过性降低,术后14 d开始回升,21 d接近正常组水平;与此相反,ICAM-1和COX-2的表达于内皮剥脱后升高,至14 d时达峰值,21 d时表达量下降但仍高于正常组。结论:血管内皮剥脱诱导的内膜增生过程中伴有持续的NF-κB p65活化和炎性因子的表达。

罗格列酮对自发性高血压大鼠海马区MCP-1、COX-2、NF-κB表达的影响及其机制

目的观察64周龄自发性高血压大鼠(SHR)海马区炎症相关因子COX-2(环氧合酶-2)、MCP-1(单核细胞趋化蛋白-1)、NF-κB(核转录因子-κB)、PPAR-γ(过氧化物酶体增殖激活受体-γ)的表达水平,海马CA1区神经元改变及罗格列酮对上述指标的影响,探讨高血压脑损伤过程中的炎症反应机制及PPAR-γ激动剂在高血压脑损伤中的作用及相关机制。方法雄性56周SHR及威斯塔京都大鼠(WKY)各10只,随机分为2组,对照组(生理盐水2mL/d灌胃)和Ros组[罗格列酮5mg/(kg·d)溶于2mL生理盐水中灌胃],每组各5只,各组给药8周,至64周龄时处死取脑。采用尼氏染色法观察各组海马CA1区神经元损伤情况,Real-time PCR法检测海马COX-2、MCP-1mRNA表达水平,Western blot法检测NF-κB、PPAR-γ蛋白表达水平。结果 64周龄SHR大鼠海马区PPAR-γ蛋白表达降低,NF-κB活化(P<0.05),MCP-1及COX-2表达升高(P<0.05),海马CA1区神经元减少(P<0.05),罗格列酮通过升高PPAR-γ表达,降低NF-κB、MCP-1及COX-2表达,逆转了SHR大鼠海马CA1区神经元损伤。结论 SHR海马CA1区神经元丢失明显,NF-κB、MCP-1、COX-2等炎症因子表达升高可能参与了高血压神经元损伤的病理过程,罗格列酮可通过活化PPAR-γ通路发挥抗炎及神经保护作用。

TNFR2激活NF-κB信号通路调控线粒体融合蛋白OPA1在心力衰竭中的作用

目的:探讨肿瘤坏死因子受体(TNFR)2通过调节视神经萎缩蛋白1(OPA1)促进线粒体融合在慢性心力衰竭中可能的保护机制。方法:构建SiRNA靶向沉默TNFR1(TNFR1-KD)的心肌细胞H9c2。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(0.5 ng·ml-1)刺激TNFR1-KD心肌细胞H9c2和靶向沉默OPA1的TNFR1-KD心肌细胞H9c2,电镜下测定线粒体形态和数量,荧光素酶-荧光素法测定ATP酶活性。蛋白质印迹法测定PGC1α、OPA1、Mfn1、Mfn2、Drp1的蛋白表达水平;ELISA检测转移到细胞核内的p65蛋白、IL-1β和IL-6含量。结果:TNFR1-KD心肌细胞H9c2的TNFR1表达量在转染48 h最低。在TNFR1-KD心肌细胞H9c2,与安慰剂组比较,TNF-α刺激组的线粒体数量下降24%,平均线粒体面积增加28%,ATP酶活性增加35%,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。TNF-α刺激组的OPA1蛋白表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。靶向沉默OPA1的TNFR1-KD心肌细胞H9c2组(OPA1-siRNA组)较空白对照组(NC-siRNA组)中的线粒体数量增加40%,平均线粒体面积下降32%,ATP酶活性下降25%,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。在TNFR1-KD心肌细胞H9c2中,PDTC可显著抑制核转录因子κB(NF-κB)通路活化,细胞核内的NF-κB p65蛋白含量降低,IL-1β、IL-6表达下降,线粒体OPA1蛋白含量下降。结论:TNFR2激活NF-κB信号通路调控OPA1促进线粒体融合。

短期胰岛素强化治疗对2型糖尿病患者外周血MCP-1和NF-κB表达的影响

目的探讨短期胰岛素强化治疗对2型糖尿病患者外周血单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法选择2015年8月至2016年6月在我院确诊的86例2型糖尿病患者为研究对象,按照随机数表法分为观察组和对照组,每组43例,观察组患者给予短期胰岛素强化治疗,对照组患者给予盐酸二甲双胍口服治疗,2周后观察患者的血糖达标率和胰岛β细胞功能指标,流式细胞仪检测MCP-1和NF-κB表达。结果治疗两周后,观察组患者的空腹血糖、餐后血糖和餐后2 h血糖分别为(6.27±1.21)mmol/L、(9.17±1.19)mmol/L、(7.07±1.12)mmol/L,均低于对照组的(7.41±1.13)mmol/L、(10.88±0.25)mmol/L、(9.91±0.16)mmol/L,差异均有统计学意义(P<0.01);观察组患者的血糖达标率为83.72%,明显高于对照组的58.14%,差异有统计学意义(χ2=6.824,P=0.009);观察组患者的胰岛素分泌指数(HOMA-β)为(41.37±3.43),明显高于对照组的(35.17±2.78),胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)为(3.26±0.86),明显低于对照组的(4.93±1.15),差异均有显著统计学意义(P<0.01);观察组患者的MCP-1和NF-κB分别为(62.28±7.76)ng/L、(6.47±1.96)ng/L,均明显低于对照组的(78.67±10.44)ng/L、(9.78±2.13)ng/L,差异均有统计学意义(P≤0.01)。结论短期胰岛素强化治疗可提高2型糖尿病患者的血糖达标率,改善胰岛β细胞功能,降低MCP-1和NF-κB表达。

基于Nrf-2/HO-1/NF-κB通路探讨栀黄止痛散汤对急性痛风性关节炎大鼠的保护作用

目的:探究栀黄止痛散汤对痛风性关节炎(AGA)大鼠的保护作用以及对NF-E2相关因子2(Nrf-2)/血红素氧合酶^-1/(HO^-1)/核转录因子κB(NF-κB)通路的影响。方法:采用随机数字表法将90只SD大鼠分为正常对照组、模型组(踝关节腔注射尿酸钠复制AGA大鼠)、栀黄止痛散汤低(2.5 g·kg^-1)、中(5 g·kg^-1)、高(10 g·kg^-1)剂量组、阳性对照组(秋水仙碱1 mg·kg^-1),每组15只。酶联免疫法(ELISA)检测关节液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素^-1β(IL^-1β)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,造模后对大鼠步态、关节炎症指数进行分级评定,于造模前以及造模后6,12,24,48 h采用容积测定法检测裸关节肿胀度;苏木精-伊红染色法(HE)观察踝关节组织形态学变化情况,实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定关节组织中Nrf-2、HO^-1mRNA表达,免疫印迹法(WB)测定关节组织中Nrf-2、HO^-1、P-P65、P65、P-IKBa、IKBa蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠步态、关节炎症指数分级、6,12,24,48 h关节肿胀度、关节液中TNF-α、IL-6、IL^-1β、MDA水平、关节组织中P-P65、P-IKB蛋白表达显著升高,SOD水平及Nrf-2、HO^-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组相比,栀黄止痛散汤组和阳性对照组大鼠步态、关节炎症指数分级、6,12,24,48 h关节肿胀度、关节液中TNF-α、IL-6、IL^-1β、MDA水平、关节组织中P-P65、P-IKB蛋白表达显著降低,SOD水平及Nrf-2、HO^-1 mRNA和蛋白表达显著升高,且栀黄止痛散汤组具有剂量依赖性(P<0.05)。结论:栀黄止痛散汤能够降低AGA大鼠关节炎症反应,缓解关节肿胀,其可能通过激活Nrf-2/HO^-1/NF-κB通路来实现。

铁剥夺对柔红霉素诱导K562细胞多药耐药基因1表达及NFκB活化的影响

目的:探讨铁剥夺对柔红霉素(DNR)诱导K562细胞多药耐药基因1(MDR1)表达及核因子κB(NFκB)活 化的影响。方法:以1.0μmol/LDNR单用或联合应用25μmol/L去铁胺(DFO)作用于人红白血病细胞株K56224h 后,应用RT -PCR法、流式细胞仪分别检测对照组、DNR组和DNR+DFO组K562细胞MDR1mRNA和P糖蛋白 (Pgp)的表达情况,同时采用凝胶滞留试验检测NFκB的转录活性水平。结果:与对照组相比,DNR可同时诱导MDR1 mRNA、Pgp表达上调和NFκB活化增强(P<0.05);DFO联合DNR可显著抑制DNR诱导的MDR1mRNA、Pgp表达及 NFκB活化(P<0.05)。结论:铁剥夺可减少DNR诱导的MDR1、Pgp表达,其机制可能与抑制NFκB活化有关。

转录因子NF-κB对鲤疱疹病毒Ⅱ型基因启动子的表达调控研究

为深入探究NF-κB信号通路对CyHV-2感染过程的影响,在CyHV-2感染的GiCF细胞中加入NF-κB激动剂,通过RT-qPCR和Western Blot分析在感染24、72、96 h后CyHV-2编码基因在转录和翻译水平的表达情况。结果显示,在加入NF-κB激动剂后的72、96 h,CyHV-2编码基因转录和翻译水平均明显高于对照组,提示NF-κB促进CyHV-2编码基因的转录及翻译。为进一步阐明NF-κB如何影响CyHV-2的转录和翻译,利用生物信息学软件预测CyHV-2部分编码基因的启动子序列中和NF-κB的结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验分析NF-κB对启动子活性的影响。结果表明,NF-κB过表达提高了病毒基因启动子活性,提示NF-κB可以通过促进CyHV-2基因的启动子活性来增强病毒复制水平。研究结果有助深入探究CyHV-2基因的表达翻译机制,也为开发基于NF-κB信号通路靶点的新的抗病毒抑制剂提供理论支撑。

胰瘅1号、胰瘅2号、胰瘅贴对重症急性胰腺炎模型大鼠TLR4/NF-κB信号通路抑制效应

目的:应用胰瘅1号、胰瘅2号、胰瘅贴综合治疗重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠,探讨其对SAP大鼠TLR4/NF-κB信号传导通路的抑制效应及机制。方法:建立SAP动物模型,将其分为假手术组(J组),模型组(M组),善宁组(S组),胰瘅1号、胰瘅2号、胰瘅贴组(Y组),善宁、胰瘅1号、胰瘅2号、胰瘅贴组(Z组)。计算3h、12h、72h、2w的血清淀粉酶(AMY)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)、胰腺组织大体形态和光镜下改变。结果:随着时间的推移,Z组胰腺组织形态变化明显减轻,胰腺组织病理评分低于M组、S组、Y组;随着时间的推移,Z组血清AMY数值、TNF-α、IL-1β、TLR4、NF-κB活性低于M组、S组、Y组。结论:胰瘅1号、胰瘅2号、胰瘅贴综合治疗SAP大鼠能明显减轻胰腺小叶间弥漫性水肿、炎症,胰腺实质性出血、腺管点状坏死灶、小叶缺失;其作用机制可能是通过抑制胰腺组织TLR4/NF-κB信号通路中TLR4和NF-κB的活性,减少下游炎症介质(TNF-α和IL-1β)的释放,阻断SIRS和MODS的发生或减轻其严重程度,从而达到有效治疗SAP的目的。

NF—κB在子宫内膜异位症中的表达及其与VEGF、ICAM-1、MMP-9、Bcl-2的相关性研究

目的研究NF—κB在内异症患者的在位及异位子宫内膜组织中的表达及其与VEGF、ICAM-1、MMP-9、Bcl-2的相关性．探讨NF—κB在内异症发病机制中的作用。方法采用免疫组织化学的方法分别对34例子宫内膜异位症患者中32例在位及34例异位子宫内膜组织中NF—κB及其VEGF、ICAM-1、MMP-9、Bcl-2的表达进行检测，对照组为30例正常子宫内膜组织。结果NF—κB、VEGF、ICAM-1、MMP-9、Bcl-2在子宫内膜异位症患者的在位及异位内膜组织中有异常高表达，NF—κB与VEGF、ICAM、MMP-9、Bcl-2成正相关关系。结论NF—κB与子宫内膜异位症的发生有关．NF—κB可能通过上调VEGF、ICAM、MMP-9、Bcl-2而在子宫内膜异位症的发病机制中起重要作用。