黑逍遥散调控p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路对阿尔茨海默病大鼠神经炎症的影响

目的 观察黑逍遥散对Aβ_(1-42)所致阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响,并从p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路介导的炎症级联反应探讨其作用机制。方法 双侧海马注射1μL Aβ_(1-42)溶液复刻AD大鼠模型。筛选造模成功的大鼠50只,随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组(0.5 mg/kg)和黑逍遥散低、中、高剂量组(4.25、8.5、17 g/kg),连续给药42 d。Morris水迷宫实验检测定位航行与空间探索能力,HE染色观察海马神经元病理结构改变,ELISA法检测海马组织Aβ_(1-42)、iNOS、PGE_(2)表达,RT-qPCR法检测海马组织p38、ATF2、COX-2 mRNA表达,Western blot法检测海马组织p-p38、p-ATF2、COX-2蛋白表达。结果 与模型组比较,黑逍遥散中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组逃避潜伏期缩短(P<0.01),有效区域运动距离、目标象限滞留时间百分比增加(P<0.01),海马CA1区神经元排列有序,胞体清晰,凋亡细胞减少,海马组织Aβ_(1-42)、iNOS、PGE_(2)水平降低(P<0.05,P<0.01),p38、COX-2 mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),p38、p-p38、p-ATF2、COX-2蛋白表达降低(P<0.01)。结论 黑逍遥散可改善Aβ_(1-42)所致AD大鼠的认知能力,其机制可能与阻断p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路传导,进而减轻炎症反应有关。

Ca^(2+)/CaN/NFAT信号通路在肿瘤中的研究进展

肿瘤成为危害人类健康的主要原因,其发生发展与免疫炎症密切相关.Ca^(2+)/CaN/NFAT信号通路是目前已知的免疫炎症通路,可促进多种免疫细胞活化,介导免疫炎症因子释放,进而影响机体的免疫功能.目前,Ca^(2+)/CaN/NFAT信号通路在肿瘤中的存在和作用越来越受关注.多项研究表明与该通路与肿瘤发生发展密切相关.故本文从Ca^(2+)/CaN/NFAT信号通路概述、信号通路对肿瘤发生发展的影响、信号通路对肿瘤免疫炎症的作用及与信号通路相关药物在防治肿瘤中的作用四方面进行综述,以期为临床防治肿瘤提供新视角新靶点.

基于NF-κB/COX-2炎症通路探讨益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用机制

目的:探究益气养阴活血方对糖尿病肾病(DN)大鼠的肾脏保护作用机制。方法:50只雄性SD大鼠随机分为正常组8只、模型组42只,模型组采用高脂高糖喂养+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立DN大鼠模型,除去造模过程中死亡及失败大鼠,将造模成功的32只大鼠随机分为模型组、缬沙坦组、中药低剂量组、中药高剂量组,每组8只,正常组予以普通饲料喂养。药物灌胃6周后收集大鼠24 h尿液,腹主动脉取血后处死取材,检测各组大鼠的空腹血糖(FBG)、血脂(TG、TC)、肾功(BUN、Scr)和24 h尿蛋白总量(24 h-UTP),ELISA法检测血清的环氧合酶-2(COX-2)和核转录因子κB(NF-κB),HE染色观察肾脏病理,Western Blot、PCR法分别检测肾组织中相关指标蛋白和mRNA水平。结果:与模型组相比,中药低剂量组和中药高剂量组大鼠FBG、TG、TC、BUN、Scr、24 h-UTP均明显下降(P<0.01),肾小球及肾小管形态基本恢复正常,血清及肾组织中的NF-κB、COX-2蛋白表达下调(P<0.01),中药高剂量组大鼠肾组织中的NF-κB、COX-2 mRNA表达下调(P<0.05)。结论:益气养阴活血方可能通过抑制NF-κB/COX-2炎症通路而减轻DN大鼠肾脏损伤。

柚皮素通过抑制NF-κB-iNOS/COX-2通路减轻小鼠糖尿病肝损伤

目的探讨核因子(NF-κB)-诱导型一氧化氮合酶(iNOS)/环加氧酶2(COX-2)信号通路在柚皮素治疗减轻小鼠糖尿病肝损伤中的作用。方法将昆明小鼠分为正常对照组、糖尿病肝损伤模型组、低剂量(25 mg·kg^(-1)·d^(-1),灌胃)柚皮素治疗组及高剂量(75 mg·kg^(-1)·d^(-1),灌胃)柚皮素治疗组,每组10只。长期高能量饮食联合多次小剂量链脲菌素(STZ;40 mg·kg^(-1)·d^(-1)×5 d,腹腔注射)建立小鼠糖尿病肝损伤模型。HE染色观察肝脏形态学变化;生化试剂盒检测小鼠血脂及肝功能改变;每周监测空腹血糖(FBG)水平;qRT-PCR检测肝脏NF-κB、iNOS和COX-2的mRNA表达;Western blot法检测肝脏NF-κB、iNOS和COX-2蛋白表达。结果给予STZ 7 d,小鼠FBG水平持续高于11.1 mmol/L,4周后肝脏病理变化及肝功能检测提示出现肝损伤。再过4周(即实验结束时),模型组小鼠肝细胞内可见脂肪变性,还伴有炎症细胞浸润,血脂和肝功能水平均显著升高(P<0.01),同时肝脏NF-κB、iNOS和COX-2的表达显著上调(P<0.01)。柚皮素治疗呈剂量依赖性地减轻肝组织损伤,保护肝功能,显著降低血脂水平(P<0.01);同时,NAR使NF-κB、iNOS和COX-2的表达下调(P<0.01)。另外,柚皮素也显著降低模型组FBG水平(P<0.05),但较正常对照组仍显著升高(P<0.01)。结论柚皮素对小鼠糖尿病肝损伤的治疗作用可能与其抑制NF-κB-iNOS/COX-2信号通路有关。

益气养阴方联合电针对产后压力性尿失禁大鼠CXCR4/COX-2信号通路的影响

目的:探究益气养阴方联合电针对产后压力性尿失禁(postpartum urinary incontinence,PPUI)大鼠趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)/环氧合酶2(cyclooxygenase,COX-2)信号通路的作用机制。方法:将大鼠随机分为空白组、PPUI组、益气养阴组和益气养阴+电针组,制备PPUI大鼠模型;检测4组大鼠收缩力/肌重比值、血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和心肌酶肌酸激酶(creatine kinase,CK)含量;HE染色检测4组大鼠肛提肌组织病理学变化;蛋白质印迹法检测4组大鼠尿道组织CXCR4和COX-2蛋白表达。结果:与空白组相比,大鼠最大膀胱容量和漏尿压力点PPUI组降低(P<0.05),益气养阴组和益气养阴+电针组升高,益气养阴+电针组升高明显(P<0.05);与空白组相比,收缩力/肌重比值PPUI组降低(P<0.05),益气养阴组和益气养阴+电针组较PPUI组增加,且益气养阴+电针组增加更明显(P<0.05);与空白组相比,LDH和CK含量PPUI组升高(P<0.05),益气养阴组和益气养阴+电针组低于PPUI组(P<0.05)。与空白组相比,PPUI组CXCR4蛋白减少,COX-2蛋白增多(P<0.05),益气养阴组和益气养阴+电针组CXCR4蛋白较PPUI组增多,COX-2蛋白较PPUI组减少(P<0.05),益气养阴+电针组CXCR4蛋白较益气养阴组增加,COX-2蛋白较益气养阴组减少(P<0.05)。结论:益气养阴方联合电针可能通过抑制PPUI大鼠血清LDH和CK表达,增加PPUI大鼠CXCR4表达,抑制COX-2表达,增加盆底肌肌肉收缩功能,治疗PPUI。

CytochalasinH对小鼠脾细胞增殖的抑制作用及其对Ca^(2+)/CaN/NFAT信号通路的影响

【目的】研究红树林植物大红树内生真菌Phomopsis asparagi DHS-48得到的次级代谢产物cytochalasin H对小鼠(Mus musculus)脾细胞的免疫抑制活性及其作用机制。【方法】用不同浓度(3、6、12、25、30μmol/L)cytochalasin H处理小鼠脾细胞,通过CCK-8活力测定法检测其对刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)诱导小鼠脾细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测cytochalasin H对小鼠脾细胞凋亡的影响;免疫荧光实验检测cytochalasin H对细胞中NFAT入核及钙离子内流的影响;酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)和免疫蛋白印迹法(Western blotting)测定cytochalasin H对脾细胞中NFAT信号通路的影响。【结果】CCK-8实验表明,cytochalasin H对于正常小鼠脾淋巴细胞的毒性比环孢菌素(Cyclosporin A,Cs A)弱,半抑制浓度IC_(50)=(35.07±1.16)μmol/L;流式细胞术显示,cytochalasin H对ConA刺激的脾淋巴细胞无促凋亡作用;cytochalasin H对ConA诱导增殖的小鼠脾淋巴细胞具有显著的抑制效果,IC_(50)=(14.81±0.81)μmol/L,且呈剂量依赖性;免疫荧光结果表明,cytochalasin H在浓度为15μmol/L时显著地抑制了钙离子内流;Western Blotting结果显示cytochalasin H对脾淋巴细胞中CaN、NFAT蛋白(nuclear factor of activated T-cells,NFAT)的表达具有显著的抑制作用;免疫荧光结果显示,cytochalasin H抑制细胞浆内的NFAT转移到细胞核;ELISA测试结果证明,cytochalasin H能显著抑制下游细胞因子白介素-2(IL-2)的分泌(α=0.05)。【结论】Cytochalasin H通过抑制Ca^(2+)/CaN/NFAT信号通路转导显著抑制T细胞增殖和活化。

虫草素通过调节COX-2/PGE2信号通路促进骨质疏松大鼠的骨折愈合

目的探讨虫草素(Cordycepin)调控环氧化酶2(COX-2)/前列腺素E2(PGE2)信号通路对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响。方法制备骨质疏松大鼠模型,将大鼠分为Sham组、Model组、Cordycepin组(10 mg/kg腹腔注射)、Cordycepin+NS-398组(腹腔注射10 mg/kg的Cordycepin+10 mg/kg的COX-2抑制剂),分别检测骨折愈合情况、骨密度(BMD)及生物力学性能,HE染色观察骨痂组织病理学变化,ELISA法检测血清ALP、CTX-Ⅰ、OC水平及骨痂组织COX-2、PGE2、cAMP水平,免疫组化法检测骨痂组织COX-2、VEGF表达。结果与Sham组比较,Model组骨折线明显,X光片评分、BMD、骨最大负荷与刚度、ALP、OC水平显著降低、骨组织COX-2、PGE2、cAMP、VEGF表达水平显著降低,CTX-Ⅰ水平显著升高(P<0.05);与Model组比较,Cordycepin组X光片评分、BMD、骨最大负荷与刚度、ALP、OC水平显著升高、骨组织COX-2、PGE2、cAMP、VEGF表达水平显著升高,CTX-Ⅰ水平显著降低(P<0.05);NS-398可逆转Cordycepin对骨质疏松大鼠骨折愈合的促进作用。结论虫草素可能通过激活COX-2/PGE2信号通路,促进骨质疏松大鼠的骨折愈合。

红景天苷通过COX-2/PGE2/VEGF通路对糖尿病大鼠视网膜病变的影响

目的探讨红景天苷对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠视网膜病变(DR)的保护作用。方法将32只雄性SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组及红景天苷低、高剂量(50、200 mg/kg)组。腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型。模型诱导成功后,灌胃给予红景天苷12周。苏木素和伊红染色观察视网膜组织的病理学改变;荧光定量PCR、免疫印迹及酶联免疫吸附试验检测视网膜内相关mRNA和蛋白的表达情况。结果与对照组相比,糖尿病组视网膜神经节细胞层排列紊乱、视网膜神经节细胞(RGC)密度明显降低(P<0.05);视网膜环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01),前列腺素E2(PGE2)分泌水平显著升高(P<0.01)。与糖尿病组相比,红景天苷低剂量组COX-2和VEGF mRNA表达以及PGE2分泌水平显著下降(P<0.05);红景天苷高剂量组RGC层排列情况有所改善,RGC密度明显升高(P<0.05),COX-2和VEGF mRNA及蛋白表达(P<0.05)和PGE2分泌水平(P<0.01)显著降低。结论红景天苷能改善糖尿病大鼠视网膜组织病理改变,其机制可能与抑制COX-2/PGE2/VEGF通路相关。

COX-2基因对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞生长及Notch信号通路的影响及其作用机制

目的探讨抑制环氧合酶-2(COX-2)基因表达对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞系MRC-5活力、胶原合成和转化及Notch信号通路的影响。方法将MRC-5细胞分为对照组、TGF-β1组、NC组和COX-2-siRNA组,各组细胞处理48 h,Western blotting检测COX-2、胶原合成相关的COL-Ⅰ和COL-Ⅲ、 EMT标志物α-SMA及Notch信号通路受体Notch1及配体Jagged1的蛋白表达;CCK8法检测各组细胞活力。结果 TGF-β1组COX-2的表达显著高于对照组,COX-2-siRNA组COX-2的表达显著低于TGF-β1组(P<0.05),NC组COX-2的表达与TGF-β1组差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,TGF-β1组细胞活力及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、Notch1和Jagged1的蛋白表达均显著升高(P<0.05),与TGF-β1组比较,COX-2-siRNA组细胞活力及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、Notch1和Jagged1的蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论抑制COX-2基因表达中可能通过降低MRC-5细胞活力、抑制细胞胶原合成和转化,并下调Notch信号通路,从而对肺纤维化起保护作用。

机动车尾气诱发大鼠慢性阻塞性肺疾病并上调气道上皮细胞COX-2/PGE2/EP受体信号通路

目的:探究机动车尾气(MVE)长期暴露引起大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)发生时,气道上皮细胞中环加氧酶2(COX-2)/前列腺素E;(PGE;)/E-前列腺素类激素(EP)受体信号通路成员的表达变化。方法:(1)动物实验:健康雄性SD纯系大鼠(SPF级)16只,随机分为2组:MVE暴露组(n=8)和空白对照(CTL)组(n=8)。采用MVE暴露6个月的方法建立COPD大鼠模型。造模结束后,使用Buxco小动物有创肺功能仪检测大鼠肺功能;肺组织切片行HE染色并评估肺组织病理变化;ELISA法检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和PGE;的水平,评估大鼠肺部炎症情况;采用免疫荧光及Western blot法检测肺组织COX-2及EP受体蛋白水平;提取肺组织核蛋白,Western blot检测MVE对肺组织NF-κB核转位的影响。(2)细胞实验:采用MVE细颗粒物(PM2.5)标准品刺激人正常支气管上皮细胞BEAS-2B。ELISA法检测细胞培养液中PGE;、IL-6和IL-8的水平;Western blot检测细胞中COX-2及EP受体蛋白水平;收集细胞核蛋白,检测PM2.5对NF-κB核转位的影响。结果:(1)MVE长期暴露致大鼠出现类似COPD的症状,包括气道炎症、肺气肿及肺功能下降(P<0.05);(2)MVE长期暴露显著上调大鼠肺组织及气道上皮细胞COX-2和EP1/EP4受体表达(P<0.05),而对EP2/EP3受体表达无显著影响(P>0.05);(3)MVE PM2.5标准品长时间暴露导致BEAS-2B细胞COX-2、PGE;和EP1/EP4表达水平显著升高(P<0.05),但对EP2/EP3表达无显著影响(P>0.05);(4)PM2.5暴露诱导大鼠肺组织及BEAS-2B细胞中NF-κB活化增加(P<0.05)。结论:MVE诱导大鼠COPD发病过程中,气道上皮细胞COX-2-PGE;-EP1/4受体信号通路成员表达增加并伴随NF-κB信号通路的活化。

阻断Cn/NFAT通路对钛颗粒诱导成骨细胞分泌IL-6和PGE_2的影响

目的:观察阻断钙调磷酸酶(Cn)/活化T细胞核因子(NFAT)通路对钛颗粒诱导成骨细胞分泌IL-6和PGE2的影响。方法:取新生大鼠头颅骨,经消化法获取成骨细胞,根据培养条件,分为钛颗粒组、钛颗粒/VIVIT肽组、VIVIT肽组和对照组。细胞培养96 h后行Western blot检测NFATc1蛋白表达,于6、24、96 h离心后取细胞培养上清,用ELISA法检测各组IL-6和PGE_2的含量。结果:钛颗粒组NFATc1表达高于对照组(P<0.01),钛颗粒/VIVIT肽组NFATc1表达显著低于钛颗粒组(P<0.01),钛颗粒组培养上清IL-6和PGE_2含量各时间点均显著高于对照组(P<0.05),钛颗粒/VIVIT肽组较钛颗粒组各时间点均显著降低(P<0.05)。结论:11R-VIVIT肽特异性阻断Cn/NFAT通路可显著抑制钛颗粒诱导的成骨细胞IL-6和PGE_2的分泌。

Cox-2/PGE-2及IL-6在Wnt/β连环蛋白-骨代谢信号通路中的作用机制

Wnt／β连环蛋白信号通路在Wnt信号通路中最为经典，其对应力刺激敏感，能够将机械信号转化为生物化学信号，并对OPG／IiANKL／IlANK骨代谢信号进行调控^[1]。COX．2／PGE-2作为wnt／β连环蛋白信号对骨代谢信号通路调控的中间途径，同时也作为独立的一个信号存在，

断体地龙提取液对结肠炎相关性结肠癌COX-2/PGE_2/β-catenin信号通路的影响

目的:观察断体地龙提取液对结肠炎相关性结肠癌小鼠COX-2/PGE_2/β-catenin信号通路的影响。方法:60只C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组、模型组、断体地龙提取液低、中、高剂量组和柳氮磺吡啶组。除空白组外,其余5组均采用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠法复制结肠炎相关性结肠癌模型。连续治疗15d后光镜下观察结肠组织病理学改变,并观察小鼠DAI评分、结肠器官重量及结肠组织成瘤率;Western-blot法检测结肠组织中COX-2、PGE_2和β-catenin蛋白的表达。结果:断体地龙提取液能够显著改善CACC小鼠结肠黏膜的病理学形态,降低小鼠DAI评分及结肠质量,减少结肠中瘤体的形成,明显优于模型组(P<0.05);断体地龙提取液能够显著降低结肠组织中COX-2、PGE_2、β-catenin蛋白的表达,与模型组比较明显优于模型组(P<0.05)。结论:断体地龙提取液能够通过抑制COX-2/PGE_2/β-catenin信号通路的激活,从而抑制结肠炎诱发的结肠癌的发生。

蛇床子素对髓核致神经根炎性痛大鼠ERK/MAPK信号通路及COX-2mRNA表达的影响

目的观察硬膜外腔给予蛇床子素对髓核致神经根炎性痛大鼠的镇痛作用,及对脊髓背角ERK/MAPK信号通路和COX-2 mRNA表达的影响。方法成年♂SD大鼠125只,随机分为5组,每组25只,分别为Blank组、Sham组、手术模型组(NP组)、蛇床子素组(Ost组)、溶剂对照组(Vehicle组),其中Ost组于术后d 6于硬膜外腔给予50μl蛇床子素1 mg/rat,Vehicle组给予相同体积的溶剂。各组大鼠分别于术前1 d,术后3、6、7、10、14、21 d测定机械痛阈值(50%MWT),在术后14 d测定机械痛阈后每组随机取15只大鼠,取术侧腰段脊髓背角,Western blot法和荧光定量PCR法检测ERK、pERK和COX-2 mRNA的表达。结果与Blank组相比,Sham组仅在术后d 1 50%MWT降低,差异有统计学意义(P<0.05),后逐渐恢复至术前水平,pERK和COX-2 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05);而NP组、Vehicle组和Ost组术后50%MWT值明显降低(P<0.05),pERK和COX-2 mRNA的表达明显上调(P<0.05)。硬膜外腔给药后,与Vehicle组相比,Ost组50%MWT明显升高(P<0.05),给药后d 8 pERK和COX-2 mRNA的表达明显下调(P<0.05)。各组间ERK的表达差异无统计学意义(P>0.05)。对pERK1、pERK2和COX-2 mRNA的表达进行相关性分析,Spearman秩相关系数为0.878(P<0.01)和0.910(P<0.01),表明pERK和COX-2 mRNA的表达呈正相关(P<0.05)。结论术后早期应用蛇床子素对髓核导致的神经根炎性痛具有明显的镇痛效应,其机制可能是通过抑制脊髓背角pERK的活化,从而下调COX-2 mRNA的表达。

Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A在体外培养正常黑素细胞和不同黑素瘤细胞系中的表达

目的检测Calcineurin/NFAT信号途径中Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A分子在正常人黑素细胞和不同黑素瘤细胞系中的表达,初步探讨它们与黑素瘤发生、发展的关系。方法选取正常人原代黑素细胞(MC)及来源于原位(WM793B)、侵袭性(LIBR)及转移性(SK-MEL-5)的黑素瘤细胞系,采用RT-PCR,Westernblot检测四种细胞中Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A的表达情况。结果与正常人黑素细胞相比,在不同黑素瘤细胞系中Calcineurin,NFAT2,COX-2和VEGF-A4个分子明显高表达。结论 Calcineurin/NFAT信号途径可能与黑素瘤的发生有关。

COX-2活化PI3K/Akt信号通路促结直肠癌肝转移的实验研究

目的:探讨COX-2促进结直肠癌肝转移效果及其机制,从而为结直肠癌肝转移防治提供依据。方法:建立COX-2低表达和高表达CT26结肠癌细胞株,通过注射0.2 m L的对数生长期细胞浓度为1×10~6个/mL的正常CT26结肠癌细胞悬液(A组,n=20)、COX-2高表达的CT26结肠癌细胞悬液(B组,n=20)以及COX-2低表达的结肠癌细胞悬液(C组,n=20)至脾脏制作小鼠结肠癌肝转移模型,检测比较三组小鼠移植瘤COX-2、PI3K、p-Akt表达、移植瘤体积、肝脏肿瘤大小和数量以及生存期,并分析结直肠癌肝转移小鼠COX-2、PI3K、p-Akt表达的相互关系以及三者与其移植瘤体积、肝脏肿瘤大小和数量以及生存期的关系。结果:与A组比较,B组和C组移植瘤COX-2、PI3K、p-Akt蛋白检测阳性率均升高,移植瘤体积降低,肝脏肿瘤大小和数量降低,生存期延长(P<0.05)。与B组比较,C组移植瘤COX-2、PI3K、p-Akt蛋白检测阳性率均升高,移植瘤体积降低,肝脏肿瘤大小和数量降低,生存期延长(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,结直肠癌肝转移小鼠移植瘤COX-2蛋白表达与其PI3K、p-Akt蛋白表达呈正相关(P<0.05),且其移植瘤COX-2、PI3K、p-Akt与其移植瘤体积、肝脏肿瘤大小和数量均呈正相关(P<0.05),与其生存期均呈负相关(P<0.05)。结论:COX-2可促结直肠癌肝转移和影响其预后,在此过程中可能涉及其活化PI3K/Akt信号通路作用。

COX-2基因通过Notch信号通路介导心肌细胞过度凋亡的机制研究

目的探讨环氧化酶(cycloxygenase,COX)-2(COX-2)基因通过Notch信号通路介导心肌细胞的过度凋亡的作用机制。方法将15只SD大鼠按随机数字表法分成假手术组(暴露心脏后未做任何处理)、模型组(构建心肌缺血再灌注损伤的SD大鼠模型)和抑制剂组(制备心肌缺血再灌注损伤的SD大鼠模型后,用COX-2的抑制剂NS398预处理),每组5只。利用TUNEL染色检测心肌细胞的凋亡率,分别采用RT-PCR和Western-blot方法检测心肌COX-2、Notch信号通路分子Notch-1以及凋亡分子Caspase-3和Caspase-9的mRNA和蛋白的表达量。结果3组心肌细胞的凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.01),模型组明显高于假手术组和抑制剂组,抑制剂组明显高于假手术组(均P<0.01)。3组COX-2、Notch-1、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量比较差异有统计学意义(均P<0.05),抑制剂组明显低于模型组(均P<0.05)。结论 COX-2基因与心肌细胞的过度凋亡有关,而COX-2基因是通过Notch信号通路起促凋亡作用的。

山茱萸提取物经COX-2/Nrf2信号通路对脓毒症模型大鼠肝损伤的改善作用

目的探讨山茱萸提取物经环氧化酶-2(COX-2)/NF-E2相关因子2(Nrf2)信号通路对脓毒症大鼠肝损伤的改善作用。方法将60只SPF级成年雄性SD大鼠,按随机数字表法分为假手术组、模型组、山茱萸低、中、高剂量组和乌司他丁组,每组10只,除假手术组外,其他各组采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症大鼠模型。造模1h后,山茱萸低、中、高剂量组大鼠分别灌胃4、8、12g/kg的山茱萸提取物,灌胃体积10mL/kg,同时尾静脉注射2mL生理盐水;乌司他丁组大鼠灌胃10mL/kg生理盐水,同时尾静脉注射10万U/kg的乌司他丁,注射体积2mL;假手术组和模型组分别灌胃(10mL/kg)和尾静脉注射(2mL)生理盐水。24h后对大鼠肝组织进行病理学观察,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和胆红素(BIL)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠肝组织谷胱甘肽(GSH)、髓过氧化物酶(MPO)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹法检测肝组织COX-2、Nrf2和血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白水平。结果假手术组肝脏未见病理损害;模型组大鼠肝组织见大量炎性细胞浸润,肝细胞水肿和坏死,肝索及肝窦消失;各山茱萸剂量组和乌司他丁组大鼠肝组织可见不同程度淤血、肝窦轻度扩张和炎性细胞浸润,但其损伤程度明显轻于模型组,且山茱萸高剂量组和乌司他丁组无明显差异。与假手术组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、BIL、肝组织MPO、IL-6、TNF-α和COX-2蛋白水平增加[ALT:(143.16±12.74)U/L比(61.51±8.07)U/L;AST:(356.16±24.12)U/L比(127.95±6.30)U/L;BIL:(0.76±0.04)mg/dL比(0.52±0.06)mg/dL;MPO:(26.48±3.25)U/mg比(10.42±2.04)U/mg;IL-6:(224.67±17.58)pg/mL比(80.19±12.24)pg/mL;TNF-α:(257.21±18.32)pg/mL比(75.76±4.69)pg/mL;COX-2:(0.88±0.15)比(0.22±0.03),P均<0.05];GSH、Nrf2和HO-1蛋白水平降低[GSH:(7.28±0.44)nmol/mg比(12.41±2.09)nmol/mg;Nrf2:(0.17±0.02)比(0.43±0.06);HO-1:(0.54±0.03)比(0.85±0.06),P均<0.05]。与模型组比较,山茱萸低、中、高剂量组大鼠血清ALT、AST、BIL、肝组织MPO、IL-6、TNF-α和COX-2蛋白水平降低,呈剂量依赖性[ALT:(112.24±7.37)U/L、(89.96±9.31)U/L、(74.45±9.44)U/L比(143.16±12.74)U/L;AST:(234.22±19.54)U/L、(188.26±15.37)U/L、(147.32±8.52)U/L比(356.16±24.12)U/L;BIL:(0.68±0.09)mg/dL、(0.62±0.04)mg/dL、(0.57±0.04)mg/dL比(0.76±0.04)mg/dL;MPO:(21.89±4.31)U/mg、(18.74±5.02)U/mg、(14.66±3.19)U/mg比(26.48±3.25)U/mg;IL-6:(181.26±16.53)pg/mL、(153.84±12.89)pg/mL、(113.24±9.61)pg/mL比(224.67±17.58)pg/mL;TNF-α:(204.16±16.04)pg/mL、(157.94±11.26)pg/mL、(116.34±9.54)pg/mL比(257.21±18.32)pg/mL;COX-2:(0.66±0.07)、(0.51±0.05)、(0.30±0.06)比(0.88±0.15),P均<0.05];GSH、Nrf2和HO-1蛋白水平增加[GSH:(8.49±1.39)nmol/mg、(9.84±2.32)nmol/mg、(10.91±3.13)nmol/mg比(7.28±0.44)nmol/mg;Nrf2:(0.21±0.05)、(0.26±0.07)、(0.33±0.04)比(0.17±0.02);HO-1:(0.62±0.06)、(0.69±0.02)、(0.78±0.09)比(0.54±0.03),P均<0.05]。山茱萸高剂量组上述各指标与乌司他丁组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论山茱萸提取物对脓毒症大鼠肝损伤有保护作用,其机制可能与COX-2/Nrf2信号通路有关。

Peiminine通过调控COX-2/PGE2/EGFR信号通路促进人结肠癌HCT-116细胞凋亡的分子机制

目的研究Peiminine调控COX-2/PGE2/EGFR信号通路促使人结肠癌HCT-116细胞凋亡的分子机制。方法基于ELISA法、Real-time qPCR和Western Blot法测定Peiminine处理人结肠癌HCT-116细胞后PGE2、COX-1、COX-2、ERK、P-ERK、P53、P-P53、P38和P-P38含量的变化。结果与对照组(Ctrl)相比,Peiminine处理后细胞内PGE2含量显著降低(P<0.01)。同时利用Real-time qPCR和Western Blot法检测发现Peiminine能够明显降低人结肠癌HCT-116细胞COX-2的含量,IL-6和NF-κB也显著下调而IL-10明显上调。后期的研究发现EGFR信号通路中关键蛋白(ERK、P-ERK、P53、P-P53、P38和P-P38)的表达量经Peiminine处理后均降低,具有统计学差异(P<0.01)。结论Peiminine可以抑制COX-2的表达和PGE2的生成,改善抗肿瘤免疫反应,抑制EGFR信号通路,从而促进肿瘤细胞凋亡,达到抗肿瘤的作用。