Clinicopathological analysis of EWSR1/FUS::NFATC2 rearranged sarcoma in the left forearm:A case report

BACKGROUND We present a case of an EWSR1/FUS::NFATC2 rearranged sarcoma in the left forearm and analyze its clinicopathological and molecular features.CASE SUMMARY The patient is a 23-year-old woman.Microscopically,the tumor cells were medium-sized round cells arranged in small nests.The cytoplasm was clear,nuclei were relatively uniform,chromatin was dense,nucleoli were visible,and mitotic figures were rare.Immunohistochemically,the tumor cells were positive for Vimentin,INI-1,CD99,NKX2.2,CyclinD1,friend leukaemia virus integration 1,and NKX3.1.Next-generation sequencing revealed the presence of the EWSR1-NFATC2 fusion gene.EWSR1/FUS::NFATC2 rearranged sarcomas are rare and can easily be misdiagnosed.CONCLUSION Clinical imaging,immunohistochemistry,and molecular pathology should be considered to confirm the diagnosis.

口腔鳞状细胞癌中NFATc2的表达和定位

目的分析口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinomas,OSCC)组织中与受体型蛋白酪氨酸磷酸酶K(receptor protein tyrosine phosphatase-K,PTPRK)相关的胞质活化T细胞核因子c2蛋白(nuclear factor of activated T cells c2,NFATc2)的表达和定位,探讨PTPRK抑制OSCC的潜在机制。方法生物信息学预测与PTPRK相互作用的蛋白,免疫组化检测OSCC组织及相应癌旁口腔黏膜组织(对照组)中NFATc2表达及其与PTPRK的关系,免疫荧光染色检测NFATc2在人正常口腔上皮细胞系HIOEC和OSCC细胞系SCC25中的表达和细胞核定位情况,并分析其蛋白表达与OSCC临床病理特征的关系。结果生物信息学预测结果显示在分子通路方面PTPRK可能与NFATc2关联;与对照组比较,NFATc2在OSCC组织中的表达显著升高(P<0.05),且与PTPRK表达呈负相关(P<0.01);细胞免疫荧光染色结果显示,与人正常口腔上皮细胞系HIOEC比较,OSCC细胞系SCC25中NFATc2表达水平升高且表达入核;OSCC中NFATc2表达与临床分期和病理分级相关(P均<0.05)。结论NFATc2表达增加且入核与PTPRK表达减少相关,并参与OSCC的发生、进展。

二甲双胍和LPS通过转录因子RUNX2调控NFATc2基因的转录

目的构建人T细胞活化核因子C2(NFATc2)基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-NFATc2-promoter,检测其转录活性,探究二甲双胍和脂多糖对其转录活性的影响。方法利用UCSC网站查找人NFATc2基因的启动子序列并设计上下游引物PCR扩增人NFATc2基因启动子片段;用限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ双酶切质粒pGL3-basic,将人NFATc2基因启动子片段插入到pGL3-basic质粒,重组质粒命名为pGL3-NFATc2-promoter。将pGL3-NFATc2-promoter与内参质粒pRL-TK共转染293F细胞,检测其荧光素酶活性。同时构建人NFATc2基因启动子不同片段长度的报告基因载体并进行荧光素酶活性检测,分别给予不同浓度的二甲双胍和脂多糖处理24 h后检测二甲双胍和脂多糖对NFATc2转录活性的影响。进一步突变NFATC2基因启动子上转录因子RUNX2的结合位点探究二甲双胍和脂多糖对NFATc2的转录调控作用。结果研究成功构建了不同片段长度(2170、2077、1802、1651、1083、323 bp)的人NFATC2基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-NFATc2-promoter,经酶切及测序鉴定完全正确。将不同片段长度的pGL3-NFATc2-promoter转染到293F细胞,发现pGL3-1651 bp具有最高转录活性,荧光素酶活性约为pGL3-2170 bp的3.3倍(1.8433±0.1457 vs 0.5467±0.0850)。中浓度(5 mmol/L)和高浓度(10 mmol/L)的二甲双胍分别上调pGL3-1651 bp的转录活性多达2.5、3倍(1.3467±0.1601 vs 0.8867±0.0321,1.8124±0.2771 vs 0.8867±0.0321)。不同剂量的脂多糖均能上调pGL3-1651 bp的转录活性不低于1.6倍(1.4813±0.0616 vs 0.8867±0.0321)。突变pGL3-1651 bp上的RUNX2结合位点后,二甲双胍和脂多糖上调的pGL3-1651 bp转录活性均受到抑制,转录活性下降(2.1667±0.1527 vs 1.233±0.1155;2.3667±0.2887 vs 1.1333±0.3786)。结论pGL3-NFATc2-promoter在293F细胞中能被转录激活,并证实脂多糖和二甲双胍转录激活pGL3-NFATc2-promoter依赖于转录因RUNX2。

NFATC2基因变异在某区儿童急淋白血病中的分布调查

目的调查NFATC2 rs6021191基因变异性在我院治疗儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿中的分布。方法大连市妇女儿童医疗中心近3年来ALL患儿30例,通过基因测序方法检测rs6021191位点碱基序列。结果AA基因20例,A/T基因9例,TT基因1例。结论NFATC2是NFAT转录子家族中的一员。SNP可以影响NFATC2的表达。SNP与ALL相关性的研究必然需要多中心、大样本调查,此次试验仅就SNP在ALL患儿中的分布作调查,为我们研究此类基因的临床意义所做的前期工作。

基于Btk-PLCγ2-NFATc1通路分析调控miR-17-5p表达对根尖周炎大鼠骨破坏的修复作用

目的 分析基于布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)-磷脂酰肌醇特异性磷酯酶(PLCγ2)-活化T-细胞核因子(NFATc)1通路调控微小RNA-17-5p(miR-17-5p)表达对根尖周炎大鼠骨破坏的修复作用。方法 将60只大鼠随机分为正常(A)组、模型(B)组、上调(C)组、下调(D)组各15只,除A组外,其余大鼠均建立根尖周炎模型,C组、D组分别转染miR-17-5p模拟物(mimics)、miR-17-5p抑制剂(inhibitor)行上调、下调转染,A组、B组给予等体积生理盐水干预。观察各组病理组织学、miR-17-5p表达量、骨细胞阳性细胞数、炎性浸润指标水平及Btk-PLCγ2-NFATc1通路蛋白表达量。结果 与C组相比,D组miR-17-5p表达量,炎性浸润指标水平,Btk、PLCγ2、NFATc1蛋白表达量显著较低(P<0.05)。与C组相比,D组骨细胞阳性细胞数显著较少(P<0.05)。结论 下调miR-17-5p可能通过下调Btk、PLCγ2、NFATc1蛋白表达量、抑制Btk-PLCγ2-NFATc1通路,减少骨细胞阳性细胞数,对骨破坏起一定的修复作用。

H_2S对大鼠心肌肥大与miRNA-133a和Ca^(2+)/CaN/NFATc4信号通路的影响

目的:研究硫化氢(H_2S)对心肌细胞肥大的负性调控作用与miRNA-133a介导Ca^(2+)/CaN/NFATc4信号通路的关系。方法:异丙肾上腺素(ISO)诱导体外培养的大鼠心肌细胞肥大模型;Leica图像分析软件测量心肌细胞表面积;qRT-PCR检测脑钠尿肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、H_2S合酶(CSE)、miRNA-133a和钙调神经磷酸酶(CaN)mRNA表达;Western blot检测CaN、活化T细胞核因子c4(NFATc4)蛋白表达;Elisa方法检测心肌细胞H_2S含量;激光共聚焦显微镜检测心肌细胞钙离子浓度;细胞免疫荧光检测NFATc4核转位变化。结果:(1)心肌细胞肥大时,CSE/H_2S水平、miRNA-133a mRNA表达均显著下降。应用NaHS预处理,能上调心肌细胞CSE/H_2S水平,增加H_2S含量和miRNA-133a mRNA表达,并明显抑制心肌细胞肥大。(2)心肌细胞肥大时,细胞内钙离子浓度明显增加,CaN表达和NFATc4胞核蛋白表达增加,NFATc4核转位明显增强;应用NaHS预处理能明显抑制ISO诱导的上述效应。(3)应用antagomir-133a能逆转H_2S抑制心肌细胞肥大的作用,使心肌细胞内钙离子浓度、CaN表达和NFATc4胞核蛋白表达增加,NFATc4核转位增强。结论:H_2S通过负性调控作用抑制心肌细胞肥大,该作用可能与H_2S上调miRNA-133a的表达,抑制其下游的Ca^(2+)/CaN/NFATc4信号通路的激活有关。

基于“肾主骨”与Nrf2/NF-κB/NFATc1通路探讨益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠作用机制

目的探讨益气养阴活血方通过调控核因子E2相关因子(Nrf2)/核因子κB(NF-κB)/活化T细胞核因子胞浆1型(NFATc1)信号通路对糖尿病肾病(DKD)保护机制。方法50只雄性SD大鼠随机分为正常组8只、造模组42只。造模组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立DKD大鼠模型,将造模成功的32只大鼠随机分为模型组、代文组、益气养阴活血方等剂量组(等剂量组)、益气养阴活血方高剂量组(高剂量组),每组8只。灌胃6周后苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肾脏病理变化,生化检测各组大鼠血清ALP、Scr、BUN、FBG、Nrf2、NF-κB、NFATc1表达水平及24 h-UTP,Western blot及RT-PCR检测肾脏组织Nrf2/NF-κB/NFATc1通路相关蛋白及其mRNA表达。结果与模型组比较,益气养阴活血方可改善DKD大鼠肾脏病理损伤,降低血清ALP、Scr、BUN、FBG、NF-κB、NFATc1及24h-UTP水平,提高血清Nrf2含量水平(P<0.01);益气养阴活血方还可提高DKD大鼠肾脏组织Nrf2蛋白及其mRNA水平,降低NF-κB p65、NFATc1蛋白及其mRNA表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论益气养阴活血方可能通过调节Nrf2/NF-κB/NFATc1信号通路,抑制机体氧化应激及炎症反应,减轻肾脏病理损害、保护肾功能、降低尿蛋白。