LINC00963通过miR-146a-5p/NFE2L1轴调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

背景长基因间非编码RNA 00963(long intergene non-coding RNA 00963,LINC00963)在肿瘤表达上调,但LINC00963在胃癌中的功能和作用机制并未阐明.Starbase预测显示微小RNA(microRNA,miR)-146a-5p可能是LINC00963的靶基因,核因子类红细胞2相关因子1(nuclear factor erythroid-2 like 1,NFE2L1)可能是miR-146a-5p的靶基因.本研究假设LINC00963可能通过调控miR-146a-5p/NFE2L1轴表达影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.目的探讨LINC00963对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制.方法选取42例胃癌患者的癌组织及癌旁组织,实时定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌组织中LINC00963表达水平;RT-qPCR检测胃癌细胞系SNU-1、AGS、HS-746T中LINC00963、miR-146a-5p和NFE2L1 mRNA的表达水平;将胃癌细胞SNU-1分为正常对照(NC)组、si-LINC00963组、si-NFE2L1组、si-NC组、miR-146a-5p组、miR-NC组、si-LINC00963+pcDNA-NC组、si-LINC00963+pcDNA-NFE2L1组;CCK-8检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测LINC00963、miR-146a-5p、NFE2L1之间的靶向关系.结果胃癌组织及胃癌细胞系SNU-1、AGS、HS-746T中LINC00963表达水平升高,胃癌细胞系中miR-146a-5p表达水平降低,NFE2L1 mRNA表达水平升高(P<0.05).LINC00963、NFE2L1低表达或miR-146a-5p高表达,胃癌细胞SNU-1的活性降低,细胞迁移和侵袭数量减少(P<0.05).高表达NFE2L1可以逆转LINC00963低表达对SNU-1细胞的作用.LINC00963靶向调控miR-146a-5p;miR-146a-5p靶向调控NFE2L1.结论LINC00963低表达通过调控miR-146a-5p/NFE2L1轴抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.

基于CRISPR/Cas9技术敲除NFE2L1对肺癌A549细胞增殖的影响

目的利用改进的CRISPR/Cas9-2hitKO技术构建核因子E2相关因子1(NFE2L1)缺失的肺癌A549细胞,并观察NFE2L1敲除对肺癌A549细胞增殖的影响。方法利用改进的CRISPR/Cas9-2hitKO基因编辑技术,将重组NFE2L1-gRNA表达载体转入肺癌A549细胞,嘌呤霉素筛选NFE2L1缺失的肺癌A549细胞,并通过DNA测序和Western Blot实验验证获得的A549细胞。采用CCK8和克隆形成实验观察敲除NFE2L1对肺癌A549细胞增殖的影响。结果DNA测序和Western Blot实验结果表明,成功获得稳定敲除NFE2L1的肺癌A549细胞。CCK8和克隆形成实验均表明敲除NFE2L1促进肺癌A549细胞的增殖。结论利用CRISPR/Cas9-2hitKO技术成功构建NFE2L1缺失的A549细胞,敲除NFE2L1能够促进肺癌细胞增殖。

ALKBH5去除NFE2L1的m6A甲基化修饰促进黑色素瘤放化疗抵抗的机制研究

目的探讨去甲基化酶AlkB同源蛋白5(AlkB homologue 5,ALKBH5)介导的m6A甲基化修饰在皮肤恶性黑色素瘤(cutaneous malignant melanoma,CMM)放化疗抵抗中的作用。方法自2019年5月至2021年1月,辽宁省人民医院皮肤科采用实时荧光聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测CMM细胞中ALKBH5和NFE2L1(nuclear factor,erythroid 2 like 1)的表达。TCGA分析ALKBH5和NFE2L1的表达及相关性。在CMM细胞中敲减ALKBH5,免疫沉淀检测NFE2L1的m6A甲基化表达变化。MTT检测ALKBH5和NFE2L1在CMM细胞放化疗抵抗中的作用。结果与正常人表皮黑色素细胞相比,CMM细胞中ALKBH5和NFE2L1的表达水平均明显升高(P<0.05);ALKBH5调控NFE2L1的m RNA的m6A甲基化水平。敲减ALKBH5的CMM细胞,在经过照射和顺铂处理后,细胞成活比例下降,放化疗抵抗减轻(P<0.05);而过表达NFE2L1,治疗后的细胞成活比例增加,诱导了CMM的放化疗抵抗(P<0.05)。结论ALKBH5可通过去除NFE2L1的m6A甲基化修饰,上调NFE2L1的表达,促进CMM的放化疗抵抗。ALKBH5对CMM恶性表型的影响是通过NFE2L1实现的。

NFE2L1在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的:通过检测食管鳞癌标本中核因子E2相关因子1(NFE2L1)的表达情况,探究NFE2L1在食管鳞癌发生发展中的作用,为食管鳞癌的诊治以及预后评估提供新的思路。方法:收集我校附院2016-2017年经病理组织学检查诊断为食管鳞癌的手术标本40例及其对应的癌旁组织并从NCBI数据库下载GEO测序数据,应用定量PCR、免疫组化和生物信息分析等方法检测分析NFE2L1基因的表达情况。结果:在食管鳞癌组织中,NFE2L1表达阳性31例(77.5%),癌旁组织阳性表达17例(42.5%),两组比较差异显著有统计学意义(P<0.001);进一步发现NFE2L1的阳性表达与肿瘤分化程度和淋巴转移相关(P<0.05)。但在不同年龄、性别、浸润深度及不同部位之间差异无统计学意义。GEO数据分析结果显示NFE2L1在食管鳞癌组织显著高表达(P<0.01),只是未达到显著差异表达的阈值标准(即变化倍数小于2倍)。结论:NFE2L1在食管鳞癌中高表达,表达的高低与食管鳞癌的发生进展密切相关。

核因子E2相关因子1诸多亚型的产生机制及其在疾病中的作用

核因子E2相关因子1(nuclear factor-erythroid 2 related factor 1,Nrf1/Nfe2l1)在个体正常生长发育过程中具有维持细胞内稳态和器官完整性的作用。其功能缺失会产生严重的氧化应激和基因组不稳定等,继而导致肝癌、神经退行性疾病等多种疾病。近年研究发现,Nrf1存在多种具有不同程度活化活性甚至相反活性的亚型,这些亚型的分布可能在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。为了更好地了解Nrf1在组织细胞中所发挥的功能,本文简要介绍Nrf1的发现历程,并从选择性剪切加工、内部选择性翻译起始、翻译后剪切加工等方面阐述Nrf1亚型的产生机制,同时详细阐明“跨膜动态加工”、“位点特异性剪切加工”、“泛素依赖性剪切加工”3种翻译后加工模型的差异。最后,介绍Nrf1各亚型的生物学功能及其产生过程出现异常时在疾病中的作用。本文着重对Nrf1各亚型产生机制及其在疾病中的作用进行综述,力求为寻找肿瘤治疗的新策略提供新的方向。