miR-20a-5p调控NFKBIB对人肾母细胞瘤细胞WiT49裸鼠移植瘤增殖的影响

目的探讨miR-20a-5p对人肾母细胞瘤细胞系WiT49裸鼠移植瘤的影响及作用机制。方法从GEO数据库下载基因表达芯片,应用GEO2R获得差异基因miR-20a-5p;通过cBioPortal数据库获得与miR-20a-5p表达具有正相关关系的NF-κB基因;通过targetscan数据库预测miR-20a-5p靶基因可能为NF-κB转录因子抑制蛋白家族的NFKBIB,并使用双荧光素酶实验进行验证;体外培养肾母细胞瘤细胞系WiT49,采用miR-20a-5p模拟物及其抑制基因构建慢病毒载体分别转染至WiT49细胞;将12只裸鼠随机分为3组,WiT49模型组、WiT49-miR-20a-5p过表达组、WiT49-miR-20a-5p敲低组;裸鼠成瘤实验检测各组瘤块质量及体积;应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组瘤块中miR-20a-5p、NFKBIB及NF-κB表达情况;通过CCK-8细胞增殖实验验证各组瘤细胞增殖情况。结果miR-20a-5p在肾母细胞瘤中高表达,且与NF-κB表达呈正相关,miR-20a-5p与NFKBIB具有相互结合位点且存在结合作用;裸鼠成瘤实验中,WiT49-miR-20a-5p过表达组瘤块体积及质量较WiT49模型组均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);qRT-PCR实验中,WiT49-miR-20a-5p过表达组中miR-20a-5p及NF-κB表达均高于WiT49模型组,WiT49-miR-20a-5p过表达组中NFKBIB表达低于WiT49模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8细胞增殖实验中WiT49-miR-20a-5p过表达组细胞24及48 h吸光度高于WiT49模型组,WiT49-miR-20a-5p敲低组细胞24、48及72 h吸光度均低于WiT49模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-20a-5p可能是通过调控NFKBIB激活NF-κB通路促进人肾母细胞瘤细胞WiT49裸鼠移植瘤生长。

miR-653调控靶基因在乳腺癌发生及发展中的作用

目的:分析miR-653在乳腺癌细胞及肿瘤组织中的表达变化,研究其对乳腺癌细胞生物学行为的影响,揭示其在乳腺癌中发挥的作用及其相关作用机制。方法:采用qRT-PCR比较miR-653在正常组织、细胞和乳腺癌组织、乳腺癌细胞系中的表达水平;采用CCK8法和Tranwell检测miR-653对细胞的增殖、迁移能力的影响;采用qRT-PCR和Western blot检测NFKBIB在正常组织、细胞和乳腺癌组织、乳腺癌细胞系中的表达水平;采用CCK8法、流式细胞法和Tranwell检测miR-653和NFKBIB对乳腺癌细胞增殖、细胞周期、迁移能力的影响;Western blot检测miR-653对NFKBIB、p65、Livin和Survivin蛋白表达的影响。结果:发现miR-653在乳腺癌肿瘤组织和乳腺癌细胞株中表达明显升高,可以促进乳腺癌细胞的增殖、迁移能力;NFKBIB是miR-653的靶基因,miR-653可以负性调控NFKBIB的mRNA和蛋白表达;转染miR-653可以促进细胞的增殖、迁移能力以及诱导S期阻滞,过表达NFKBIB可以逆转这种促进效果;miR-653可以通过调控NFKBIB激活NF-κB通路调节其下游蛋白Livin和Survivin的表达。结论:本研究揭示了miR-653通过抑制靶基因NFKBIB的表达激活NF-κB,促进乳腺癌细胞的增殖、迁移以及诱导S期阻滞,在乳腺癌中发挥促癌因子的作用。因此miR-653具有成为乳腺癌诊断及治疗新靶点的潜力。