信号分子抑制剂对辐射后NFS-60细胞的影响

为了解造血因子受体信号转导在造血细胞辐射损伤时的变化及其与细胞增殖的关系，应用ＭＴＴ法分别观察了蛋白质酪氨酸和丝苏氨酸激酶及其磷酸酶抑制剂对照射及未照射ＮＦＳ－６０细胞增殖的影响。结果显示，一定浓度的磷酸酶抑制剂可促进细胞增殖；而激酶抑制剂则抑制细胞生长，同未照射细胞相比，磷酸酶抑制剂对 ３Ｇｙ照射细胞具有更强的促增殖作用，而某些激酶抑制剂则可加重细胞的辐射损伤。提示辐射后 ＮＦＳ－６０细胞激酶／磷酸酶自稳平衡失调，推测这可能是辐射后造血细胞增殖抑制的原因之一。

过钒酸钠不同时间给药对受照NFS-60细胞增殖的影响

为了解酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸钠用于辐射损伤治疗的可行性,并探讨酪氨酸磷酸酶在造血细胞辐射损伤中的作用,应用四甲基氮唑蓝(MTT)法观察了过钒酸钠不同给药方式对不同剂量照射NFS-60细胞增殖的影响。结果显示,过钒酸钠可特异地促进照射细胞的增殖,其促增殖作用随着照射剂量的增加而显著;;并因过钒酸钠给药方式的不同而各异。对于3Gy照射NFS-60细胞,过钒酸钠以照射后24h给药效果最好,照射前给药与照射后即刻给药差异不明显,而对于5Gy照射细胞,过钒酸钠的最佳给药时间为照射后24和48h,照射前给药优于照射后即刻给药。酪氨酸磷酸酶可能参与造血细胞辐射损伤的进程,应用其抑制剂增强受体信号转导有希望成为放射病治疗研究的新方向。

过钒酸钠对照射后NFS-60细胞G-CSF增殖反应性的影响

目的 为了解酪氨酸磷酸酶在造血细胞辐射损伤中的作用 ,深化对造血细胞辐射损伤分子机理的认识。方法 应用MTT法观察了酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸钠对照射和未照射细胞增殖的影响。结果 过钒酸钠对细胞增殖的影响因培养基中G CSF浓度的不同而表现出相异的作用 :当G CSF浓度偏低时 ,一定浓度的过钒酸钠的加入可促进细胞增殖 ,而当G CSF浓度过高时 ,过钒酸钠的加入则抑制细胞生长 ;与未照射细胞相比 ,过钒酸钠对 3Gy照射细胞的促增殖作用明显加强 ,生长抑制作用相对减弱。结论 酪氨酸磷酸酶可能参与了细胞增殖的不同调控过程 ,而照射可能加强了细胞酪氨酸磷酸酶的增殖抑制作用。

用NFS－60细胞株法对重组人粒细胞集落刺激因子制剂的活性测定研究

本文对基因重组粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳｒＦ）制剂用Ｎｒｓ－６０细胞株培养法进行了生物活性测定，结果显示ｒｈＧ－ＣＳＦ的对数剂量与反应呈较好的直线关系，相关系数（ｒ）为０．９９１，这一结果同样也反映在另一不同基因重组技术工艺生产的ｒｈＧ－ＣＳＦ制剂上，由于细胞复苏传代１次与３次所得剂量反应曲线均呈很好的直线关系，因而可使本法的实验周期更短。试验结果表明ＮＦＳ－６０细胞株法可作为一种专属和灵敏的测定ｒｈＧ－ＣＳＦ活性的方法。

鼠粒细胞集落刺激因子受体的纯化及鉴定

粒细胞集落刺激因子受体（ＧＣＳＦＲ）在鼠ＮＦＳ６０细胞中有较高的含量，通过对ＮＦＳ６０细胞的大规模培养，用ＣＨＡＰＳ及超速离心抽提ＧＣＳＦＲ，经ＧＣＳＦ亲和层析纯化获得ＧＣＳＦＲ，采用ＡＢＣＥＬＩＳＡ进行鉴定．

用噬菌体随机肽库筛选刺激细胞生长的活性小肽

目的 筛选刺激ＮＦＳ－６０细胞生长的活性小肽。方法以Ｇ－ＣＳＦ依赖细胞系ＮＦＳ－６０为靶细胞，筛选随机６和１５肽库，经３轮筛选后，随机挑取６０个噬菌体克隆进行生物学活性和结合活性鉴定。结果得到６个刺激ＮＦＳ－６０细胞生长的阳性噬菌体克隆。经细胞ＥＬＩＳＡ检测，这６个小肽都可与ＮＦＳ－６０细胞结合，并且这６个小肽与细胞结合的量，都与所加入的噬菌体的量成正比，经测序未找到共同序列。结论从随机噬菌体肽库中筛到的活性小肽，可以模拟某些生长因子的活性部位，来刺激靶细胞的生长。

测定重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性的MTT比色法

用粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）的依赖细胞株（ＮＦＳ－６０细胞株）为靶细胞，以ＭＴＴ比色法测定重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）的生物学活性，确定了在ＭＴＴ比色法中ＮＦＳ－６０细胞浓度为３×１０４／孔以及ｒｈＧ－ＣＳＦ浓度与ＮＦＳ－６０细胞有量效关系的范围为２ｎｇ／ｍｌ～７．８ｐｇ／ｍｌ，对几种溶解液进行了比较，选定１０％ＳＤＳ－０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ作为ＭＴＴ结晶的溶解液，对ＭＴＴ比色法的特异性、精密度和方法回收率进行了研究。

重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性测定方法研究

目的用世界卫生组织国际标准品粒细胞集落刺激因子 (G CSF)生物学活性标准品研究NFS 6 0细胞测定重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)生物学活性的方法。方法采用溴化四唑蓝 (MTT)染色法。结果NFS 6 0细胞染色体为 39条 ;细胞数在 1× 10 5～ 1× 10 7个 /ml间MTT染色显示梯度 ;将 (4 ,4)法引入rhG CSF生物学活性的测定 ,单次实验结果的平均可信限率为 13.5 6 0 % ,(4 ,4)法测定rhG CSF生物学活性的批内CV <10 % ,批间CV为 10 .10 9%。结论 (4 ,4)法可用于rhG CSF生物学活性的测定 ,对测定方法标准化后 ,测定结果可准确、有效地指导rhG CSF的生产和研究。

重组人粒细胞刺激因子测活方法中几种常见显色方法的对比分析

目的分析重组人粒细胞刺激因子生物学活性检测中,以NFS-60细胞为测活基础的几种常见显色/裂解/检测方法,所得检测结果是否一致。方法应用NFS-60细胞/MTT染色法、NFS-60细胞/MTS染色法、NFS-60细胞/CCK-8染色法、NFS-60细胞/化学发光法等检测重组人粒细胞刺激因子生物学活性,并对结果进行统计分析。统计分析了NFS-60细胞/MTT法双波长(570 nm检测,630 nm参比)、单波长(570 nm检测和630 nm检测)结果。分析比较了NFS-60细胞/MTS动态检测法、NFS-60细胞/CCK-8动态法检测结果。结果各生物学活性检测方法的检测结果差别不显著(P>0.05);NFS-60/MTT法双波长、单波长检测结果差别不显著(P>0.05)。NFS-60细胞/MTS动态检测法、NFS-60细胞/CCK-8动态法与NFS-60细胞/MTT染色法检测结果间差别不显著(P>0.05)。结论以NFS-60细胞为测活基础的几种常见的显色/裂解/检测方法,所得检测结果一致,为各实验室(应用不同显色/裂解/检测方法)给出的数据是否可以综合利用提供依据,为2015年版《中国药典》中重组人粒细胞刺激因子生物学活性检测方法的扩充提供支持,也为其他细胞因子生物学活性检测方法的扩充提供借鉴。