HPV阳性宫颈癌细胞中NFX1-123与HPV16 E6的细胞定位关系及其可能作用机制

目的:构建并验证NFX1-123基因真核表达质粒,初探其在HPV阳性宫颈癌细胞中与HPV16 E6的细胞定位关系及可能作用机制。方法:获取NFX1-123基因片段,插入真核表达载体,构建并鉴定重组表达质粒。通过免疫共沉淀和免疫荧光方法对NFX1-123和HPV16 E6的相互作用与细胞定位关系进行研究。结果:酶切鉴定和测序确认了重组表达质粒nHA-NFX1-123/pRK5构建成功。NFX1-123蛋白可在HEK-293T细胞中正常表达且主要表达在细胞质中。通过免疫共沉淀法验证了NFX1-123和HPV16 E6蛋白结合。免疫荧光观察到与HPV16 E6共表达时,NFX1-123从细胞质迁移至细胞核并与细胞核中的HPV16 E6发生共定位。结论:成功构建nHA-NFX1-123/pRK5重组质粒。NFX1-123蛋白可与HPV16 E6蛋白结合,并受HPV16 E6影响从细胞质转移至细胞核,补充解释了为何胞质中的NFX1-123可与胞核中的HPV16 E6结合并通过多途径促进HR-HPV感染的宫颈上皮向宫颈癌发生。