性伴间淋球菌的opa分型及Ng—MAST基因分型

目的评价淋球菌opa分型及Ng—MAST对淋球菌分离株进行基因分型的能力，分析性伴分离淋球菌基因型别之间的关系。方法本研究中24株淋球菌野生株于2006年2月至2007年8月从华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科门诊分离获得，经Thayer Martin（T—M）培养基选择分离培养后通过革兰染色和氧化酶试验等方法确证。PCR扩增其opa基因以HpaⅡ酶切及聚丙烯酰胺凝胶电泳银染显色分析，并用NG—MAST方法从分子水平上进行基因分型。结果24株野生株淋球菌中，Ng—MAST区分出10种ST型，而使用opa分型则呈现12种OT型；新发现的ST（217—86％同源178）是国内特有的流行株。结论淋病患者一性伴组除了45／46之外，每对菌株的ST型及OT型均相同，表明患者与性伴相互接触传染。淋球菌opa分型能力高于Ng—MAST，ST型别可进一步的分成opa—types（OT）亚型。

Typing of Neisseria gonorrhoeae Opa and NG-MAST Gene of 12 Pairs of Sexual Contact Gonorrhea Patients in China

To identify the genomic species of Neisseria gonorrhoeae, evaluate the difference between two molecular epidemiological methods and examine the relationship between sex partners and genotypes of bacteria, 24 strains of Neisseria gonorrhoeae isolated from the outpatients with gonorrhea were identified by using the Opa genotyping and NG-MAST genotyping and the relationship between genotypes and phenotypes was studied. Twenty-four strains of Neisseria gonorrhoeae fell into 10 ST genotypes by NG-MAST genotyping, whereas these strains were classified into 12 OT Opa genotypes by Opa genotyping. A new epidemic strain of ST genotype （217-86% homologisation 178） in China was identified. It is concluded that genotypes of each pair of strains from a pair of patient/sex partner besides 45/46 are the same, indicating that contagious infection take place between patient and the sex partner. Opa genotyping was more effective than NG-MAST genotyping in identifying the genomic species of Neisseria gonorrhoeae. ST genotype could be further classified into different Opa-types.

中山地区淋球菌头孢菌素敏感性及NG-MAST研究

目的:研究中山辖区淋球菌对头孢曲松与头孢克肟的敏感性,及淋球菌多抗原测序分型(NG-MAST)的基因型别。方法:收集2017-2018年中山市辖区医疗机构淋球菌菌株,经分离、鉴定和纯化后,采用琼脂稀释法检测其对头孢曲松与头孢克肟的最小抑菌浓度(MIC);应用NG-MAST进行淋球菌porB和tbpB外膜蛋白基因分型。结果:共检测193株淋球菌,对头孢曲松、头孢克肟的低敏率分别为5.2%和13.5%;NG-MAST分型显示193株菌共有125个型别,其中65种为已知型别,60种为新型别;所检菌株以ST5308、ST5061、ST2268、NEW1、ST10091、NEW2和NEW3为优势型别,并且同型别菌株对同一抗生素的MIC值相同或相近。结论:头孢曲松和头孢克肟作为淋病治疗的一线药物,已出现低敏;本地区淋球菌porB和tbpB外膜蛋白出现新的基因型别。

淋球菌对头孢曲松的敏感性及淋球菌多抗原测序分型研究

目的了解中国广东地区2010—2016年淋球菌对头孢曲松的敏感性以及相应菌株的淋球菌多抗原测序分型(NGMAST)基因型别。方法 2010—2016年在广东省疾病预防控制中心收集的285株淋球菌,经分离纯化及鉴定后,采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的琼脂稀释法测定其对头孢曲松的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);菌株培养后利用试剂盒提取DNA,并进行淋球菌多抗原测序分型(NG-MAST)。结果本次测试的285株淋球菌除1株MIC>0.25μg/mL外,其他都属于敏感菌株(CLSI敏感标准为≤0.25μg/mL),MIC≥0.06μg/mL的菌株比例为63.2%,其中2016年度MIC≥0.06μg/mL菌株比例为44.4%,2010年MIC≥0.06μg/mL菌株比例为70.6%。NG-MAST分型研究显示,285株淋球菌共有166个型别,菌株多样性较高,其中73种为已知型别,93种为新型别。测定的所有菌株中主要包括ST568(n=13),ST270(n=9),ST421(n=7),ST2288(n=5),ST1731(n=4),ST1766(n=4),ST1866(n=4),ST1870(n=4),ST1053(n=4),ST2318(n=4),ST5990(n=4),ST1614(n=4),ST1866(n=3)等。相同NG-MAST型别的菌株具有相同或相近的MIC值。结论广东地区淋球菌对头孢曲松MIC≥0.06μg/mL菌株比例较高,需要对此进行长期监测。7年间菌株的优势型别有较大变化,显示该地区性网络可能发生较大波动。NG-MAST分型可以作为分子生物学标记用于淋球菌耐药监测。

阿奇霉素耐药及头孢曲松低敏淋球菌基因分型与多态性研究

目的分析广州地区阿奇霉素耐药及广谱头孢菌素低敏淋球菌基因分型和基因多态性特征。方法检测阿奇霉素(AZM)和头孢曲松(CRO)最小抑菌浓度(MIC)。检测AZM耐药(AZM-R)淋球菌23SrRNA、多重可传递耐药调节(mtrR)基因和青霉素结合蛋白2(PBP2)编码基因(penA)突变类型。采用淋球菌多抗原序列分型法(NG-MAST)检测菌株基因型。结果共检测淋球菌485株,包括AZM-R菌株(MIC≥1mg/L)77株(15.9%),其中AZM低度耐药(AZM-LLR,MIC=1mg/L)菌株33株(6.8%)、AZM中度耐药(AZM-MLR,MIC≥2mg/L)菌株44株(9.1%)。AZM-MLR菌株中CRO低敏(MIC≥0.125mg/L)菌株19株(占43.2%),构成比高于AZM-LLR菌株中的CRO低敏株(18.2%,P<0.05)。各类菌株间23SrRNA、mtrR、penA基因突变或联合突变检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。AZM-LLR与CRO低敏菌株,以及AZM-MLR与CRO低敏菌株间各类突变检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。未检出A2059G突变及AZM高度耐药株(MIC≥256 mg/L)。77株AZM-R菌株经NG-MAST检测,检出67株序列类型,其中30株有异常。多数序列类型表现为单一表型。结论该地区出现的AZM耐药及CRO低敏淋球菌值得持续监测和进一步研究,以明确其耐药机制。

长沙市阿奇霉素耐药淋球菌NG-MAST分型及相关基因多态性

目的:了解长沙市阿奇霉素耐药淋球菌NG-MAST分型及相关基因多态性。方法:收集2018~2020年长沙市淋球菌分离株,用琼脂稀释法选出阿奇霉素耐药菌株(AZ-R,MIC≥1 mg/L),并随机抽取相应数量敏感株(AZ-S,MIC≤0.25 mg/L)作为对照,同时进行NG-MAST分型及23S rRNA、erm、mtrR基因突变位点分析。结果:共收集到155株淋球菌,其中耐药株23 株,耐药率为 14.8%;NG-MAST共获得47个ST型,41个由单一菌株构成,含27个新型别;2株耐药株23S rRNA发生错位突变,分别为A2059G和C2611T在4个等位基因全突变;未发现带有erm基因的耐药株;mtrR基因启动子反向重复序列中单个核苷酸(A)缺失AZ-R组占比高于AZ-S组。结论:目前,长沙市单独采用阿奇霉素治疗淋病已不适用;mtrR基因核苷酸(A)缺失与阿奇霉素淋球菌耐药存在显著相关性,有助于我们对其流行特征进行分析和监测。

山西太原地区淋球菌NG-MAST基因分型

目的采用淋球菌多抗原序列分型(NG-MAST)进行淋球菌基因分型,了解山西太原地区淋球菌流行株的菌株基因分型。方法收集山西太原地区淋球菌菌株41例,提取所有菌株的DNA,扩增por和tbpB基因片段,进行测序,在NG-MAST基因数据库里进行比对,用MEGA-X对其进行进化树分析。结果研究41株菌的NG-MAST基因分型,发现新的基因分型共15株(36.59%)。NG-MAST进化图显示NG-MAST3305和NG-MAST2083是山西地区的优势菌株。por1132、por2001、por6993是山西地区por的优势基因型,tbpB4是山西地区的优势基因型。por等位基因号90和5692可能为短链上同一来源基因型;淋球菌的tbpB的进化图可以发现tbpB4、1601、1971、907、75、446的等位基因号亲缘关系比较近,它们可能是短链上来源相同的基因型;淋球菌的NG-MAST的进化图可以发现ST4022和ST New4的亲缘关系比较近,它们可能是短链上来源相同的菌株。结论 NG-MAST可以持续监测山西太原地区淋球菌的基因分型,了解本地区淋球菌流行状况。

广州淋球菌基因特征及其多抗原序列分型与环丙沙星耐药相关性研究

目的探讨2014年广州市97株淋球菌环丙沙星耐药株的基因特征及其多抗原序列分型（NG～MAST）与淋球菌耐环丙沙星的相关性。方法用琼脂稀释法测定淋球菌对环丙沙星的最低抑菌浓度（MIC），PCR分别扩增淋球菌的gyrA、parC基因和NG—MAST分型基因porB、tbpB基因并测序，获取耐药菌株的sT型别。结果97株淋球菌中95株（97．9％）对环丙沙星耐药。95株环丙沙星耐药菌株均在gyrA基因对应丝氨酸的第91和95位点上发生了突变，其中93株菌出现了parC基因突变。41株高水平耐药株（MIC≥16m∥L）中35株（85．4％）出现了parC基因87位点突变，54株低水平耐药株中32株（59．3％）出现此突变，差异有统计学意义（Z：7．64，P〈O．05）。96株淋球菌分离株配对后，50株为网站已编号型别，共35个不同的ST型，其中10个ST型含有2—4个不同的分离株，sT型别中最常见ST5309。对淋球菌菌株系统进化树分析，淋球菌流行株可分为两群，第1群84株中MIC≥16mg／L的菌株39株占46．4％，第2群12株中只有1株MIC值为16mg／L，差异有统计学意义（r=6．27，P=0．012）。结论淋球菌对环丙沙星的高水平耐药主要与parC基因87位点突变相关。NG—MAST分型与环丙沙星耐药程度高低可能存在相关性。

中国部分地区淋球菌耐药监测点产青霉素酶淋球菌及其 blaTEM-135突变体的流行调查

目的：了解中国不同地区淋球菌耐药监测点产青霉素酶淋球菌（PPNG）的比例及 blaTEm-135突变体在 PPNG 中的分布，比较 PPNG 及 blaTEm-135突变体淋球菌多抗原测序分型（NG-MAST）的型别分布，了解不同地区 PPNG blaTEm-135突变体的差异与联系。方法2012年在江苏、上海、浙江、天津、广东、广西6个淋球菌耐药监测点共收集572株淋球菌，经过分离纯化及鉴定后，采用头孢噻吩纸片法测定 PPNG；菌株培养后利用试剂盒提取 DNA，通过错配扩增突变分析 PCR（MAMA PCR）鉴定 blaTEm-135突变体，采用 NG-MAST 进行分型研究。结果572株淋球菌中 PPNG 总阳性率为38.1%（218/572），PPNG 中相应 blaTEm-135突变体的总比例为52.3%（114/218）。监测点中 PPNG 阳性率从高至低分别为：浙江（45/87，51.7%）、上海（36/79，45.6%）、广东（78/205，38.0%）、广西（12/32，37.5%）、江苏（24/77，31.2%）、天津（23/92，25%）；PPNG 中相应 blaTEm-135突变体的阳性率从高至低分别为：浙江（31/45，68.9%）、江苏（14/24，58.3%）、广东（39/78，50.0%）、上海（17/36，47.2%）、天津（9/23，39.1%）、广西（4/12，33.3%）。 NG-MAST 分型研究显示，blaTEm-135突变体中流行菌株型别有 ST2318、ST1768、ST1866、ST1053、ST8726等，其中 ST1768、ST1053和 ST8726与 blaTEm-135突变体有较强的对应关系。天津 PPNG 菌株及 blaTEm-135突变体 ST 分布与其他各监测点有显著差异，江浙沪地区菌株 ST 有一定联系。结论中国淋球菌耐药监测点 PPNG 及相应 blaTEm-135突变体阳性率处于较高水平，不同地区间 PPNG 及相应 blaTEm-135突变体阳性菌株 ST 型别分布差异有统计学意义。

深圳市淋球菌阿奇霉素耐药的分子机制及流行特征分析

目的了解深圳地区淋球菌临床分离株对阿奇霉素的耐药水平、分子机制及流行特征。方法收集2011—2015年深圳市淋球菌临床分离株，采用琼脂稀释法和E-test法筛选出阿奇霉素耐药株（AZ-R, MIC≥1 μg/ml），将MIC≥2 μg/ml的耐药菌株以及随机抽取（SPSS17.0软件）的一定数量的敏感（MIC≤0.25 μg/ml）菌株（AZ-S）作为实验菌株进行耐药基因23S rRNA、mtrR、erm基因分析及淋球菌多抗原序列分型（NG-MAST）。结果共收集到788株淋球菌，AZ-R菌株有148株，耐药率为18.8%（148/788）。高水平阿奇霉素耐药菌株（AZ-HLR，21株）中有18株23S rRNA基因发生错义突变，均为4个等位基因的A2059G突变。中等水平阿奇霉素耐药菌株（AZ-MLR，29株）中有12株23S rRNA基因发生错义突变，其中主要为C2611T在4个等位基因中的全部突变（10株）。对mtrR启动子和编码区的突变分析，仅发现G45D/Y105H突变在AZ-HLR组中所占比例高于AZ-MLR组（χ^2＝12.702，P＝0.000）和AZ-S组（χ^2＝4.462，P＝0.035）。发现1株菌株携带有ermB基因（MIC值为2 μg/ml）。NG-MAST分型，共得到了81个ST型别，其中大部分ST型别由单一菌株构成，AZ-R组8个成簇的ST型别中ST1866、ST3356分别被国内城市南京、重庆、广州报道过，Neighbor-joining建树未观察到耐药株单独成簇的情况。结论目前深圳地区已不适用于单独采用阿奇霉素治疗淋病。淋球菌对阿奇霉素的高度耐药和中等水平耐药主要由23S rRNA上A2059G和C2611T突变分别介导。多地报道出现的ST1866和ST3356有助于我们更好地对阿奇霉素耐药淋球菌菌株的流行特征进行监测和分析。

某三级医院四环素耐药淋病奈瑟菌临床分离株的耐药机制及分子特征

目的对中国东部温州地区淋病奈瑟菌流行菌株进行分型,并对四环素耐药的相关机制进行研究。方法从淋病患者中分离出77株淋病奈瑟菌,采用E-test法进行青霉素、四环素、环丙沙星、大观霉素、头孢曲松和阿奇霉素的最小抑菌浓度(MIC)测定。PCR和DNA测序用于检测四环素抗性相关基因,包括Tet-M基因、mtrR启动子区和mtrR编码区。多抗原序列分型(NG-MAST)和多位点序列分型(MLST)分别用于确定所有临床分离株和四环素耐药分离株的分子特征。结果在77株淋病奈瑟菌中,74株(96.10%)、27株(35.06%)、70株(90.91%)和15株(19.48%)分别对青霉素、四环素、环丙沙星和阿奇霉素耐药。所有测试的分离株对大观霉素和头孢曲松敏感。19株耐四环素菌株均存在Tet-M基因,其中17株mtrR启动区域发生1个碱基A的缺失突变,3株mtrR编码区域发生G45D突变。19株四环素耐药淋病奈瑟菌共测得11个不同的NG-MAST基因型,其中ST14781、ST1766和ST1866各占15.79%(均为3株),2个ST型(10.52%,2/19)未在NG-MAST数据库中报道过。19株四环素耐药淋病奈瑟菌共测序得到12个不同的MLST基因型别,其中ST10899占26.32%(5株),ST1600占15.79%(3株)。结论淋病奈瑟菌对四环素的耐药可能与mtrR启动区域和Tet-M基因的突变相关。NG-MAST基因分型结果显示温州地区淋球菌临床分离物表现出分子分型多样化。应采取措施监测温州地区具有高抗药性的NG-MASTST1766和MLSTST1600淋病菌克隆。

淋病奈瑟菌的耐药性及分子流行病学观察

目的探讨临床分离的淋病奈瑟菌(淋球菌)对常用抗菌药物的耐药性及分子流行特征。方法收集2015-2016年本院临床分离的淋球菌,采用琼脂稀释法检测青霉素、四环素、大观霉素、环丙沙星、头孢曲松、头孢克肟、阿奇霉素的最小抑菌浓度(MIC),头孢噻吩纸片法检测产青霉素酶淋球菌(PPNG),淋球菌多抗原序列(NG-MAST)确定菌株的ST。结果共分离出126株淋球菌,对抗生素的耐药率依次为环丙沙星(100. 00%)、青霉素(73. 02%)、四环素(65. 08%)、阿奇霉素(21. 43%),检出17. 46%(22/126)的阿奇霉素高水平耐药(AZ-HLR)(MIC≥256mg/L)菌株,未发现耐大观霉素、头孢曲松、头孢克肟的淋球菌。57. 14%(72/126)的菌株为PPNG。NG-MAST分型结果显示,126株淋球菌分为82种不同的STs型别,其中ST1866(6. 35%)、ST1927(5. 56%)、ST3102(5. 56%)是主要ST型,没有明显优势的ST型别。结论本地区分离的淋球菌存在遗传背景的多样性;阿奇霉素耐药性较高,且发现AZ-HLR菌株,不适合单独治疗淋球菌感染;头孢曲松和大观霉素仍可作为淋病抗感染的一线药物。

广西地区淋病奈瑟菌对头孢菌素的耐药性及多抗原测序分型

目的了解广西地区淋病奈瑟菌对两种头孢菌素药物的耐药性及对应菌株多抗原测序分型(NGMAST)情况。方法从2012-2014年广西地区性病门诊患者尿道或宫颈收集分泌物培养共195株淋病奈瑟菌,经过分离纯化及鉴定后,用琼脂稀释法测定其对头孢曲松和头孢克肟的最小抑菌浓度(MIC),并进行淋病奈瑟菌多抗原测序分型(NG-MAST),数据统计采用SPSS13.0软件分析。结果2012-2014年从性病门诊淋病患者中收集临床分离菌株195株,其对头孢曲松的MIC≥0.060mg/L的菌株比例为8.21%;对头孢克肟的MIC≥0.060mg/L的菌株比例分别为11.28%。NG-MAST分型结果显示,195株淋病奈瑟菌共有147个型别,型别多样性很高,其中118种为已知型别,29种为新型别。所有菌株中以ST10380(n=5),ST621(n=4),ST1927(n=4),ST2318(n=4),ST3741(n=4),ST4539(n=4),ST1768(n=3),ST2770(n=3),ST6312(n=3)为优势型别。结论广西地区淋病奈瑟菌NGMAST型别具有丰富多样性,某些型别与头孢曲松和头孢克肟的MIC值有较强对应关系。NG-MAST分型可用于本地区淋病奈瑟菌耐药监测的辅助工具。

高水平阿奇霉素耐药淋球菌耐药机制及多序列抗原分型

目的了解临床分离的淋病奈瑟菌(淋球菌)对阿奇霉素高水平耐药(AZM-HLR)的机制及多序列抗原分型。方法收集2015-2016年临床分离的淋球菌,采用琼脂稀释法检测阿奇霉素的最小抑菌浓度(MIC),并筛选AZM-HLR(MIC≥256mg/L)菌株,荧光定量聚合酶链反应(PCR)扩增23S rRNA基因及外排系统mtrR编码基因,产物测序分析基因突变特征;淋球菌多抗原序列分型(NG-MAST)方法确定菌株的序列类型(ST)。结果 126株淋球菌中,27株阿奇霉素耐药菌株(21.4%, 27/126),其中22/27为AZM-HLR,MIC值均为1 024mg/L。23S rRNA测序结果显示,所有AZM-HLR菌株均出现等位基因A2059G的突变及mtrR启动子区的13碱基对(bp)反向重复序列内的单碱基位点缺失(△A),19/22存在mtrR编码区G45D突变。NG-MAST结果显示,AZM-HLR菌株中以ST3102和ST1866为主,分别占7/22、6/22。结论本地区分离的AZM-HLR淋球菌可能与23S rRNA等位基因A2059G突变、mtrR启动子区的13bp反向重复序列内的单碱基位点缺失及mtrR编码区G45D突变有关;ST3102和ST1866是该类菌株的优势型别。