补肾益智方对由A_β片段神经毒性诱导NG108-15细胞老年性痴呆模型神经递质释放影响的研究

目的 :观察补肾益智方对由Aβ片段神经毒性诱导的NG10 8- 15细胞老年性痴呆 (AD)模型神经递质释放的影响。方法 :利用免疫印迹检查、免疫放射活性测定及电生理学测定方法 ,观察补肾益智方含药血清处理Aβ片段神经毒性诱导的NG10 8- 15细胞后的胆碱乙酰基转移酶 (ChAT)活性、突触素蛋白(synapsin)水平及功能性突触形成率。 结果 :补肾益智方含药血清组ChAT活性和突触素蛋白水平高于正常对照血清组 ;含药血清能调节递质释放能力和提高功能性突触形成。结论 :补肾益智方具有减轻细胞对Aβ的神经毒性反应 ,表明该方能拮抗AD的病理发展 。

三种蜘蛛粗毒对NG108-15细胞电压门控钠通道的抑制作用

利用小鼠神经细胞瘤×大鼠神经胶质细胞的杂交细胞 NG1 0 8-1 5,通过全细胞记录 ( whole-cellrecording)模式的膜片钳技术 ,检验了虎纹捕鸟蛛 ( Selenocosmia huwena)、海南捕鸟蛛 ( Selenocosmia hainana)和广西大疣蛛 ( Macrotheleguangxia sp)的粗毒对 NG1 0 8-1 5细胞膜上电压门控 TTX敏感型钠电流和延迟整流钾电流的作用 .结果表明 ,三种蜘蛛粗毒对外向延迟整流钾电流没有明显作用 ,但对 TTX敏感型的快钠电流表现出较强的抑制效应 .抑制效应呈量效关系 .三种粗毒抑制钠电流的 EC5 0 相应约为 :3.4 mg/L;1 .8mg/L和 1 1 .0 mg/L.

绞股蓝正丁醇部位含药血清体外对Aβ_(25-35)诱导NG108-15细胞凋亡的抑制作用

目的:研究绞股蓝正丁醇部位含药血清在体外对Aβ25-35蛋白诱导NG108-15细胞凋亡的抑制作用。方法:采用细胞免疫荧光术、流式细胞术检测绞股蓝正丁醇提取部位含药血清对Aβ25-35蛋白诱导NG108-15细胞凋亡的影响,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测绞股蓝正丁醇提取部位含药血清对Aβ25-35蛋白诱导NG108-15细胞凋亡时胞内半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)的水平的影响。结果:绞股蓝正丁醇部位含药血清在体外能明显抑制Aβ25-35蛋白诱导的NG108-15细胞凋亡,降低细胞内Caspase-3水平。结论:绞股蓝正丁醇部位含药血清在体外对Aβ25-35蛋白诱导的NG108-15细胞凋亡有一定的保护作用,其机制可能与降低NG108-15细胞内Caspase-3水平有关。

三七总皂甙对淀粉样β_(25～35)肽诱导的NG108-15细胞老年性痴呆模型的保护作用(英文)

背景:阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)的病理病因虽然还没有完全清楚,但目前认为β-淀粉样肽(amyloidβ-peptide,Aβ)是引起AD的胆碱能神经功能紊乱的主要成分。因此,Aβ的产生及其对神经细胞的影响,以及寻找该病的发病机制、治疗方法及其有效的治疗药物成了医药界的研究热点。目的:观察三七总皂甙(PNS)对NG108-15细胞老年性痴呆模型的影响,为寻找该病的发病机制提供佐证,为研究和开发中药的新成分提供理论依据。设计:体外平行对照实验。单位:广西中医学院新药开发中心,广西中医学院生物化学教研室。对象:实验在广西中医学院新药开发中心完成。NG108-15细胞:中国科学院上海细胞研究所提供。PNS:云南玉溪维和制药厂生产。Aβ25～35片段:德国Sigma公司产品,批号:042K49501。MTT(四甲基噻唑蓝),德国Sigma公司产品,批号:020609。cAMP(环一磷酸腺苷)日本ャマサ酱油株式会社产品,批号:00207。胚胎牛血清(FBS):由美国Hy-clone公司提供,批号:0405。DMEM培养基:美国GIBCO公司产品,批号:0311。干预:NG108-15细胞培养法:含50mL/L胚牛血清、10g/LHAT、10g/L青霉素和链霉素(1:1)的DMEM培养液,置100mL/LCO2、37℃用的培养箱内培养殖,每隔一天换一次液,4d传代一次。主要观察指标:利用MTT法、细胞计数法和细胞形态学?

补肾益智方拆方含药血清保护Aβ25-35损伤NG108-15细胞的研究

目的 :研究中药补肾益智方拆方亚组的含药血清对AD细胞模型生长、分化等方面的影响 ,探讨该方药物的配伍规律。方法 :将补肾益智方拆分为补肾组、益气养血组和去冰片组 (即补肾组 +益气养血组 )等 3个亚组 ,连同原方组共 4组对大鼠灌胃给药分离药物血清。在含各组血清的培养液中 ,加入Aβ2 5 35 ,观察NG10 8 15细胞的生长状态、细胞增殖数、存活率 ,突起率及突起平均长度。结果 :与AD细胞模型组相比 ,补肾益智方及各亚组含药血清都能在一定程度上抑制Aβ2 5 35对细胞的损伤作用 ,但各组情况有所不同。各组含药血清对细胞的保护作用由强至弱依次是去冰片组 >补肾益智方组 >补肾组 >益气养血组。结论 :补肾药配伍益气养血药可增强对Aβ2 5 35损伤NG10 8 15细胞的保护作用 ,其中以补肾药的作用为主 ,方中冰片的功效有待进一步研究。

高效液相色谱法测定大鼠脑和NG108-15细胞内胍丁胺含量(英文)

目的 建立测定大鼠不同脑区和NG10 8 15细胞内源性胍丁胺含量的方法。方法 用高效液相色谱荧光检测法测定大鼠不同脑区 (包括皮层、海马、丘脑、纹状体和小脑 )及NG10 8 15细胞内胍丁胺含量。结果 正常大鼠不同脑区胍丁胺的含量范围为 0 .8～ 1.71μg·g- 1湿脑组织 ;NG10 8 15细胞内含量为 0 .0 4 4mg·g- 1蛋白。结论 此法适于常规测定动物脑组织及培养细胞内的胍丁胺含量。

阿片类药物对NG108-15细胞Ca^(2+)/钙调蛋白依赖的蛋白激酶II信息通路的作用

目的 观察阿片类依赖时Ca2 + 钙调蛋白依赖的蛋白激酶II信息通路的变化。方法 以NG10 8 15细胞作为体外的细胞模型 ,分别用竞争性蛋白结合法及放射免疫法、PDE法、γ 32 P参入法测定cAMP水平、钙调蛋白(CaM)活性和钙调蛋白依赖的蛋白激酶II(CaMKII)活性。结果 DPDPE作用NG10 8 15细胞 48h可使细胞浆和细胞核CaM和CaMKII活性升高 ,该变化可被CaM特异性拮抗剂W 7所抑制 ;CaMKII特异性抑制剂KN 6 2可抑制CaMKII活性的增高 ,而对CaM活性无明显影响。DPDPE作用NG10 8 15细胞 48h后 ,加入纳洛酮 ,CaM活性、CaMKII活性进一步增高。结论 Ca2 + CaMKII信息通路参与了阿片依赖的机制。

他克林对星形孢菌素诱导NG108-15细胞凋亡的保护作用

目的 用星形孢菌素诱导 NG1 0 8-1 5细胞损伤建立凋亡模型 ,观察乙酰胆碱酯酶 (ACh E)抑制剂他克林是否具有抗凋亡作用。方法 LDH活性测定判断细胞损伤状况 ,DNA染料 Hoechst3 3 3 42染色观察细胞核形态 ,SDS-PAGE和 Western blot印迹分析 Bax及 Bcl-2的蛋白表达水平。结果 NG1 0 8-1 5细胞经 0 .1μmol/ L星形孢菌素处理 2 4h,细胞内大量 LDH释放至培养液中 ,用 0 .1 mmol/ L 他克林预处理 2 h可使 LDH释放量由 45 %减至 3 2 % (P<0 .0 1 )。他克林预处理能延迟和减少星形孢菌素诱导的 Bax表达的上调 ,同时增加了星形孢菌素诱导 1 2～ 2 4h后 Bcl-2的表达水平。结论 他克林预处理对星形孢菌素诱导的凋亡性损伤有显著保护作用 ,可能通过抑制或延迟 Bax表达及促进

川楝素引起的NG108-15细胞和SK-N-SH细胞形态学变化

实验观察了ＮＧ１０８－１５和ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞在含川楝素的培养基中产生的形态学变化。（１）光镜下发现，川楝素可以引起ＮＧ１０８－１５细胞突起变短甚至消失、胞体变圆、细胞萎缩、失去贴壁能力出现飘浮，数量逐渐减少；在有血清培养的情况下，川楝素引起ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞间界限不清，无血清时，细胞出现飘浮现象。（２）电镜观察显示，川楝素引起ＮＧ１０８－１５细胞和ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞的死亡，大多数具有坏死细胞的特征，仅个别细胞的死亡具有典型凋亡细胞的特征。

Ca^(2+)/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路在DPDPE长时程作用的NG108-15细胞中的作用

目的 观察阿片类依赖时Ca2 + /钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ )信息通路的变化 ,以及Ca2 + /CaMKⅡ信息通路与cAMP水平之间的关系。方法 以NG10 8 15细胞作为体外的细胞模型 ,分别采用竞争性蛋白结合法及放射免疫法、PDE法、γ 3 2 P参入法以及RT PCR测定cAMP水平、钙调蛋白 (CaM)活性、CaMKⅡ活性和mDOR的mRNA表达水平的变化。结果 DPDPE长时程作用NG10 8 15细胞 ,cAMP水平升高 ,形成阿片依赖 ;细胞CaM活性和CaMKⅡ活性也升高 ,该升高可被CaM拮抗剂W 7所抑制 ,而CaMKⅡ活性的升高可被CaMKⅡ特异性抑制剂KN 6 2所抑制。W 7或KN 6 2可抑制阿片依赖导致的细胞cAMP水平的升高。阿片依赖时 ,加入纳洛酮诱发戒断 ,CaM活性、CaMKⅡ活性进一步增高。而在阿片依赖时 ,δ阿片受体的mRNA表达水平无明显变化。结论 Ca2 + /钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路可通过调节cAMP水平参与阿片依赖的机制。

NG108-15细胞系作为小鼠神经内分泌细胞模型的适合性

目的探讨NG108-15细胞系作为小鼠神经内分泌细胞模型的适合性。方法培养NG108-15细胞,大鼠及小鼠的下丘脑原代,观察其7 d后细胞生长情况,利用大鼠和小鼠的多个与神经内分泌有关的基因序列设计了两组不同的引物对该细胞系的总RNA进行基因扩增分析,试图分析该细胞系在基因表达水平的差异,以确定该杂合细胞在神经内分泌相关研究中的适合性。结果 7 d后三类细胞均有神经元的突触分化,但NG108-15细胞体积较大,成分散生长。大鼠和小鼠的原代培养细胞,则体积较小,细胞成簇生长,细胞间有明显的突触联系。荧光定量PCR显示,β-actin的扩增在两组细胞内扩增正常且无差异,说明两组细胞的起始模板量相等。但剩余的所有基因却只能在大鼠原代细胞中正常扩增,而在NG108-15细胞却扩增失败。所有基因均能在NG108-15细胞和小鼠原代细胞中进行扩增,且扩增效率无明显差异。所有来自小鼠的引物序列扩增正常,而来自大鼠的引物序列则除了内参基因β-actin扩增正常外,其他均扩增失败或扩增效率低下。结论在神经内分泌失调的研究中,该杂交瘤细胞更适合与小鼠动物的研究结果相对应。

冈田酸诱导NG108-15细胞tau蛋白过度磷酸化过程中PTEN蛋白水平的变化

目的探讨冈田酸(OA)诱导NG108-15细胞tau蛋白过度磷酸化过程中PTEN蛋白水平的变化。方法20 nmol.L-1OA孵育NG108-15细胞不同时间(0,3,6,12,18,24,36,48 h),倒置显微镜观察细胞形态的变化,免疫印迹法观测各时间点Ser396位点磷酸化tau蛋白及PTEN蛋白水平的变化。结果NG108-15细胞随OA孵育时间的延长逐渐出现细胞胞体变圆,突起回缩,悬浮生长。细胞Ser396位点磷酸化tau蛋白水平于OA作用6 h后显著升高,18 h达高峰,之后逐渐下降,但48 h仍高于基础水平;PTEN蛋白水平于3 h开始上升,18h达高峰,之后逐渐下降,12、18、24 h 3个时间点PTEN蛋白水平显著高于基础水平,36、48 h时间点PTEN蛋白水平与基础值比较差异无显著性。结论OA诱导NG108-15细胞AD样发生中,PTEN蛋白水平可能升高。

蛋白磷酸酯酶-1和-2A抑制剂对NG108-15细胞tau蛋白磷酸化的影响

Alzheimer痴呆(AD)的主要脑病理变化之一为由超磷酸化的tau蛋白组成的神经原纤维缠结(Neurofibrillary tangle,NFT)。AD的Tau蛋白异常磷酸化与蛋白磷酸酯酶(PP)-2A和-1缺陷有关。本文首先用免疫印迹法显示NG含两大组分的tau蛋白。MTT方法观察到PP-2A和PP-1抑制剂冈 田酸(Okadaic acid.OA)处理NG108-14细胞能导致细胞代谢明显下降,同时免疫印迹法显示OA能导致的NG细胞Tau蛋白磷酸化。该研究为建立AD样蛋白磷酸酯酶缺陷引起的tau蛋白磷酸化的细胞模型奠定了基础。

绞股蓝正丁醇部位对NG-108受损细胞的保护作用研究

目的:研究绞股蓝正丁醇部位对体外Aβ25-35造成NG-108细胞损伤的保护作用。方法:采用MTT法,观察直接加药和含药血清对绞股蓝正丁醇部位在体外对Aβ25-35造成NG-108细胞损伤模型的增殖作用。结果:直接加药法表明,绞股蓝正丁醇部位5、10μg/ml浓度对Aβ25-35损伤的NG-108细胞均有明显的增殖作用(P<0.01);含药血清法表明,10%绞股蓝正丁醇部位含药血清对Aβ25-35损伤的NG-108细胞体外生长有促进增殖作用(P<0.05)。结论:绞股蓝正丁醇部位可促进Aβ25-35损伤的NG-108细胞增殖,提示对Aβ25-35造成NG-108细胞损伤有一定的保护作用。

三七总皂苷对Aβ25-35诱导的NG108-15细胞损伤的保护作用

目的 :观察三七总皂苷 (PNS)对由Aβ2 5 -3 5片段神经毒性诱导的NG10 8-15细胞老年性痴呆模型保护作用的影响。方法 :利用MTT法、细胞计数法和细胞形态学检测法观察PNS对NG10 8-15细胞存活率和细胞突起的改变。结果 :PNS能增加Aβ2 5 -3 5片段神经毒性诱导的NG10 8-15细胞存活率、细胞突起率和细胞突起平均长度。结论 :PNS具有减轻细胞对Aβ的神经毒性反应和促进细胞突起生长的作用 ,表明PNS能对老年性痴呆的病理发展有拮抗作用。

大鼠脑原生型一氧化氮合酶在NG108-15细胞中的表达

将大鼠脑原生型一氧化氮合酶（cNOS）全长cDNA定向插入pRC／CMVpolylinker区，获得真核细胞表达载体pCMVcNOS。以pCMVcNOS为模板，cNOS内部基因序列设计的引物进行PCR扩增，证明cNOS基因的存在。经酶切检测进一步证实插入方向完全正确。用磷酸钙共沉淀法和LipofectinTM法将pCMVcNOS转染NG108-15细胞，用含600mg／LG418培养基筛选和增殖抗性单克隆细胞，通过3H-精氨酸转化3H-胍氨酸法测定各细胞克隆可溶相和颗粒相cNOS活性，筛选高效稳定表达的细胞株。从42株抗G418单克隆细胞林中筛选到3株稳定高效表达细胞，在表达的cNOS活性中，可溶相增加更为明显。本实验结果证实，得到高效表达原生型一氧化氮合酶的神经细胞株。

Sh-RNAi对NG108-15细胞膜受体基因TNF-R1的干扰

目的NG108-15细胞膜肿瘤坏死因子(TNF)受体(TNF-R)1在受到基因干扰后,阿黑皮素原(POMC)、神经肽(NP)Y和刺鼠相关肽(AGRP)神经内分泌基因受到干扰的情况。方法采用sh-RNAi基因干扰技术干扰TNF-R1的基因表达,并利用RT-PCR技术检测TNF-R1、POMC、NPY和AGRP基因的表达情况。结果针对TNF-R1受体的膜外半胱氨酸富集区1(CRD1)所设计的sh-1干扰序列,对TNF-R1受体的基因表达具有明显的下调作用,并进而对POMC、NPY和AGRP等神经内分泌基因产生程度不同的下调影响。结论可通过sh-RNAi干扰技术来治疗TNF-α诱发的下丘脑神经内分泌性疾病。

NG108-15细胞的离子通道及其在研究活性物质作用中的应用

由神经母细胞瘤和神经胶质细胞瘤融合杂交的细胞系NG108-15细胞（neuroblastoma×gliomahybridcell），经分化后具成熟神经细胞的特性，存在多种在神经细胞膜发现的离子通道和受体，现已被作为神经细胞模型广泛地应用于神经生物学研究。本文就已在该细胞膜上发现的离子通道的种类及其性质做了介绍，并列举实例，说明它在分析生物活性物质作用机制中的应用。

dbcAMP对NG108-15细胞中谷氨酸转运体及受体表达的影响

目的:探讨谷氨酸转运体及其受体在N6,2-0-二丁酰基腺苷3',5'环单磷酸钠盐(dbcAMP)诱导NG108-15细胞分化前后的表达情况。方法:应用1 mmol/L dbcAMP诱导NG108-15细胞分化,免疫荧光染色检测dbcAMP对NG108-15细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和巢蛋白(nestin)表达影响,RT-PCR技术检测dbcAMP对NG108-15细胞中囊泡膜谷氨酸转运体(VGluTs)、兴奋性氨基酸转运体(EAATs)、离子型谷氨酸受体(iGluRs)和代谢型谷氨酸受体(mGluRs)mRNA表达的影响。结果:dbcAMP处理72 h后NG108-15细胞GFAP和nestin表达下降;dbcAMP增加NG108-15细胞中EAAT1、VGluT2/3、GluR1、mGluR5的mRNA表达水平,而降低EAAT2/3、GluR3/4/7、mGluR2/7/8的mRNA表达水平。结论:dbcAMP处理可引起NG108-15细胞谷氨酸转运体及其受体表达水平发生改变。

5-aza-cdR对神经细胞NG108-15细胞周期的影响

目的:观察DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-aza-cdR)对神经细胞系NG108-15细胞周期的作用,并探讨相关的机制。方法:NG108-15细胞用10μmol/L 5-aza-cdR处理,RTCA分析细胞指数,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,8-PCR检测DNMTs及细胞周期相关基因CCND1和CCND2 mRNA的表达。结果:5-aza-cdR能抑制NG108-15细胞的增殖,5-aza-cdR处理细胞后使细胞周期发生变化,同时使DNMT1的表达降低(P<0.05)而DNMT3A和DNMT3B mRNA表达不变,并且CCND1和CCND2 mRNA表达也不变。结论:10μmol/L 5-aza-cdR可以抑制NG08-15细胞的增殖,其抑制作用可能是通过降低DNMT1表达实现的,这种抑制作用不影响CCND1和CCND2的表达。