疏肝降逆和胃方抑制NGF/TrkA信号通路改善非糜烂性胃食管反流病肝郁气滞证大鼠的中枢敏化作用

目的基于NGF/TrkA信号通路探讨疏肝降逆和胃方(SJHG,由柴胡疏肝散加黄芩、旋覆花、代赭石组成)对非糜烂性胃食管反流病(NERD)肝郁气滞证大鼠的干预作用及分子机制。方法将SD大鼠随机分为4组:空白组、模型组、SJHG组(4.80 g·kg^(-1),以颗粒剂量计)、奥美拉唑组(1.80 mg·kg^(-1)),每组10只。除空白组外,其余各组大鼠均于第2周开始施加慢性随机应激,持续21 d;第3周除空白组外,其余各组大鼠在施加慢性随机应激的同时进行基础致敏(腹腔注射卵清蛋白+氢氧化铝佐剂);基础致敏后给药组大鼠开始按照设定剂量灌胃给药,每日1次,连续2周;第5周进行食管酸灌注实验,灌注完成后处死大鼠并取材。采用透射电子显微镜观察食管黏膜上皮细胞间隙及脊髓突触囊泡数量;Western Blot法检测脊髓组织NGF、TrkA、PSD95蛋白表达水平;qPCR法检测脊髓组织NGF、TrkA mRNA表达水平;免疫组化法检测脊髓组织GluA1蛋白表达;免疫荧光法检测脊髓组织PSD95蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠的食管黏膜上皮细胞间隙明显隙增宽,突触囊泡明显增多,表明NERD肝郁气滞证大鼠模型复制成功;脊髓组织NGF蛋白及mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01),TrkA蛋白表达显著上调(P<0.01);脊髓组织中GluA1、PSD95蛋白表达显著上调(P<0.01),PSD95阳性细胞比率显著升高(P<0.01)。与模型组比较,SJHG组大鼠的食管黏膜上皮细胞间隙恢复,脊髓突触囊泡数量减少;脊髓组织NGF蛋白及mRNA表达显著下调(P<0.01),TrkA蛋白表达明显下调(P<0.05);脊髓组织中GluA1、PSD95蛋白表达显著下调(P<0.01),PSD95阳性细胞比率显著降低(P<0.01)。结论SJHG能够改善NERD肝郁气滞证大鼠内脏超敏反应,降低中枢敏化,其机制可能与抑制NGF/TrkA信号通路有关。

NGF-TrkA信号通路在胃癌进展和预后中的作用及机制研究

神经浸润是胃癌的转移途径之一,常导致局部复发与疼痛,但目前关于胃癌的神经浸润现象及分子细胞机制尚缺乏定论。近年来多项研究表明,神经生长因子(NGF)-酪氨酸蛋白激酶A(Trk A)信号通路在多种肿瘤发生发展过程中发挥重要作用,为此本文对NGF-Trk A信号通路在胃癌进展和预后中的作用与机制作一综述。

受损脊髓神经轴突再生过程中Nogo-A/NgR及NGF/TrkA信号通路的交互作用

背景:生长相关蛋白43是一种胞膜类磷酸蛋白,是神经元再生可塑性的标志蛋白,参与轴突新生与各阶段联系发生的关键过程,对于中枢神经再生具有重要意义。目的:通过观察Nogo-A/NgR信号通路及NGF/TrkA信号通路的交互作用对生长相关蛋白43表达的影响,探讨脊髓损伤后神经再生恢复机制。方法:将120只SD大鼠随机分为5组:NgR阻断组、TrkA阻断组、双阻断剂组、损伤对照组和假手术组。假手术组大鼠进行椎板切除术(不损伤脊髓);其余各组建立脊髓损伤大鼠模型。造模成功后立即注射阻断剂,NgR阻断组大鼠在脊髓损伤后的损伤节段注射25μL NgR阻断剂NEP1-40和25μL生理盐水;TrkA阻断组大鼠在相应部位注射25μL TrkA阻断剂K252a和25μL生理盐水;双阻断剂组大鼠相应部位注射25μL NgR阻断剂NEP1-40和25μL TrkA阻断剂K252a;损伤对照组和假手术组大鼠注射50μL生理盐水。于干预后3,7,14,21 d分别取大鼠脊髓组织,通过免疫组织化学、PCR和Western blot检测大鼠脊髓组织生长相关蛋白43的mRNA及蛋白表达。结果与结论:①免疫组化、PCR及Western blot结果显示,NgR阻断组、TrkA阻断组、双阻断剂组、损伤对照组的生长相关蛋白43 mRNA及蛋白表达水平较假手术组提高;NgR阻断组、双阻断剂组的生长相关蛋白43 mRNA及蛋白表达水平较损伤对照组高,在第7,14天差异有显著性意义(P<0.05或<0.01);TrkA阻断组的生长相关蛋白43 mRNA及蛋白表达水平较损伤对照组降低,在第7,14天差异有显著性意义(P<0.05或<0.01);②结果表明,NgR阻断证明Nogo-A/NgR信号通路可显著提升生长相关蛋白43的表达,促进神经轴突的再生;TrkA阻断证明NGF/TrkA信号通路可降低生长相关蛋白43的表达,抑制神经轴突的再生;NgR和TrkA双阻断结果显示Nogo-A/NgR信号通路及NGF/TrkA信号通路的交互作用可促进生长相关蛋白43的表达。

低频电刺激激活NGF/TRKA信号改善膀胱过度活动综合征患者功能障碍的临床研究

目的研究低频电刺激激活NGF/TRKA信号改善膀胱过度活动综合征患者功能障碍的临床机制。方法筛选从2017年1月至2019年1月在东莞市人民医院妇产科接受治疗的80例膀胱过度活动综合征功能障碍患者作为研究对象。随机分为对照组(常规康复治疗,n=40)和观察组(n=40)。除观察组采用低频电刺激辅助治疗外,两组实验对象医疗环境和康复手段一致,避免干扰因素造成的数据异常或者不准确。通过RNA提取和实时PCR分析检测NGF和TRKA RNA表达;通过蛋白质印迹分析血清中NGF和TRKA蛋白表达情况;通过低频电刺激对观察组患者进行辅助电疗;通过膀胱功能检测评定患者膀胱功能恢复情况。结果与对照组膀胱内压(19.36±3.52)mmH2O,排尿次数(3.37±0.01)天/次,单次排尿量(168.37±6.62)mL相比,观察组(31.25±2.16)mmH2O,(6.72±0.03)天/次,(234.31±5.56)mL升高,差异有统计学意义(P<0.05);在NGF和TRKA蛋白表达上,观察组(3.28±0.31,3.16±0.15)较对照组(1.21±0.24)(1.05.±0.17)升高,比较有统计学意义(P<0.05);在NGF和TRKAMRNA表达上,观察组(2.67±0.21,2.43±0.11)较对照组(0.98±0.05,1.01±0.03)升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低频电刺激可以激活NGF/TRKA信号通路,改善膀胱过度活动综合征患者功能障碍。

基于NGF-TrkA通路研究电针疗法治疗粪失禁兔动物模型的作用机制

目的:基于神经生长因子(NGF)-酪氨酸激酶受体A(TrkA)信号通路研究电针疗法治疗粪失禁兔动物模型的作用机制。方法:新西兰兔30只随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只,采用射频消融法制备粪失禁兔动物模型,造模成功后对照组和模型组不作任何干预,治疗组采用电针治疗。测定各组新西兰兔肛门静息压,采用HE染色观察各组肛门括约肌组织形态学变化,采用Western Blot检测肛门括约肌组织中NGF、TrkA蛋白表达量。结果:模型组新西兰兔肛门静息压显著低于对照组(P<0.05);治疗组新西兰兔肛门静息压显著高于模型组(P<0.05);治疗组新西兰兔肛门静息压显著低于对照组(P<0.05);模型组新西兰兔肛门括约肌组织中NGF、TrkA蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05);治疗组新西兰兔肛门括约肌组织中NGF、TrkA蛋白表达量显著高于模型组(P<0.05);治疗组新西兰兔肛门括约肌组织中NGF、TrkA蛋白表达量显著高于对照组(P<0.05);HE染色显示,治疗组新西兰兔肛门括约肌组织形态结构较模型组明显改善,括约肌全层变厚,固有层结缔组织变薄,肌纤维变粗并趋于完整,肌纤维数量增多,横纹肌致密程度增加。结论:电针疗法可能通过激活NGF-TrkA信号通路对粪失禁兔动物模型起到改善作用,这可为临床治疗大便失禁提供理论依据。

电针通过调控NGF/TrkA信号通路改善脑缺血大鼠学习记忆障碍的研究

目的:探讨电针百会、大椎穴促进脑缺血大鼠学习记忆功能的可能机制。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为3组,即假手术组,模型组及电针组。采用永久性双侧颈总动脉结扎(permanent bilateral common carotid artery occlusion, BCCAO)模型。电针组造模后第二天开始行百会、大椎穴电针治疗,每天1次,每次20min,共28天。采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆功能,免疫荧光染色观察海马神经元存活情况,蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测海马组织神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、酪氨酸蛋白激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)及磷酸化酪氨酸激酶A(phosphorylated-tyrosine kinase A,p-TrkA)蛋白的表达情况。结果:模型组大鼠海马神经元标志物NeuN阳性细胞较假手术组显著减少(P<0.01),电针组海马神经元标志物NeuN阳性细胞较模型组显著增加(P<0.01)。Morris水迷宫结果显示与假手术组相比,模型组大鼠的平均潜伏期明显延长(P<0.01),穿过平台次数显著减少(P<0.01)。与模型组相比,电针组大鼠的平均潜伏期明显缩短(P<0.01),穿过平台次数显著增加(P<0.05)。WB结果显示与假手术组相比,模型组大鼠海马组织NGF和p-TrkA蛋白表达量显著下降(P<0.01),而电针组大鼠海马组织NGF和p-TrkA蛋白表达量比模型组增加(P<0.01),各组间TrkA蛋白表达量没有显著性差异(P>0.05)。结论:电针可以改善脑缺血大鼠学习记忆功能障碍,电针发挥作用的机制可能与激活NGF/TrkA信号通路有关。