NGFI-B在应激损伤心肌细胞中的亚细胞定位及其生物学效应

目的:观察应激条件下心肌细胞中神经生长诱导蛋白质-B(NGFI-B)的表达和亚细胞定位的变化,为揭示应激机体心肌损伤的病理学机理提供科学依据。方法:建立心肌细胞应激损伤的离体细胞模型;采用Western blot方法和细胞免疫荧光法观察NGFI-B在应激心肌细胞中的亚细胞定位;采用流式细胞术观察离体心肌细胞的凋亡率;采用Western blot法测定应激心肌细胞中细胞色素C(Cyt C)在胞浆和线粒体中的含量。结果:应激机体心肌细胞线粒体中NGFI-B蛋白含量显著升高,NGFI-B发生向线粒体的转位,促进心肌细胞线粒体Cyt C释放及心肌细胞凋亡;加入核输出抑制剂来普霉素B(LMB)后,NGFI-B的核输出受到阻抑,应激心肌细胞中NGFI-B滞留于胞核,不发生向线粒体的转位,应激心肌细胞中线粒体Cyt C释放及心肌细胞凋亡均受到阻抑。结论:应激诱导心肌细胞中NGFI-B向线粒体转位,并继而活化细胞凋亡的线粒体通路,引起心肌细胞凋亡。

应激心肌细胞中NGFI-B转位至线粒体的氨基酸序列研究

目的探讨应激心肌细胞中NGFI-B发生线粒体转位的必需氨基酸序列,为揭示应激机体心肌损伤的病理学机理提供科学依据。方法建立心肌细胞应激损伤的离体细胞模型;构建NGFI-B缺失突变体与GFP的融合表达载体,分别命名为Δ1-pEGFP-N1(仅有N端152个AA的NGFI-B)和Δ2-pEGFP-N1(缺失N端152个AA的NGFI-B),并导入心肌细胞,采用细胞免疫荧光法观察其在应激心肌细胞中的亚细胞定位,采用流式细胞术观察离体心肌细胞的凋亡率。结果应激条件下,Δ1-pEGFP-N1转染心肌细胞后,发生向线粒体的转位,Δ2-pEGFP-N1转染心肌细胞后,仍滞留于核。Δ1-pEGFP-N1转染心肌细胞后,能显著降低应激引起的心肌细胞凋亡,Δ2-pEGFP-N1转染心肌细胞后,对应激引起的心肌细胞凋亡没有显著的保护作用。结论 NGFI-BN端的152个氨基酸对应激心肌细胞中NGFI-B发生线粒体转位进而导致细胞凋亡发挥重要作用。

NGFI-B在大鼠抗胸腺细胞血清性肾炎模型肾组织的表达

目的:观察NGFI-B mRNA在大鼠抗胸腺细胞血清性肾炎(anti-thymocyte serum induced nephritis,AT- SN)不同发病时相肾组织的表达水平,从基因层面上探讨ATSN大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cell,MC)凋亡的可能原因。方法:复制ATSN动物模型,应用RT-PCR分析NCFI-B的表达水平。结果:应用RT-PCR检查,结果显示,实验40min,NGFI-B mRNA表达显著高于对照组,且实验40min,NGFI-B mRNA水平较5d时明显增多。结论:NGFI-B基因表达上调可能与肾小球MC的早期凋亡存在一定的联系。