NGX6转染鼻咽癌细胞对表达血管内皮生长因子-C的影响

目的已经发现鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者鼻咽部组织中NPC相关基因NGX6(nasopharyngeal carcinom a associatedgene6)与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-C的表达有相关性。文中通过实验研究NPC发展过程中NGX6与VEGF-C的关系。方法利用Westernblot方法检测VEGF-C在转染NGX6的NPC细胞组和对照组中的表达,比较其差异。结果与空白载体转染的NPC细胞中表达的VEGF-C相比,转染NGX6的NPC细胞中VEGF-C表达下调。结论 NGX6可能对VEGF-C的表达存在着抑制作用,从而在肿瘤侵袭转移中发挥抑制作用。

血管内皮生长因子-C基因转染对Tca8113细胞转移能力影响的研究

目的 研究血管内皮生长因子_C(VEGF_C)对鳞癌细胞淋巴道转移能力的影响 ,以探讨其在口腔黏膜鳞癌淋巴道转移机制中的作用。方法 用本课题组前期建立的VEGF_C高表达舌癌细胞株 ,以裸小鼠皮下接种构建动物肿瘤模型 ,观察VEGF_C高表达对移植瘤的生长和颈淋巴转移的影响。结果 VEGF_C高表达移植瘤实验组的颈淋巴结转移率高于对照组 ,但实验组与对照组的移植瘤原发灶生长速度没有明显差异。结论 VEGF_C对舌鳞癌的淋巴道转移有相对特异的作用 。

外源性反义血管内皮生长因子-C基因稳定转染对人胃癌细胞SGC-7901体外生长的影响

目的:观察以pCI-neo为载体的血管内皮生长因子-C(Vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)反义基因转染的人胃癌细胞SGC-7901中VEGF-C蛋白的表达,并研究其对人胃癌细胞体外生长的影响。方法:应用重组质粒pCI-neo-anti VEGF-C和pCI-neo空载体质粒,以脂质体转染法转染体外培养的人胃癌细胞株,以未转染组为对照,经G418筛选抗性克隆,扩大培养后,再用免疫组化和Western-blot分析VEGF-C基因及蛋白的表达,最后用MTT法分析其对细胞生长的抑制作用。结果:免疫组化和Western-blot均显示pCI-neo-anti VEGF-C转染组无VEGF-C mRNA及其蛋白的表达,MTT检测表明pCI-neo-anti VEGF-C转染组活细胞数较其它各组均低(P<0.05)。结论:pCI-neo-anti VEGF-C成功转染人胃癌细胞SGC-7901且可封闭VEGF-C mRNA,使已转染pCI-neo-anti VEGF-C的人胃癌细胞VEGF-C蛋白的表达减少,并能抑制胃癌细胞SGC-7901的体外生长,为进一步研究VEGF-C的生物学功能及胃癌的基因治疗研究创造了条件。

人血管内皮生长因子-C基因的体外重组和表达

目的体外重组人血管内皮生长因子-C(VEGF-C)基因,检验其在细胞中的表达。方法以RT-PCR法从人真皮成纤维细胞中克隆VEGF-C基因功能片断的cDNA,制备pcDNA3.1(+)-VEGF-C质粒载体,通过Fugene 6介导转染人成纤维细胞及COS7细胞。RT-PCR及免疫组化法检测VEGF-C基因表达情况。结果从成纤维细胞中克隆得到1 053 bp的VEGF-C基因cDNA,碱基序列与已知的人VEGF-C基因cDNA完全一致。重组pcDNA3.1(+)-VEGF-C质粒所携带的目的基因VEGF-C在细胞中有强表达。结论成功重组了一个pcDNA3.1(+)-人VEGF-C质粒,为进一步研究淋巴水肿的基因治疗提供了物质基础。

VEGF-C基因转染对人乳腺癌MCF-7细胞VEGF-C表达的影响

目的探讨将真核表达载体pcDNA3.1-VEGF-C重组质粒转染入人乳腺癌MCF-7细胞后VEGF-C表达的变化。方法通过脂质体介导方法,将构建好含有VEGF-C的重组质粒转染入人乳腺癌MCF-7细胞中,新霉素(G418)筛选得到稳定转染细胞系,RT-PCR和Western blot方法检测稳定转染后细胞中VEGF-C mRNA和蛋白的表达。结果成功转染并获得稳定高表达VEGF-C的乳腺癌MCF-7细胞系,其转染组VEGF-C mRNA相对吸光度值(12.382±2.183)较空载组(6.039±1.950)显著上调(P<0.01)。Western blot检测转染组VEGF-C蛋白相对灰度值(0.971±0.186)较空载组(0.594±0.196)明显上调(P<0.05)。结论脂质体介导重组质粒pcDNA3.1-VEGF-C转染入人乳腺癌MCF-7细胞中可显著增加VEGF-C表达水平。

血管内皮生长因子-C在胃癌中的表达及其反义基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响

目的:探讨胃癌组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达与肿瘤新生淋巴管形成的关系。观察以pCI-neo为载体的反义血管内皮生长因子-C(Anti-VEGF-C)转染的人胃癌细胞SGC-7901中VEGF-C蛋白的表达,及其对人胃癌细胞生长的抑制作用。方法:取72例胃癌标本的癌旁组织,通过RT-PCR检测VEGF-C的mRNA表达;免疫组化检测VEGFR-3,计算出微淋巴管的密度并行相关统计分析。以脂质体转染法转染既往试验合成的重组质粒pCI-neo-anti VEGF-C到体外培养的人胃癌细胞株,以未转染组为对照,用免疫组化和Western blot分析VEGF-C基因及蛋白的表达,最后用MTT法及流式细胞仪分析其对细胞生长的抑制作用。结果:淋巴结转移阳性组中VEGF-C mRNA阳性表达85.7%,高于阴性组的20.0%(P<0.05);VEGF-C mRNA表达阳性组淋巴管密度6.36±1.66,阴性组3.95±1.52(P<0.05);淋巴结转移阳性组淋巴管密度6.65±1.57,阴性组3.75±1.47(P<0.05)。重组质粒pCI-neo-anti VEGF-C转染体外培养的人胃癌细胞株后,免疫组化和Western blot均显示pCI-neo-anti VEGF-C转染组无VEGF-C mRNA及其蛋白的表达,MTT检测表明pCI-neo-anti VEGF-C转染组活细胞数较其它各组均低(P<0.05)。结论:VEGF-C能促进癌旁微淋巴管增生、提高胃癌侵袭力;反义VEGF-C转染可封闭人胃癌细胞SGC-7901VEGF-C mRNA,减少其VEGF-C蛋白的表达,抑制其体外生长。