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RNA干扰猪NHEJ通路修复因子对HR效率的影响
被引量:
2
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作者
全绒
李国玲
+8 位作者
莫健新
钟翠丽
李紫聪
顾婷
郑恩琴
刘德武
蔡更元
吴珍芳
张献伟
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期749-757,共9页
非同源末端连接(nonhomologous end joining,NHEJ)是动物基因组DNA双链断裂(double-strand break,DSB)修复的优选途径,通过与同源重组(homologous recombination,HR)竞争DSB靶点,进而抑制HR的效率。为提高HR效率,本研究针对猪NHEJ通路...
非同源末端连接(nonhomologous end joining,NHEJ)是动物基因组DNA双链断裂(double-strand break,DSB)修复的优选途径,通过与同源重组(homologous recombination,HR)竞争DSB靶点,进而抑制HR的效率。为提高HR效率,本研究针对猪NHEJ通路修复关键因子PNKP、LIG4和NHEJ1的编码序列,设计并合成相应的靶向小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),组成若干对RNAi(RNA interference)系统,将RNAi系统与报告质粒SSA-GFP reporter、HDR-GFP system和ss ODN-GFP system共转染至猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs),检测敲低上述NHEJ关键修复因子后对HR的影响。RNAi结果显示,针对PNKP、LIG4和NHEJ1设计的si RNA均可显著敲低PNKP、LIG4和NHEJ1基因的表达(P<0.05)。选择干扰效果最好的si RNA与报告载体共转染PFFs,结果表明干扰PNKP基因表达后可显著提高单链退火(single strand annealing,SSA)修复效率、双链或单链DNA介导的同源重组定向修复(homology-directed repair,HDR)效率分别为55.7%、37.4%和73.1%(P<0.05),而干扰LIG4和NHEJ1分别提高双链和单链介导的HDR效率为37.5%和76.9%(P<0.05)。
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关键词
同源重组
RNA干扰
非同源末端连接
PNKP
nhej1
LIG4
下载PDF
职称材料
题名
RNA干扰猪NHEJ通路修复因子对HR效率的影响
被引量:
2
1
作者
全绒
李国玲
莫健新
钟翠丽
李紫聪
顾婷
郑恩琴
刘德武
蔡更元
吴珍芳
张献伟
机构
华南农业大学动物科学学院
广东温氏食品集团股份有限公司
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期749-757,共9页
基金
国家转基因重大专项(编号:2016ZX08006002)和粤西“扬帆计划”博士后人才扶持项目(2016)资助。
文摘
非同源末端连接(nonhomologous end joining,NHEJ)是动物基因组DNA双链断裂(double-strand break,DSB)修复的优选途径,通过与同源重组(homologous recombination,HR)竞争DSB靶点,进而抑制HR的效率。为提高HR效率,本研究针对猪NHEJ通路修复关键因子PNKP、LIG4和NHEJ1的编码序列,设计并合成相应的靶向小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),组成若干对RNAi(RNA interference)系统,将RNAi系统与报告质粒SSA-GFP reporter、HDR-GFP system和ss ODN-GFP system共转染至猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs),检测敲低上述NHEJ关键修复因子后对HR的影响。RNAi结果显示,针对PNKP、LIG4和NHEJ1设计的si RNA均可显著敲低PNKP、LIG4和NHEJ1基因的表达(P<0.05)。选择干扰效果最好的si RNA与报告载体共转染PFFs,结果表明干扰PNKP基因表达后可显著提高单链退火(single strand annealing,SSA)修复效率、双链或单链DNA介导的同源重组定向修复(homology-directed repair,HDR)效率分别为55.7%、37.4%和73.1%(P<0.05),而干扰LIG4和NHEJ1分别提高双链和单链介导的HDR效率为37.5%和76.9%(P<0.05)。
关键词
同源重组
RNA干扰
非同源末端连接
PNKP
nhej1
LIG4
Keywords
homologous recombination
RNA interference
nonhomologous end joining
PNKP
nhej1
LIG4
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
RNA干扰猪NHEJ通路修复因子对HR效率的影响
全绒
李国玲
莫健新
钟翠丽
李紫聪
顾婷
郑恩琴
刘德武
蔡更元
吴珍芳
张献伟
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2018
2
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