NHERF3在肾癌组织中的表达变化及其意义

目的研究NHERF3在肾癌及其癌旁组织中的表达变化,为揭示肾癌组织NHERF3表达变化的临床意义提供线索。方法分别采用免疫组织化学法、Western blotting和RT-PCR方法检测肾癌及其对应癌旁组织中NHERF3蛋白及mRNA的表达,比较二者的差异。结果在癌旁组织中,NHERF3蛋白有较丰富的表达,而在肾癌组织中NHERF3蛋白的表达十分微弱(P<0.01);癌旁组织NHERF3 mRNA表达水平亦明显高于肾癌组织(P<0.05),二者之间的差异均有统计学意义。结论肾癌组织中NHERF3蛋白及mRNA与癌旁组织比较均呈现异常低表达,表明NHERF3基因表达在转录水平受到明显抑制,提示与肾癌NHERF3蛋白缺乏相关的NHERF3功能缺失(loss of function)可能在肾癌发生、发展中起重要作用。

基于SPR技术定量检测肾透明细胞癌组织中NHERF3蛋白水平

目的建立基于表面等离子共振(SPR)技术定量检测肾透明细胞癌组织中钠氢交换调控因子NHERF3蛋白水平的方法。方法将抗NHERF3抗体固定在CM5芯片,将重组NHERF3蛋白(0.78-50 nmol/L)和牛血清白蛋白BSA(3.125-100μmol/L)依次注入芯片表面,通过Biacore分析软件计算NHERF3与其抗体的亲和力。将NHERF3蛋白(0.0625-8μg/ml)依次注入高水平固定抗NHERF3抗体的芯片表面,用结合反应值通过非线性回归法建立NHERF3的标准曲线。将NHERF3蛋白稀释至8μg/ml,重复进样50次,检测方法的可重复性。将20对肾癌和癌旁组织蛋白提取液作为分析物,根据反应值计算NHERF3的浓度并比较肾癌和癌旁组织之间的差异。结果抗NHERF3抗体与NHERF3之间可以发生特异性强相互作用(K D=19.7 nmol/L)。该NHERF3定量检测方法的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为8.12 ng/ml和27.07 ng/ml;50次重复检测的变异系数(CV)为4.25%。肾透明细胞癌组织中NHERF3蛋白的表达水平明显低于癌旁组织[(36.4±54.38)ng/μl vs(155.1±60.47)ng/μl,P<0.001]。结论基于SPR的定量检测方法适用于高通量检测肾透明细胞癌组织中NHERF3的蛋白表达水平。