NHERF4真核表达质粒的构建及其在Caco2细胞中的表达

目的:构建人NHERF4真核表达质粒,转染人结肠癌Caco2细胞,建立能稳定携带NHERF4基因并高表达的Caco2细胞株,为后期相关实验奠定基础。方法:利用真核表达载体pIRES2-ZsGreen1构建人NHERF4cDNA真核表达质粒,脂质体介导质粒pIRES2-ZsGreen1和NHERF4表达质粒pIRES2-ZsGreen1-NHERF4转染人结肠癌细胞Caco2,荧光显微镜观察判断转染结果。G418筛选稳转细胞株,共聚焦免疫荧光观察NHERF4的亚细胞定位表达,蛋白免疫印迹实验观察NHERF4蛋白表达。结果:荧光显微镜观察证实质粒pIRES2-ZsGreen1和NHERF4表达质粒pIRES2-ZsGreen1-NHERF4均成功转染Caco2细胞。蛋白免疫印迹实验证实转染pIRES2-ZsGreen1-NHERF4质粒的Caco2细胞高表达NHERF4蛋白。结论:成功建立稳定表达外源NHERF4蛋白的pIRES2-ZsGreen1-NHERF4Caco2细胞株,为能进一步分析研究NHERF4与MPR2在结肠癌多药耐药机制中的作用奠定了前期实验基础。

SLC26A3与NHERF4在溃疡性结肠炎小鼠肠道组织中的动态表达研究

目的观察分析钠氢转运体调节因子4(NHERF4)和溶质载体26A3(SLC26A3)在小鼠结肠炎模型炎症发展过程中的动态表达,为后期研究溃疡性结肠炎(UC)发病机制提供实验基础。方法以C57BL/6J小鼠为研究对象,采用恶唑酮(OXZ)诱导法制造UC模型,分别在第6、8、10、14天处死小鼠,运用疾病活动指数(DAI)评价小鼠结肠炎严重程度;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测小鼠肠道中SLC26A3及NHERF4的mRNA和蛋白水平变化。结果与同期对照组相比,实验组第8天小鼠肠黏膜中SLC26A3的mRNA量降低(P <0. 05),而NHERF4的mRNA量增高(P <0. 05),结肠炎活动恢复过程中SLC26A3的蛋白表达呈先降低后增高的趋势,与NHERF4的蛋白表达及DAI评分呈负相关性,NHERF4的蛋白表达呈先增高后降低的趋势,与DAI评分变化趋势同步。结论在小鼠结肠炎的进展过程中,SLC26A3变化趋势与NHERF4的变化趋势相反,提示在UC发生发展过程中NHERF4可能参与调节SLC26A3的表达改变,但该结论需要进一步的干预实验进行验证。