温氏土鸡和白洛克鸡胚小肠PepT1和NHEs mRNA表达差异及发育性变化

为研究温氏土鸡和白洛克鸡胚小肠寡肽转运载体PepT1(Solute carrier family 15 member 1)以及Na+/H+交换载体NHE2(Solute carrier family 9 member 2)和NHE3(Solute carrier family 9 member 3)mRNA的表达规律,选取产蛋日龄相近的温氏土鸡和白洛克鸡所产种蛋各96枚,每个品种随机分为6组,每组16枚,在相同的条件下进行孵化。分别在9,12,14,17,19胚龄(E)和出壳当天(DOH),每个品种选取16枚鸡胚,采集小肠样品,采用Real-time RT-PCR方法检测小肠PepT1、NHE2和NHE3 mRNA的相对表达丰度。结果显示:从发育性变化来看,PepT1、NHE2和NHE3mRNA在温氏土鸡和白洛克鸡胚小肠的表达丰度都表现为随着胚龄的增加而上调,19胚龄后上调幅度较大;双因素方差分析表明,PepT1、NHE2和NHE3 mRNA的表达丰度在2个品种间无显著差异,但受发育阶段影响,PepT1 mRNA的表达丰度存在"品种×胚龄"的互作效应(P<0.000 1),NHE2和NHE3 mRNA表达丰度无"品种×胚龄"的互作效应(P>0.05)。说明PepT1、NHE2和NHE3 mRNA表达丰度在温氏土鸡和白洛克鸡胚小肠中具有相同的发育模式,其表达量受发育水平的影响,但品种间差异不显著。

NHEs在腹泻中的研究进展

生理状态下成人肠道每天吸收9 L左右的水和800 Eq的钠,肠道的吸收和分泌的平衡对维持肠道内环境的稳态发挥着重要的作用。当致泻物质,如细菌、病毒和毒素作用肠道时,相关离子通道及转运体的表达和（或）活性就会发生改变,大量的水、电解质在肠腔内聚集,从而形成腹泻。目前认为,肠上皮细胞对Na^＋的吸收可分为3型：电中性、生电性和与有机物质偶联的NaCl吸收。

温氏土鸡和白洛克鸡胚小肠PepT1和NHEs mRNA表达差异及发育性变化

为研究温氏土鸡和白洛克鸡胚小肠寡肽转运载体PepT1(solute carrier family 15 member 1)以及Na+/H+交换载体NHE2(solute carrier family 9 member 2)和NHE3(solute carrier family 9member 3)mRNA的表达规律,选取产蛋日龄相近的温氏土鸡和白洛克鸡所产种蛋各96枚,每个品种随机分为6组,每组16枚,在相同的条件下进行孵化。分别在9(E9)、12(E12)。

基于蛋白质组学探讨Ppp3cb和Ppm1g在NHE1基因敲除模型鼠海马组织中的表达

目的通过NHE1基因敲除模型鼠的海马组织差异蛋白质组学分析,发现并明确Ppp3cb和Ppm1g的表达特征。方法①选取6只2周龄NHE1基因敲除模型鼠作为模型组,同周龄野生型小鼠6只作为对照组,采用琼脂糖凝胶电泳检测其基因型;应用旷场实验和强迫游泳实验对模型组和对照组小鼠进行行为学评估,并按照Racine评分标准对模型鼠进行癫痫发作分级;②通过串联质谱分析技术对模型组和对照组的海马组织进行差异蛋白筛选,基因本体论(Gene Ontology Analysis,GO)分析差异蛋白并进行注释和富集,蛋白网络数据库(search tool for the retrieval of interesting genes,STRING)分析差异蛋白之间的蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI);③应用qPCR和Western blot检测Ppp3cb和Ppm1g的转录和翻译水平,应用免疫组织化学技术分别观察其在组织中的表达量。结果①模型组小鼠NHE1基因未见表达,旷场实验中模型鼠的运动总距离较对照组减少(P=0.0073),跨越的格子数比对照组显著减少(P<0.0001)。强迫游泳实验结果显示,模型鼠不动的时间明显延长(P<0.0001);②以表达倍数(FC)≥1.2倍且P<0.05为筛选标准,检测到海马组织中845个差异表达的蛋白质点,其中有9个蛋白表达上调,7个蛋白表达下调。其中Ppp3cb下调,Ppm1g上调。GO功能注释结果表明,NHE1敲除后,分子功能(MF)富集在蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶活性的差异最显著,细胞成分(CC)富集在质膜部分的差异蛋白数量最多,生物过程(BP)富集在负向调节生物过程、免疫系统过程的差异蛋白数量最多。STRING分析显示差异蛋白Ppp3cb和Slc9a1直接作用,Ppm1g通过Ppp3cb和Slc9a1间接作用,Ppp3cb和Ppm1g之间相互作用。③Ppp3cb的转录和翻译水平减少,在组织中的表达量下降,而Ppm1g转录和翻译水平增加,在组织中的表达量上升(P<0.05)。结论本研究确定了NHE1基因敲除小鼠海马组织中差异蛋白Ppp3cb表达下调,而Ppm1g表达上调,为进一步研究Ppp3cb和Ppm1g参与癫痫发病机制提供了依据。

肉鸡肠道NHE2 mRNA表达的组织特异性与发育性变化

选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre（AA）肉雏鸡120羽,随机分为4个重复,采用相对定量RT-PCR方法,以30日龄AA肉鸡肠道RNA为模板,研究肉鸡肠道钠/氢交换载体2（Sodium hydrogen exchanger 2,NHE2）mRNA表达的组织特异性;以AA肉鸡十二指肠和空肠RNA为模板,研究肉鸡肠道NHE2mRNA表达的发育性变化。结果显示：①AA肉鸡十二指肠和空肠NHE2 mRNA的表达丰度显著高于回肠和结直肠（P〈0.05）,而十二指肠和空肠之间、回肠和结直肠之间无显著差异（P〉0.05）;②AA肉鸡NHE2 mRNA在十二指肠及空肠中的表达具有相同的发育模式,2～16日龄升高,30～44日龄下降,55日龄略微回升;在16和30日龄时的表达丰度显著高于2、44和58日龄（P〈0.05）。以上结果说明：AA肉鸡肠道近端NHE2 mRNA的表达丰度显著高于远端（P〈0.05）。AA肉鸡十二指肠及空肠NHE2 mRNA的表达具有相同的发育模式,表明NHE2mRNA表达受到发育阶段的调控,且在十二指肠和空肠间具有稳定性。

补中益气汤对脾虚泄泻大鼠SGLT1/NHE3通路的影响

目的探讨补中益气汤对脾虚泄泻大鼠SGLT1/NHE3通路的影响。方法采用"大黄+利血平+控制饮食"的多因素法建立脾虚泄泻大鼠模型,连续造模15 d;大鼠随机分为正常组,模型组,补中益气汤低、中、高剂量组(4.67,9.35,18.70 g·kg-1),连续给药15 d;观察并计算大鼠腹泻指数;测定大鼠肠黏膜Na+-K+ATP酶的活性;Western Blot法检测钠依赖性葡萄糖转运体(SGLT1)、葡萄糖转运体2(GLUT2)、钠-氢交换体3(NHE3)、p38MAPK、p-p38MAPK、MAPKAPK2、p-MAPKAPK2、Akt2、p-Akt2、Ezrin、p-Ezrin蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠小肠黏膜Na^+-K^+ATP酶活性显著降低(P<0.01),小肠黏膜中SGLT1、GLUT2、NHE3、p-p38MAPK、p-MAPKAPK2、p-Akt2、p-Ezrin蛋白相对表达量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,补中益气汤中、高剂量组大鼠在第25,30天的腹泻指数明显下降(P<0.05,P<0.01),补中益气汤高剂量组大鼠小肠黏膜Na^+-K^+ATP酶活性显著提高(P<0.05),补中益气汤中、高剂量组的SGLT1、GLUT2蛋白相对表达量及补中益气汤高剂量组的NHE3、p-MAPKAPK2、p-Akt2、p-Ezrin蛋白相对表达量显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论通过提高SGLT1蛋白的表达,促进p38MAPK/Ezrin通路中蛋白的磷酸化,可能是补中益气汤治疗脾虚泄泻的机理之一。

miRNA-27b抑制PPARγ促进乳腺癌细胞增殖

目的:通过体外实验研究过表达miR-27b对乳腺癌细胞系MCF-7增殖方面的影响,并探讨miR-27b的作用机制。方法:通过脂质体介导,将miR-27b mimics转染入MCF-7细胞,用荧光定量PCR检测细胞miR-27b的表达,用Western Blot检测PPARγ与NHE1的表达情况,再通过CCK8实验观察细胞增殖能力的改变。结果:MCF-7转染miR-27b mimics后,miR-27b的表达明显上调(P<0.05)。在蛋白水平,过表达miR-27b后,PPARγ的表达明显下调,而NHE1的表达明显上调。CCK8结果显示过表达miR-27b,细胞增殖作用增强。结论:miR-27b可抑制MCF-7细胞中靶基因PPARγ的表达,上调NHE1的表达水平,并且促进细胞增殖。

猪肠道钠氢交换载体(NHE3)mRNA表达的肠段特异性和发育性变化

旨在探讨猪肠道钠氢交换载体(NHE3)mRNA表达的肠段特异性和发育模式,为NHE在养猪生产中的应用提供理论依据。选取遗传背景相同的1、7、26、30、60、90和150 d蓝塘和长白公猪各5头,测体质量后屠宰,取十二指肠、空肠、回肠和结肠组织样品;以18S rRNA为内标基因,用实时荧光定量PCR法检测NHE3 mRNA在60 d长白猪表达的肠段特异性及其在蓝塘和长白猪肠道表达的发育模式。结果显示:长白猪肠道NHE3 mRNA的表达丰度为结肠、十二指肠、空肠和回肠依次降低,且结肠显著高于空肠和回肠(P<0.05)。不同猪种NHE3mRNA在十二指肠和空肠的表达模式相似;蓝塘和长白猪NHE3 mRNA的表达丰度分别在7和30 d(十二指肠)、7和26 d(空肠)达最高水平(P<0.05)。不同猪种结肠NHE3 mRNA的表达模式不同,分别与其在十二指肠和空肠的发育呈现不同的模式;蓝塘猪结肠NHE3 mRNA的表达丰度在26、90和150 d时显著低于长白猪(P<0.05)。以上结果说明,猪肠道NHE3 mRNA的表达受到发育阶段、品种和肠段的调控,且在十二指肠和空肠间具有品种稳定性。

NHE-1反义基因对胃癌细胞的酸化作用及其意义

目的探讨Na+-H+交换泵-1(Na+-H+exchanger1,NHE-1)反义基因转染对人胃癌细胞内pH值(intracellu-larpH,pHi)的调节作用及其在肿瘤基因治疗中的价值。方法构建人NHE-1基因反义真核表达载体,采用脂质体法将其转染至SGC-7901胃癌细胞中,采用荧光探针检测转染前后细胞内pH值的变化以及对细胞增殖和凋亡的影响。结果转染反义基因的细胞pHi明显降低,增殖能力降低,细胞凋亡率增加。结论NHE-1基因的表达在肿瘤细胞pHi及增殖和凋亡调节中起重要作用。

功能性腹泻脾虚证模型大鼠肠组织钠离子通道蛋白的变化

目的观察功能性腹泻脾虚证模型大鼠肠组织NHE3、Na+-K+-ATPase、ENaC等离子通道蛋白的表达变化。方法采用随机数字表法将24只3周龄雄性Wistar大鼠分为正常组和模型组,利用小平台站立法联合高乳糖饲料喂养建立功能性腹泻脾虚证模型,造模14 d后取材,采用Western blot检测肠组织中的各指标蛋白表达变化。结果造模后1 d,两组大鼠体重均显著重于造模前1 d(P<0.01),但模型组显著轻于正常组(P<0.01)。模型组大鼠腹泻率为100%。造模后,模型组大鼠结肠NHE3、Na+-K+-ATPase相对表达量均低于正常组(P<0.05或P<0.01),NHERF2、PKAR2相对表达量均高于正常组(P<0.05或P<0.01)。结论Na+-K+-ATPase、NHE3等Na+通道蛋白的表达下调可能是功能性腹泻脾虚证发生的分子生物学基础,值得进一步研究证实。

过表达NHE1通过上调钙蛋白酶活性降低RAW264.7细胞ABCA1蛋白表达

目的探讨过表达钠氢交换体1(NHE1)对RAW264.7细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达的影响。方法采用Ad NHE1腺病毒感染RAW264.7细胞,Western blot法检测NHE1-EGFP融合蛋白的表达,激光共聚焦显微镜技术检测NHE1-EGFP融合蛋白细胞内定位,酸负载p H回复检测NHE1活性,Western blot法检测NHE1-EGFP融合蛋白对RAW264.7细胞ABCA1蛋白水平及钙蛋白酶(calpain)活性的影响,加入calpain抑制剂N-乙酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酰-L-正亮氨酸(ALLN),Western blot法检测肝脏X受体激动剂TO-901317诱导ABCA1蛋白表达水平的影响。结果 Ad NHE1腺病毒感染RAW264.7细胞后,高表达NHE1-EGFP融合蛋白,定位在细胞质及细胞膜。NHE1-EGFP融合蛋白可降低ABCA1蛋白的表达水平并提高calpain活性,而calpain抑制剂ALLN能阻断ABCA1蛋白表达水平降低。结论 NHE1过表达通过上调calpain活性而降低ABCA1蛋白表达水平。

NHE1在心肌肥大,心肌纤维化和心衰中的作用

心肌肥大、心肌纤维化是多种慢性心衰的共同病理学改变,钠氢交换体1(NHE1)是多种因子介导的心肌肥大和心肌纤维化的信号转导通路上的共同途径,直接参与了其病理生理学过程,这些因子包括多种生长因子、肾上腺素能受体激动剂、血管紧张素、内皮素、凝血酶以及直接作用于细胞上的机械性张力。从理论推理和实验学证据两方面研究NHE1参与心肌肥大、纤维化和心衰的机制具有重要的意义。

肝癌组织中NHE1蛋白的表达及其临床意义

目的:研究人原发性肝癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)中的钠氢交换蛋白1(Na+/H+ exchanger1,NHE1)的表达以及与肝癌侵袭转移的关系,进一步探讨其在临床中的意义。方法:用免疫组织化学方法检测人HCC组织、癌旁组织中NHE1蛋白的表达水平,分析人HCC组织中NHE1蛋白的表达情况与临床病理因素之间的相关性。结果:人HCC组织中NHE1蛋白的表达显著高于癌旁组织中NHE1蛋白的表达(t=17.821,P<0.05),其阳性率也显著高于癌旁组织(χ2=42.507,P<0.05)。NHE1蛋白的表达与组织学分级、临床TNM分期以及有无门静脉癌栓密切相关(P<0.05),而与HCC患者的年龄、肿瘤大小、肿瘤个数、血清AFP水平临床病理学指标无关(P>0.05)。结论:NHE1蛋白在人HCC组织中表达水平升高,可能与HCC的恶性程度、疾病的进程以及人HCC的侵袭转移有密切的关系。

白术内酯Ⅰ通过SGLT1/NHE3通路治疗腹泻的机制研究

目的:探讨白术内酯Ⅰ通过SGLT1/NHE3通路治疗腹泻的机制。方法:Caco-2细胞建立体外肠道吸收模型,将细胞分别设为空白对照组、抑制剂(SGLT1抑制剂根皮苷、P38MAPK抑制剂SB203580、Ezrin抑制剂NSC668394)组、白术内酯Ⅰ组、白术内酯Ⅰ+抑制剂组,采用2-NBDG测定白术内酯Ⅰ对Caco-2细胞葡萄糖摄取的影响;Western Blot法检测SGLT1、p-P38MAPK、p-MAPKAPK2、p-AKT2、p-Ezrin、MLCK、p-MLC、NHE3等蛋白表达,荧光定量PCR检测SGLT1、MLCK、NHE3 mRNA表达。结果:白术内酯Ⅰ促进Caco-2细胞葡萄糖摄取,上调SGLT1、NHE3、MLCK的表达;此外,白术内酯Ⅰ增加了MLCK和P38MAPK/Ezrin信号通路中的蛋白磷酸化。结论:白术内酯Ⅰ可激活SGLT1促进Caco-2细胞葡萄糖摄取,通过P38MAPK/Ezrin信号通路上调其下游靶点NHE3和MLCK促进水钠吸收是其治疗腹泻的机制之一。

钠氢交换蛋白1在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

目的观察钠氢交换蛋白1(Na+/H+,exchanger 1,NHE1)在人胃癌组织和胃癌细胞中的表达变化,以及对SGC-7901胃癌细胞增殖的影响。方法采用实时逆转录聚合酶链式反应(real time PCR,RT-PCR)和免疫印迹(Western Bloting)技术检测比较NHE1在正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞株GES-1和胃癌细胞株SGC-7901中的表达;用不同浓度的NHE1特异性阻断剂[5-(N-乙基-N-异丙基)]阿米洛利[5-(N-ethyl-N-isopropyl)amiloride(EIPA)]处理胃癌SGC-7901细胞24h,MTT法检测其对SGC-7901细胞增殖的影响。结果 NHE1在人正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞和胃癌细胞中均有表达,但在人胃癌组织和SGC-7901胃癌细胞中,其mRNA和蛋白表达水平均明显增高(P<0.05);EIPA10μm/mL,20μm/mL,30μm/mL处理,均能抑制胃癌SGC-7901细胞的过度增殖(P<0.05),且呈现良好的剂量-效应关系。结论 NHE1mRNA和蛋白表达水平在胃癌中表达显著升高;NHE1特异性阻断剂EIPA能抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,NHE1的改变可能与胃癌细胞的增殖密切相关。

钠氢交换体及其抑制物在急性肺损伤中的作用

目的 探讨钠氢交换体及其抑制物在急性肺损伤中的作用。方法 应用内毒素 (LPS ,5mg/kg)复制大鼠急性肺损伤模型。将 2 1只SD大鼠随机分成三组 :正常对照组 (NS组 ) ;内毒素组 (LPS组 ) ;LPS +DMA组 (L&D组 ) ,该组以钠氢交换体抑制物DMA(5mg/kg)预处理。大鼠均于 5小时后处死。然后测定各组的肺系数 (LI)及血浆和支气管肺泡灌洗液 (BALF)中的TNF、ET - 1、NO的浓度变化。结果 L&D组肺系数及血浆和BALF中的TNF、ET - 1、NO浓度的增加 ,均明显低于LPS组(P <0 0 1)。结论 NHE抑制物对急性肺损伤具有保护作用 。

善胃Ⅰ号方对胃癌前病变大鼠胃粘膜NHE1蛋白及胃内pH值的影响

目的:通过观察善胃Ⅰ号方对胃癌前病变模型大鼠胃粘膜NHE1蛋白及胃内pH值的影响,从胃内环境角度,探讨该方干预胃癌前病变的作用机制。方法:将80只健康Wistar大鼠随机分为4组,即正常对照组、模型对照组、阳性药物组和善胃Ⅰ号方组,每组20只,造模24周后开始给予药物干预,给药6周后,采用免疫组化法检测大鼠胃粘膜NHE1蛋白的表达水平,高精度酸度计测定大鼠胃液pH值的变化。结果:善胃Ⅰ号方组NHE1蛋白的阳性表达率及胃液pH值较模型对照组及阳性药物组均明显降低(P<0.05)。结论:善胃I号方可能通过抑制胃癌前病变模型大鼠胃粘膜NHE1蛋白的表达,降低胃液pH值,有效维持胃内酸性环境,从而起到干预胃癌前病变发展的作用。

Ⅰ型钠氢交换蛋白调节细胞内酸碱平衡对胃癌细胞迁移、侵袭的影响

目的观察I型钠氢交换蛋白(NHE1)通过调控胃癌细胞SGC-7901内酸碱值(p H)对其迁移、侵袭的影响。方法采用共聚焦显微镜观察比较用特异性阻断剂5-(N-乙基-N-异丙基)阿米洛利(EIPA)阻断胃癌细胞SGC-7901的NHE1功能前后胞内p H值的变化,划痕实验观察细胞迁移能力的改变,transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力的改变。结果共聚焦实验发现对照组细胞内p Hi为(7.2±0.12),EIPA阻断剂组(5μm)为(7.01±0.23),EIPA阻断剂组细胞内的p H值明显降低(P<0.05);进一步划痕和侵袭实验证明加入不同浓度的EIPA(5、10和20μmol)后均能有效地抑制胃癌细胞SGC-7901的迁移和侵袭能力(P<0.05,P<0.01),并且抑制的程度与EIPA的浓度呈剂量依赖性。结论阻断NHE1可以降低胃癌细胞p H值,进而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力。

NHE基因家族的研究进展

Ｎａ＋／Ｈ＋交换泵（Ｎａ＋／Ｈ＋ｅｘｃｈａｎｇｅｒ，ＮＨＥ）是存在于所有脊椎动物细胞中的重要跨膜蛋白，该蛋白质涉及细胞的多种功能，包括细胞内ｐＨ值调节、细胞体积的控制以及离子转运等．目前已克隆了五个亚型ＮＨＥ的ｃＤＮＡ，它们构成了脊椎动物细胞离子转运泵的一个基因家族．这五个亚型的表达水平及活性可受多种因素的调节．在肿瘤、高血压及糖尿病等疾病中，已发现ＮＨＥ１亚型的表达水平和活性显著增高．因此，研究ＮＨＥ１的转录及活性调节机制，将可能为这些疾病的诊治提供新的手段．