SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VP1及其C端的表达、纯化和反应原性分析

目的：表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端，进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法：以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VPl编码区的重组克隆载体为模板，设计特异性引物，扩增VPl基因及其C端编码区，然后将该其分别克隆至原核表达载体pET-30a（＋）中，转化大肠杆菌工程菌株BL21（DE3）plysS，经IPTG诱导，以金属离子螯合层析法对表达的VPl、VP1C端融合蛋白进行纯化，经Westernblot对其反应原性进行分析。用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体，以ELISA方法测定抗体效价。结果：实现了SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端的高效表达，表达产物主要以包涵体的形式存在。SDS—PAGE显示纯化的目的蛋白分别在相对分子质量35000和19000处有单一目的条带，具有较高的纯度。Western blot结果显示，纯化的VP1及其C端均可与牛SAT2型FMDV阳性血清反应，而与阴性对照血清无交叉反应。结论：用纯化的VPl及VP1C融合蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1：12800以上，具有较高的特异性。

不伴MBTPS2与SAT1基因突变的棘状秃发性毛囊角化病1例

目的检测1例散发性棘状秃发性毛囊角化病患者MBTPS2基因及SAT1基因突变。方法提取患者及其双亲与100名健康志愿者外周血基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增MBTPS2基因与SAT1基因的全部外显子及相邻的内含子片段,纯化后对PCR产物进行直接测序。结果该例患者及其双亲在MBTPS2基因与SAT1基因未发现任何突变。讨论该例患者未检测到目前已知棘状秃发性毛囊角化病所有致病基因的任何突变,可能存在未知的致病基因突变。

斑马鱼sat1.a突变体的鉴定

目的在我们的前期研究工作中,通过Tol2转座子介导的插入突变,筛选到了一批组织特异性表达绿色荧光蛋白GFP的斑马鱼品系。其中一个品系Tol2:20141221t的GFP在神经系统中表达,但还没有鉴定到Tol2转座子插入到基因组什么位置,造成了哪个基因的突变。本文的主要研究目标就是对这一由Tol2转座子插入诱导的斑马鱼突变品系进行鉴定。方法使用交错式热不对称PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)鉴定Tol2转座子插入的基因组位置;利用原位杂交检测被突变的基因的时空表达是否与该品系GFP表达具有一致性;筛选鉴定纯合体突变体,并进一步分析该基因突变造成的发育缺陷。结果在该品系中,Tol2转座子插入到了亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶1a(spermidine/spermine N1-acetyltransferase 1a,sat1.a)的第八个内含子区域,致使sat1.a基因转录提前终止。我们筛选到了sat1.a纯合突变体,但是没有检测到明显的发育缺陷。结论筛选鉴定的Tol2转座子介导的斑马鱼sat1.a突变体没有明显的发育缺陷,但可以作为研究神经系统发育的有力工具。

利用CRISPR/Cas9系统建立内生链霉菌SAT1的基因簇敲除体系

hyBl(hygB-like)基因簇是内生链霉菌SAT1 中的次级代谢基因簇,经分析它与潮霉素B 基因簇具有52%的相似性,可能在SAT1 抑制栗疫菌(Cryphonectria parasitica)的过程中发挥主要作用。为了深入研究该菌的抑菌机制和hyBl 基因簇的功能,以hyBl 为目标,利用CRISPR/Cas9 技术建立SAT1 的基因簇敲除体系。在实验过程中,通过protospacer 的筛选、敲除载体的构建、接合转移供体菌、Ca2+和Mg2+的选择以及接合时间等多个条件的探索,建立了SAT1 的基因簇敲除体系。最终以E. coli ET12567(pUZ8002/pCRISPomyces2-CB)为供体菌,在MS 培养基(含10 mmol Mg2+)上接合16-18 h,成功获得突变株SAT1△ hyBl(缺失14 kb 的hyBl 基因簇)。突变株对栗疫菌的抑制带宽较野生株降低了77%,这说明该基因簇指导合成的次级代谢产物在抑制栗疫菌方面具有重要的功能。本研究证明了利用CRISPR/Cas9 系统可以对内生链霉菌SAT1 进行基因簇编辑,也为深入研究该菌的抑菌机制、基因工程法验证未知基因簇功能提供了良好的技术支撑。

RSAT： Windows Server 2008 Remote Server Admin Tools Windows Vista SP1的管理增强

微软Windows Vista管理部门的高级产品经理为你介绍Windows Server 2008R SAT for WindowsVistaSP1的新特性。并着重强调了RSAT与组策略的集成。

“天巡一号”微小卫星数据综合系统设计与在轨性能评估

数据综合系统(Data integrated system,DIS)作为星上电子系统和信息管理的核心,在卫星研制和运行管理中,起着非常重要的作用。根据"天巡一号"(NHTX-1)微小卫星的任务需求,对数据综合系统进行硬件及软件设计。着重描述了VxWorks操作系统的使用、整星安全模式、计算机板故障监测和计算机板主备份自主切换等关键技术及创新设计。另外对卫星在轨期间数据综合系统的运行情况进行统计分析,结果表明该系统工作稳定,功能性能指标均满足设计要求。

基于VxWorks的星务管理软件设计与在轨验证

结合天巡一号(NHTX-1)微小卫星的任务特点,介绍了基于VxWorks操作系统的实时多任务星务管理软件的设计步骤,重点描述了模块、任务分解,多任务优先级分配,中断设计,集中式相对程控技术,模式定义与模式切换等研究,并根据卫星在轨工作状态对星务管理软件的运行情况进行分析,结果表明该星务管理软件具有很高的安全可靠性,使卫星完成了预定任务。

基于和声搜索算法求解组合优化问题

为了能够应用和声搜索算法(HSA)求解组合优化问题,基于HAS的三种操作的离散化实现提出了一种二进制和声搜索算法(BHSA),并将BHSA用于求解著名的k-可满足性(k-SAT)问题和0-1背包问题,通过与粒子群优化(BPSO)和遗传算法(GA)的实例计算对比验证了新算法的可行性与有效性。

MAX-MU(2)的结构和复杂度

SAT问题(可满足性问题)是理论计算机科学的核心问题,研究SAT问题的方法很多,利用极小不可满足公式的性质来研究SAT问题是近几年的一个热点研究方向.文章主要利用(1,*)-消解和分裂方法研究了差为2的极大极小不可满足公式集(MAX-MU(2))的结构和复杂度.

一种布尔公式的代数逻辑约化新方法

布尔可满足问题是最早被证明的NP完全问题之一,1-in-3-SAT问题是一个NP完全的布尔可满足子类问题。1-in-3-SAT的计算复杂度取决于对应公式的变量以及子句的个数。将1-in-3公式归约为一个变量数或者子句数更少的1-in-3公式,是提高1-in-3-SAT问题求解效率的一个关键。基于一个新的范式形式——XCNF,针对1-in-3-SAT问题提出一种新的代数逻辑约化方法,用于在多项式时间内约减一个1-in-3公式的变量数和子句数。所提算法的主要思想为:首先将1-in-3公式转化为XCNF公式,然后尝试找出XCNF公式中的X-纯文字,并利用X-纯文字法则对1-in-3公式中相应的布尔变量赋值,最后得到一个约减公式,该约减公式与原公式的1-in-3可满足性等价。

铁死亡相关基因SAT1在脑胶质瘤中的治疗意义

脑胶质瘤是指起源于脑神经胶质细胞的肿瘤,占所有原发性中枢神经系统肿瘤的40%~60%,是最常见的颅内恶性肿瘤之一。目前针对脑胶质瘤的标准治疗方案是手术切除结合放化疗。但由于颅脑手术的复杂性、脑胶质瘤浸润生长的特质以及化疗药物难以透过血脑屏障等多种因素的影响,经过标准治疗后脑胶质瘤患者的5年生存率仍然较低,特别是胶质母细胞瘤,患者5年生存率仅有10%-20%,治疗效果并不显著。因此,探索新的、有效的治疗方案对于提高脑胶质瘤患者的生存率具有重要意义。铁死亡相关基因SAT1在脑胶质瘤中的治疗意义一直是国内外学者的研究热点,并在近5年取得了丰富的成果,文章基于此,对近5年的相关研究结果进行了系统的树理和总结。

AMSR-E/2观测辐射值反演水成物参数

基于先进的微波扫描辐射计AMSR-E/2观测的辐射值,利用-维变分算法(1D-Var)反演各类水成物(云水、雨水和云冰)的垂直廓线,并对其反演结果进行检验。以2014年8月台风"夏浪"为例,分两步对变分反演的云微物理参数进行了检验。首先,将反演的各类水成物含量补充到辐射传输模式的输入场,观测算子模拟的AMSR-2各通道亮温与实况观测相比非常接近,可以很好地模拟出台风外形、强度及螺旋结构。其次,将反演的水成物廓线与载在Cloud Sat上的云雷达CPR同时段观测的雷达反射率因子进行对比,发现反演出的云水、雨水含量大值区与毫米波云雷达观测的雷达反射率因子高值区一一对应,进一步说明1D-Var反演的水成物参数精度很高。然而,由于星载AMSR-E/2观测通道少且空间分辨率低,对尺度较小、较薄的云不敏感,同时对云层较厚的密闭云区和多层云区反演能力也有限。

瘿痛饮对腺病毒致甲状腺滤泡上皮细胞感染模型细胞焦亡机制

目的:基于细胞焦亡病理表型对升阳清热法瘿痛饮干预腺病毒致甲状腺滤泡上皮Nthy-roi3-1细胞感染模型的机制进行探索。方法:Nthy-roi3-1细胞随机分为6组:空白组,模型组,强的松组,中药低、中、高剂量组,采用腺病毒感染Nthy-roi3-1细胞模拟亚急性甲状腺炎体外模型,培养14 d后分别应用免疫荧光法检测细胞中的Caspase-1蛋白含量,免疫化学发光法测定细胞上清液T3、T4水平,比色法测定细胞上清液LDH,ELISA检测各组细胞上清液IL-1β、IL-18水平,Western blot测定细胞GSDMD-N、Caspase-1、NLRP3、ELAVL-1蛋白表达,Real-time PCR测定细胞Tg、TPO、Caspase-1、NLRP3、ELAVL-1 mRNA表达,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞焦亡水平。结果:与空白组比较,模型组Caspase-1、ELAVL-1、GSDMD-N、NLRP3转录和表达水平,IL-1β、IL-18、T3、T4表达水平,Tg、TPO转录水平,细胞死亡率,以及Annexin V(+)/PI(+)和AnnexinV(+)/PI(-)细胞比例均显著升高(P<0.01)。各药物组上述指标均有不同程度下调(P<0.01),其中,中药低、中剂量组在下调T3、T4、LDH、Caspase-1、ELAVL-1、GSDMD-N、NLRP3表达水平及Tg、TPO、Caspase-1、ELAVL-1、GSDMD-N、NLRP3转录水平,上调Annexin V(+)/PI(+)细胞比例中具有显著疗效。结论:复方瘿痛饮能够抑制腺病毒致Nthy-roi3-1细胞感染的焦亡过程,其机制主要与下调焦亡上游调控分子ELAVL-1表达和转录水平,抑制NLRP3炎症小体活化、下调Caspase-1活化水平、抑制炎症细胞因子IL-1β、IL-18和GSDMD-N的表达有关。