大米草Na^+/H^+逆转运蛋白基因片段的克隆(英文)

根据水稻的保守区设计引物,利用PCR体外扩增技术,从大米草中克隆Na+/H+逆转运蛋白基因片段.克隆出了一段长度为862 bp的DNA序列,结果表明它与水稻、大麦、小麦、棉花、拟南芥等植物的Na+/H+逆转运蛋白基因序列具有很高的同源性,证明该序列确属Na+/H+逆转运蛋白基因的部分片段.

利用RNAi技术抑制拟南芥NHX1基因家族的表达

采用RNAi抑制NHX1基因家族的表达,并观察其对拟南芥耐盐性和耐旱性的影响.根据从拟南芥(Ara-bidopsis thaliana)cDNA中扩增出编码Na+/H+反向转运蛋白基因AtNHX1长度为210 bp高度保守序列作为RNAi的靶标区,并正反2个方向插入载体pHANNIBAL中,2个片段用intron连接;将RNAi表达框连入具有NPTⅡ筛选标记基因的表达载体pART27中,构建以拟南芥NHX1基因家族为靶标的RNAi载体.采用农杆菌介导的真空渗透法转化拟南芥,得到T0代转基因拟南芥种子.对转基因阳性植株进行RT-PCR检测以及耐盐性和耐旱性分析.结果表明,利用本实验构建的NHX1基因家族RNAi载体,拟南芥NHX1基因家族表达被成功地抑制;耐盐和耐旱分析表明RNAi技术对基因表达沉默是有效的.

木本盐生植物西伯利亚白刺NHX基因家族全基因组鉴定与表达分析

本研究旨在探究西伯利亚白刺(Nitraria sibirica)中一类重要的Na+/H+逆转运蛋白编码基因NHX家族生物信息学特征及非生物胁迫下的表达模式,为深入解析盐胁迫下西伯利亚白刺NHXs基因的功能奠定基础。本研究基于西伯利亚白刺全基因组数据,以拟南芥(Arabidopsis thaliana)NHXs基因序列为参考获得西伯利亚白刺NHXs基因。在西伯利亚白刺中共鉴定出12个NHXs成员,基于亚细胞定位预测结果将NsNHXs分成3个不同的系统发育组,分别分布在5、 6、 7、 8、 12号染色体上。结果显示,NsNHXs氨基酸长度在408~1 190 aa,分子量在44.460 00~130.780 74 kDa,等电点在5.36~8.86,亲水系数在0.114~0.713,具有8~12个跨膜螺旋结构。物种内共线性分析发现6对存在共线性关系的基因,物种间共线性分析结果显示,在西伯利亚白刺和拟南芥之间共鉴定出6对直系同源基因。基因表达热图显示,NaCl处理后,NsNHX4和NsNHX7基因表达水平最高。NaCl和CaCl2混合处理下,NsNHX4和NsNHX7基因表达水平最高,且相较于单一NaCl溶液处理基因表达水平更高,NsNHX1和NsNHX7在转录水平上表达均上调。400 mmol/L NaCl胁迫处理下西伯利亚白刺叶片和根中NsNHX家族基因的实时定量PCR结果表明,NsNHX基因家族的表达存在组织差异性,NsNHX1和NsNHX7在西伯利亚白刺叶片和根中表达均上调,NsNHX4在西伯利亚白刺叶片组织中表达上调,而在根中表达下调,NsNHX1、NsNHX4和NsNHX7基因可能在植物耐盐性调控中发挥重要作用。本研究为盐胁迫下西伯利亚白刺NHX家族功能研究提供了重要信息,也为进一步研究盐胁迫调控机制提供了候选基因。