异源nifA^C对根癌土壤杆菌nif基因表达的调节作用

用三亲交配方法分别将载有褐球固氮菌（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒｃｈｒｏｏｃｏｃｕｍ）呈组成型表达的ｎｉｆＡＣ的质粒ｐＣＫ５和肺炎克氏杆菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）含有ｎｉｆＡＣ和ｎｉｆＡｎｔｒＣ基因的质粒ｐＣＫ３，ｐＳＺ３６和ｐＳＺ２３ＣＡ导入根癌土壤杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）Ｃ５８／ｐＧＶ３８５０，所得转移接合子的生长速率和野生型相似。在１０ｍｍｏｌ／ＬＮＨ４＋浓度下，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ测出ＡｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓＣ５８／ｐＧＶ３８５０（ｐＣＫ５）有固氮酶合成，乙炔还原法测定固氮酶活性恢复分别为７３％，２４％，１１％和６２％。这些结果表明，褐球固氮菌和肺炎克氏杆菌的固氮调节基因对土壤杆菌固氮基因表达有调节作用。其中，褐球固氮菌ｎｉｆＡＣ的调节功能最强（７３％），其次是肺炎克氏杆菌ｎｉｆＡ和ｎｔｒＣ的融合子（６２％），肺炎克氏杆菌ｎｉｆＡＣ的调节功能较弱（２４％，１１％）。

K_2NiF_4型希土复合氧化物Eu_(2-x)Sr_xNiO_(4+δ)的合成、结构及还原性能

利用柠檬酸配合物分解法合成了单相的Ｋ２ＮｉＦ４型希土复合氧化物Ｅｕ２－ｘＳｒｘＮｉＯ４＋δ（０．５≤ｘ≤１．２），粉末Ｘ射线衍射分析表明，在ｘ为０．６～０．７的范围内，物相从空间群为Ｆｍｍｍ的正交相转变成空间群为Ｉ４／ｍｍｍ的四方相，随着Ｓｒ２＋的加入，部分Ｎｉ２＋转变为Ｎｉ３＋，其转变量与理论值接近。反映结构稳定性的高温还原峰温与晶胞参数ｃ有对应关系，表明化合物的结构稳定性取决于ＡＯ层与ＡＢＯ３层的层间距离。

念珠藻属植物nifH基因的适应性进化分析

念珠藻(Nostoc)固氮过程关键在于固氮酶的催化,而固氮酶复合物中的铁蛋白(NifH)是由高度保守的nif H基因编码的,该基因是进化史上现存最古老的功能基因之一。该研究选取念珠藻属及近缘类群的nif H基因序列共40条,采用最大似然法构建系统发育树;运行PAML4.9软件,对nif H基因编码蛋白进行生物信息学分析,并使用分支模型、位点模型和分支-位点模型检测该基因的选择位点,探讨nif H基因的适应性进化特征。结果表明:(1)最大似然树显示内类群中该研究物种共分为6个分支(A、B、C、D、E和F),其中D和E是2个大的分支,每个大分支中又各包含2个特殊的小分支A、F和B、C,其中F分支包含新疆古尔班通古特沙漠采集到的9株念珠藻,A分支包含F分支及该研究测定序列的4株葛仙米,B分支包含本研究测定序列的4株地皮菜和3株未定种的念珠藻,C分支包含NCBI数据库中下载的5株念珠藻、鱼腥藻序列和本研究测定序列的1株念珠藻。(2)在所分析的3种进化模型中,仅通过分支-位点模型检测出14个统计学上显著的正选择位点,即1F、2S、3S、4T、5A、6F、7F、8I、9S、10C、17I、27Y、29D和31R位点,表明念珠藻属植物的nif H基因发生了适应性变化,分支-位点模型是研究藻类基因适应性进化较好的模型。

nifH-gfp表达载体的构建及其在Enterobacter gergoviae 57-7中的表达

采用PCR技术 ,从GFPmut2中扩增得到三位点突变的报告基因gfpS65T、V68L、S72A片段 ,并将它和肺炎克氏杆菌(Klebsiellapneumoniae (Schr eter)Trevisan)M5a1的固氮酶结构基因nifH的启动子和其起始密码子相融合 ,获得nifH_gfp表达载体pMGFP2 ;再在pMGFP2上插入卡那霉素抗性基因 ,获得可在日勾维肠杆菌 (Enterobactergergoviae)5 7_7表达nifH_gfp的表达载体pMGFP2 .1。研究了此表达载体经转化E .gergoviae 5 7_7后 ,NH+ 4和氧对E .gergoviae5 7_7中nifH_gfp表达的影响。

血链球菌部分基因克隆及与nif基因同源序列初探

目的：分析血链球菌染色体ＤＮＡ片段序列，探讨血链球菌遗传生物学特性。方法：采用ＴＡ克隆技术将此片段转化克隆并进行碱基序列测定，通过ＧｅｎＢａｎｋ进行同源分析。结果：血链球菌ＡＴＣＣ１０５５６ＤＮＡ片段含有与固氮菌高度同源的ｎｉｆＳ、ｎｉｆＵ基因，同源分值为１１４点（ｂｉｔｓ）。结论：国内外首次报道血链球菌ＤＮＡ片段含有ｎｉｆＳ、ｎｉｆＵ部分基因。

棕色固氮菌nifS敲除菌株的构建

从Azotobacter vinelandii中通过PCR扩增了5’和3’端分别缺失264bp和261bp的nifS′片段,克隆至载体pUC18,形成重组质粒pUCS,再通过同源重组的方法,将pUCS插入Azoto-bacter vinelandii的nifS中,形成nifS阻断突变体SU1,经Southern杂交和PCR扩增,证明所得确为nifS阻断突变株。SU1在外加氮源的BBGN培养基中能够快速生长,但在Burk's无氮培养基中,生长却极其缓慢,表明nifS基因的破坏,已造成SU1的固氮能力接近完全丧失。该突变体的成功构建,为进一步从中纯化固氮酶两组分,研究nifS对固氮酶结构及功能的影响及iscS与nifS之间的关系奠定了良好的基础。

拟南芥AtCpNifS克隆及其原核表达

从哥伦比亚生态型拟南芥(Arabidopsis thaliana ecotype Columbia)中克隆了AtCpNifS的完整CDS序列。通过测序和序列比对分析,确认了克隆序列的完整性和正确性。在此基础上,构建了该基因的原核表达载体(BL21-pET28-AtCpNifS),并从该质粒中成功分离了表达蛋白(AtCpNifS)。

[NiFe/Cu/Co/Cu]_n多层纳米线在巨磁电阻位移传感器中的应用

采用双槽电沉积法制备了巨磁电阻（Giant Magnetorsistance;GMR）材料[NiFe/Cu/Co/Cu]n 多层纳米线阵列,并以其为磁传感器芯片,设计并制备了GMR位移传感器,在不同温度下测试了其灵敏度.研究表明,该GMR 位移传感器的输出电压与位移具有较好的线性关系,在10-40℃环境温度内具有良好的稳定性.与[NiFe/Cu/Co/Cu]n 多层膜作传感器芯片相比,以[NiFe/Cu/Co/Cu]n 多层纳米线作为芯片时传感器灵敏度更高.

粪产碱菌(Alcaligenes faecalix)基因文库的构建和nifH基因同源顺序的克隆

采用λ噬菌体置换型载体EMBL4,构建了Alcaligenes faecalis A-15 H1菌株总DNA的基因文库。用Sau3AⅠ限制酶完成部分酶切,取13—20kb大小的片段进行克隆。载体DNA经BamHⅠ和SaiⅠ完全双酶切,左右臂“退火”形成左右臂载体分子后再与外源片段连接。左右臂载体分子与外源片段按照1:1的分子比进行体外连接。用E.coli BHB2688和E.coli BHB2690制备的包装抽提物进行体外包装,所得基因文库效价测定为1.2×10~6 pfu,远远超过理论上所需的库容量。以nif H基因作为探针,经3轮噬菌斑原位杂交,从基因文库中筛选出含有其同源顺序的克隆,并得到了梯度点杂交的验证。对所得重组噬菌体克隆之一进行Southern转移杂交,结果证实,其3.5kb的EcoRⅠ酶切片段为nif H阳性杂交条带。将其克隆到质粒pUC19 DNA上后,转入受体菌JM101中。再次经Southern转移杂交,证明所得重组质粒克隆(pAFH)含有粪产碱菌中的与nifH基因有同源顺序的片段。

K_2NiF_4结构固溶体颜料的研究

基于稀土铝酸盐铬掺杂的研究，扩展到了对Ｋ２ＮｉＦ４结构的ＣａＮｄＡｌ１－ｘＣｒｘＯ４固溶体的研究，Ｃｒ３＋取代部分Ａｌ３＋离子后。

Eu^(3+)在K_2NiF_4型结构铝酸盐中的发光

报道了Eu^(+3)在K_2NiF_4型结构铝酸盐中的光谱性质,计算了Eu^(3+)有关能级的位置,讨论了Eu^(3+)发光与基质的结构和组成的关系,发现随着CaYAlO_4、CaGdAlO_4、SrGdAlO_4、SrLaAlO_4、SrLaAlO_4中阳离子荷径比的减小,Eu^(3+)激发光谱中电荷迁移吸收带的位置依次移向长波。

K_2NiF_4型稀土复合氧化物LnSrCoO_4催化性能

利用柠檬酸络合法合成了K2NiF4型稀土复合氧化物LnSrCoO4(Ln=Pr、Nd、Eu)并考察了它们对CO和C3H8氧化反应的催化活性,以XRD、O2-TPD、CO2-TPD对催化剂进行表征。结果表明,Pr、Nd和Eu能形成K2NiF4型稀土复合氧化物,O2和CO2的脱附量与催化剂结构中的Co2+和Co3+含量及性质有关,晶格氧参与了CO和C3H8氧化反应。

镝在具有K_2NiF_4型结构的A_2BO_4(A=Dy^(3+)/Sr^(2+),B=Ni,Mn,Fe,Co)化合物中的掺杂和X射线衍射表征

本文用多晶X射线衍射技术,研究重稀土镝嫡在具有K_2NiF_4型结构A_2BO_4(A=Dy/Sr,B=Ni,Mn,Fe,Co)化合物中的掺杂,发现在空气气氛中,在1200°至1400℃温度范围内,Ni、Mn能与Dy^(3+)/Sr^(2+)形成Dy_(0.5) Sr_(1.5)MO_4(M=Ni,Mn)复合氧化物,四方晶系,空间群为D_(4h)^(17)—I_4/mmm;Fe、Co未能与Dy^(3+)/Sr^(2+)形成A_2BO_4型化合物,只能与Sr形成A_2BO_4或A_2B_2O_5型化合物.Co和Fe可以取代Dy_(0.5)Sr_(1.5)NiO_4化合物中最多约0.25％Ni(摩尔百分数)而保持四方相结构稳定.Dy^(3+)/Sr^(2+)与过渡金属元素能否形成A_2BO_4型化合物,决定Dy^(3+)与它们之间容纳因子t值.给出了Dy_(0.5)Sr_(1.5)MO_4(M=Mn,Ni,Ni_(0:75)Co_(0:25),Ni_(0:75)Fe_(0:25)的粉末衍射图和数据.

nif HDK基因在W80-2上的初步定位

对几种质粒检测方法进行了比较 ,发现原位裂解法能比较满意地检测到巴西固氮螺菌 (Azospirillumbrasilense)的巨大质粒。利用改进后的原位裂解法能比较稳定地检测到W 80 2菌株中的巨大质粒。通过Southern blotting的方法将W 80 2菌的染色体及巨大质粒转到尼龙膜上 ,与用地高辛标记的含nifHDK基因的 pSA30质粒杂交 ,发现W80 2菌株的nifHDK基因定位在染色体上。

具有K_2NiF_4型结构的复合氧化物Sm_(2-x)Sr_xNiO_4的合成和结构测定

本文报导了Sm_(2-x)Sr_xNiO_4系列稀土复合氧化物的形成范围及其结晶化学特征。XRD分析表明,在0.4≤x≤1.2范围内,能形成K_2NiF_4型结构的稀土复合氧化物,随Sr掺入量x的增加,其结构由空间群为D_(2A)^(23)-Fmmm的正交晶系逐渐向空间群为D_(4h)^(17)I_4/mmm的四方晶系过渡。本文从容纳因子t值、Ni离子的变价(Ni^(2+)/Ni^(3+))和NiO_6八面体的畸变角度探讨了Sr^(2+)的掺入量对结构的影响。

肺炎克氏杆菌nifA基因在巴西固氮螺菌固氮基因表达的铵调节中的作用

固氮螺菌(Azospirillum)是一类仅在限铵和微好氧条件下固氮的微生物,它可与许多禾本科作物联合共生,具有较大的应用潜力。铵作为固氮作用的调节信号,在固氮螺菌的实际应用中是首要的限制因素。在固氮螺菌中,铵不但具有与肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)相似的阻遏固氮酶合成的作用,而且还对已合成的固氮酶进行活性调节。

华葵根瘤菌nifA基因的克隆和功能分析

华葵根瘤菌 (Mesorhizobiumhuakuii即R .astragali) 1 59的nifA基因的序列分析表明 ,该基因全长 1 2 2 7bp ,编码分子量为 44734D的NifA蛋白。与其它NifA蛋白的序列比较发现 ,华葵根瘤菌NifA蛋白也存在保守的中间结构域和C 末端DNA结合结构域 ,但其氨基端缺失。Tn5定点突变得到的突变体是Nif- 表型。构建了nifA基因组成型表达的质粒 ,此质粒在大肠杆菌中对华葵根瘤菌nifH lacZ有激活作用。

水稻联合固氮菌质粒的鉴定及固氮(nif)基因定位

应用改进的Casse法提取质粒,鉴定了供试菌株的质粒存在情况:高NH_4^+和N_2培养的Alcaligenes faecalis A_15,Enterobacter cloacae E26,E.cloacaeEnSs和klebsiella planticola DWUL2分别携有1—2个大质粒,分子量在30—200Md之间;K.planficola和Pseudomonas saccharophila含有小质粒;K.oxytocaNG13不携质粒。供试菌株中DNA与nif探针R1 nif DH和Ec nif B-Y均具有同源性。A.faecalis A15,E.cloacae E26和K.oxytoca NG13的nif基因位于染色体上,而E.cloacae EnSs的nif基因则位于一个较大质粒上。

紫云英根瘤菌Ra159的巨大质粒上存在有nod和nif基因的证明

在紫云英根瘤菌(Rhizobium astragali)Ra159中存在有两个分子量分别约为300Md(pRa159a)及大于300Md(pRa159b)的巨大质粒。以肺炎克氏杆菌的固氮酶结构基因nif HDK 片段和苜蓿根瘤菌共同结瘤基因 nod ABCD 片段作探针进行的杂交试验证明了紫云英根瘤菌的大质粒 pRa159b 上存在有 nod 基因和 nif 基因。将这些大质粒转移到 nod-nif 基因缺失的苜蓿根瘤菌突变株 Rm627-1,只有带 pRa159b 的转移接合子能在紫云英植物上形成根瘤,但这些根瘤均不能还原乙炔。