NIH3T3细胞膜上甲胎蛋白受体介导的信号转导途径研究

目的观察甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)促肿瘤细胞增生的信号转导方式。方法从人脐带血清中提取的AFP,作用于体外培养的NIH3T3细胞,用噻唑蓝(MTT)染色计数法,3H-脱氧胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法等指标检测细胞增生状况;再用放射免疫结合法分析在百日咳毒素(pertussistoxin,PTX)预处理前后AFP对细胞内环腺苷酸(cAMP)浓度、细胞内蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)活性变化和共聚焦显微镜扫描细胞内钙离子(Ca2+)浓度,以及Westernblot分析p21ras蛋白的表达。结果AFP10-80mg/L作用24h后,对NIH3T3细胞有不同程度的促增生作用;AFP能显著提高NIH3T3细胞内的cAMP浓度、PKA活性和Ca2+浓度,对p21ras的表达也有明显的促进作用;PTX能阻断AFP对NIH3T3细胞内的cAMP浓度和PKA活性的影响,而对AFP提高NIH3T3细胞Ca2+浓度、p21ras的表达则没有明显的阻断作用。抗AFP的单克隆抗体也能阻断AFP的作用。结论AFP具有促NIH3T3细胞增生的作用,AFP受体通过cAMP-PKA、Ca2+等多信号转导途径调节NIH3T3细胞生长。