NIMA相关激酶6在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的 NIMA相关激酶6在肝细胞肝癌的中的表达及其临床意义。方法选择南通大学附属医院普外科2007年1月至2012年12月术后HCC标作为研究对象,应用免疫组化检测Nek6在HCC中的表达。结果 Nek6在HCC中高表达,表达阳性细胞数为5%～80%,LI为(53±23.23)%;HCC中Nek6的表达强度与肝癌患者肿瘤病理分级(P=0.014)、血清AFP水平(P=0.034)间差异有统计学意义,与患者的性别、年龄、肿瘤大小、有无转移、血清HBsAg及是否伴有肝硬化状态间差异无统计学意义。结论 Nek6的表达可作为肝细胞肝癌一个独立的预后因素。

NIMA相关激酶2在胰腺癌中的表达及其临床意义

背景与目的:NIMA相关激酶2(NEK2)在多种恶性肿瘤中呈高表达,且与肿瘤进展及不良预后密切相关。然而,NEK2在胰腺癌中的表达及意义尚不清楚。因此,本研究探讨NEK2在胰腺癌组织中的表达及其与患者临床病理因素、预后的关系。方法:收集海南省人民医院肝胆胰外科于2013年1月—2014年12月接受胰腺癌切除术的108例患者组织标本,以及临床病理资料与随访资料。免疫组化法染色检测组织标本中NEK2的表达,分析NEK2的表达与临床病理因素的关系,Kaplan-Meier生存曲线和Log-rank分析及比较不同NEK2表达水平患者无瘤生存率及总生存率差异。Cox风险比例模型分析影响预后的危险因素。结果:在正常胰腺组织中无NEK2表达,108例胰腺癌组织中,NEK2高表达63例(58.3%),低表达45例(41.7%)。NEK2的表达与患者CA19-9水平(P=0.015)﹑TNM分期(P=0.002)﹑肿瘤分化程度(P=0.034)﹑淋巴结转移(P=0.043)明显有关,而与性别﹑年龄﹑吸烟﹑CEA水平﹑肿瘤大小﹑肿瘤部位无明显关系(均P>0.05)。NEK2高表达患者1﹑3、5年无瘤生存率分别为60.5%﹑20.7%、5.2%,NEK2低表达患者1﹑3、5年无瘤生存率分别为75.4%﹑50.6%、24.9%;NEK2高表达患者1﹑3、5年总生存率分别为75.6%﹑42.2%、15.3%,NEK2低表达患者1﹑3、5年总生存率分别为85.7%﹑60.6%、30.1%,NEK2高表达患者的无瘤生存率与总生存率均低于NEK2低表达患者(均P<0.05)。单因素与多因素分析结果显示,TNM分期(P=0.029)﹑淋巴结转移(P=0.016)、NEK2高表达(P=0.032)为无瘤生存率的独立影响因素;TNM分期(P=0.035)﹑分化程度(P=0.042)﹑淋巴结转移(P=0.006)及NEK2高表达(P=0.000)为总生存率的独立影响因素。结论:NEK2高表达是胰腺癌患者预后的独立危险因素,NEK2可作为胰腺癌术后患者预后判断的指标。

黄芩抑制脂多糖/三磷酸腺苷诱导的内皮细胞NIMA相关蛋白激酶7(NEK7)表达和Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活

【目的】观察黄芩和黄芩苷对脂多糖(LPS)/三磷酸腺苷(ATP)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)NIMA相关蛋白激酶7(NEK7)和Nod样受体蛋白3(NLRP3)小体表达的影响。【方法】将HUVECs随机分为空白对照组、模型组、阿托伐他汀组、黄芩苷组和黄芩血清组,按分组相应药物预处理细胞24 h,然后用1μg/mL LPS刺激细胞24 h,再用5.5 mmol/L ATP刺激细胞4 h后检测各指标。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,均相竞争法测定细胞上清液中内皮素1(ET-1)的含量,硝酸还原酶法测定细胞上清液中总硝酸盐(NOx)水平,蛋白免疫印迹法检测细胞内NEK7、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、裂解型胱天蛋白酶1(cleaved-Caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。【结果】与模型组比较,黄芩血清组、黄芩苷组、阿托伐他汀组LPS/ATP诱导的细胞活力升高,ET-1水平降低、NOx水平升高,NEK7、NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1、IL-1β的蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01),且黄芩血清组、黄芩苷组的作用效果优于阿托伐他汀组。【结论】黄芩和黄芩苷可以抑制LPS/ATP诱导HUVECs的NLRP3炎症小体激活引起的细胞焦亡而保护内皮,其机制可能与调控NEK7表达有关。

NIMA相关蛋白激酶7、Nod样受体蛋白3与多囊卵巢综合征炎症指标相关性研究

目的探讨卵巢颗粒细胞中NIMA相关蛋白激酶7(NEK7)和Nod样受体蛋白3(NLRP3) mRNA表达量与多囊卵巢综合征(PCOS)患者炎症指标的相关性及其预测价值。方法选取2018年8月至2019年3月来山西省儿童医院/山西省妇幼保健院生殖中心就诊的30例PCOS患者为研究组和同期由于男方因素或输卵管因素就诊的34例非PCOS不孕症患者为对照组。取卵日收集行IVF/ICSI-ET患者的卵泡液和颗粒细胞,检测卵泡液中炎症因子白介素(IL)-1β、IL-18的表达以及颗粒细胞中NEK7、NLRP3 mRNA的表达,并将NEK7、NLRP3的mRNA表达量与各指标进行相关性分析。最后应用受试者工作特征曲线(ROC)分析NEK7、NLRP3 mRNA对PCOS的预测价值。结果研究组体重指数(BMI)和获卵数显著高于对照组,且LH、LH/FSH、睾酮(T)水平亦显著高于对照组(P均<0.05)。研究组卵泡液中炎症因子IL-1β、IL-18的表达显著高于对照组,卵巢颗粒细胞中NEK7、NLRP3 mRNA的表达亦显著高于对照组(P均<0.05)。相关性分析结果显示,研究组患者卵巢颗粒细胞中NEK7和NLRP3 mRNA水平与血清基础LH、LH/FSH、炎症因子IL-1β、IL-18均呈显著正相关(P均<0.05)。ROC分析结果显示,NEK7是PCOS的有效预测因子,预测炎症的曲线下面积为0.741,临界值为1.154。结论 NEK7、NLRP3可能通过促进IL-1β、IL-18的释放影响PCOS炎症的发生及发展,且NEK7是PCOS的有效预测因子,可能为PCOS的临床治疗提供新思路。

脑出血患者脑组织中NEK7、NLRP3的表达水平及其与疾病严重程度的关系

目的 探究脑出血患者脑组织中Nod样受体蛋白-3 (NLRP3)、NIMA相关蛋白激酶7 (NEK7)表达水平与疾病严重程度的相关性。方法 前瞻性选取2017年1月至2020年12月郑州颐和医院诊治的80例脑出血患者进行研究,取皮层造瘘通道靠近血肿0.5 cm处的脑组织为靠近组,另取远离血肿位置的脑组织为远离组。依据脑出血患者出血量将其分为少量组(出血量<15 mL) 29例、中量组(出血量15~30 m L) 27例和大量组(出血量>30 mL)24例;按美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将患者分为轻型组(1~4分) 30例、中型组(5~15分) 27例和重型组(>15分) 23例。采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法测定各组脑组织中NEK7 m RNA、NLRP3 m RNA表达水平;采用Pearson法分析脑出血患者血肿0.5 cm处脑组织中NEK7 m RNA表达水平与NLRP3 m RNA表达水平的相关性;比较不同出血量、不同严重程度的脑出血患者距离血肿0.5 cm处脑组织中NEK7 m RNA、NLRP3 m RNA表达水平。结果 靠近组患者脑组织中NEK7 m RNA、NLRP3 m RNA表达水平分别为1.72±0.58、1.69±0.57,明显高于远离组的1.03±0.34、1.01±0.33,差异均有统计学意义(P<0.05);脑出血患者血肿0.5 cm处脑组织中NEK7 m RNA表达水平与NLRP3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.563,P<0.05);脑出血患者距离血肿0.5 cm处脑组织中NEK7m RNA、NLRP3 m RNA表达水平随着出血量的增加而升高,差异均有统计学意义(P<0.05);脑出血患者距离血肿0.5 cm处脑组织中NEK7 mRNA、NLRP3 m RNA表达水平随着NIHSS评分的增加而升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 脑出血患者距离血肿0.5 cm处脑组织中NEK7、NLRP3表达水平明显升高,两者均与出血量和疾病严重程度显著相关,检测距离血肿0.5 cm处脑组织NEK7、NLRP3有利于判断脑出血严重程度及出血情况。

基于嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7的资生肾气丸镇痛机制研究

目的:探索资生肾气丸对醋酸致小鼠扭体模型的镇痛作用。方法:将42只小鼠随机分为7组,分别给予相应药液灌胃,末次灌胃1 h后造模,建立醋酸致小鼠扭体模型。观察小鼠扭体次数,计算其扭体抑制率,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E 2(PGE 2)、神经生长因子(NGF)含量,采用实时PCR(RT-PCR)检测嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)mRNA、Nod样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、NIMA相关激酶7(NEK7)mRNA的表达情况。结果:与模型组比较,随着时间的增加,资生肾气丸低剂量、中剂量、高剂量均可抑制小鼠扭体反应,降低扭体次数,增加小鼠扭体抑制率,降低小鼠血清中IL-1β、PGE_(2)、NGF的含量,降低P2X7RmRNA、NLRP3mRNA、NEK7mRNA的表达以抑制疼痛反应,以高剂量效果最优(P<0.05),与吲哚美辛、痛风舒片疗效相近。结论:资生肾气丸高剂量对小鼠血清疼痛因子的降低效果显著,其机制可能与嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7信号通路有关。

NIMA相关蛋白激酶6在肝癌组织的表达及意义

目的研究NIMA相关蛋白激酶6(NEK6)在肝癌(HCC)组织中的表达及意义。方法采用荧光定量PCR检测168例HCC及癌旁组织中NEK6mRNA表达,分析其与HCC临床病理参数的相关性。通过转染NEK6过表达质粒构建稳定表达NEK6的HCC细胞株,行裸鼠皮下种植,观察NEK6对HCC细胞致瘤能力的影响。结果与癌旁组织比较,HCC癌组织NEK6mRNA阳性表达率高[23.8%(40/168)vs.76.2%(128/168)](P<0.01);NEK6mRNA表达量与肿瘤大小、脉管侵犯及病理分级显著相关(P<0.05)。NEK6过表达可明显促进肝癌细胞株Huh7和HepG2的成瘤能力。结论 HCC组织高表达NEK6,且与HCC恶性程度明显相关,可促进HCC细胞成瘤。

TOP2a、Nek2及RRM1在胃癌癌组织中表达及临床意义

目的探讨拓扑异构酶2a(TOP2a)、丝/苏氨酸激酶NIMA相关激酶2(Nek2)、核苷酸还原酶亚基1(RRM1)在胃癌癌组织中的表达及临床意义。方法回顾性研究,通过免疫组化法测定60例胃癌癌组织(观察组)、30例正常组织(对照组) Top2A、NEK2、RRM1表达,并分析其表达与胃癌患者临床病理特征的关系。结果观察组Top2A、NEK2、RRM1阳性率分别为66. 67%、65. 00%、83. 33%,均显著高于对照组的10. 00%、13. 33%、16. 67%,差异有统计学意义(P <0. 05);胃癌组织Top2A表达与患者TNM分期、分化程度、浸润深度及淋巴结转移显著相关(P <0. 05),NEK2表达与患者分化程度、淋巴结转移显著相关(P <0. 05),RRM1表达与患者分化程度、浸润深度显著相关(P <0. 05);胃癌组织Top2A表达与NEK2、RRM1均呈正相关(P <0. 05)。结论胃癌癌组织中TOP2a、Nek2及RRM1高表达,且三者正相关,与肿瘤分化程度、浸润深度或淋巴结转移密切相关,检测TOP2a、Nek2及RRM1有利于肿瘤发生、进展评估,指导临床治疗。

沉默Nek2基因对卵巢癌SKOV3细胞周期的影响

目的研究RNA干扰NIMA相关激酶2(Nek2)表达对卵巢癌细胞SKOV3细胞周期的影响及其相关的分子机制。方法将针对Nek2基因的siRNA转染至SKOV3细胞中,采用流式细胞技术检测SKOV3细胞周期变化,并用Western blot技术检测Nek2-siRNA转染入卵巢癌SKOV3细胞48h后,与细胞周期相关的因子cyclinB1、CDK1及P27蛋白表达水平以及ERK1/2磷酸化水平的变化。结果空白对照组、阴性对照组和RNA干扰组中处于G2/M期的细胞比例分别为13.72%、12.27%和1.56%,与两对照组比较,处于G2/M期的干扰组细胞明显减少(P<0.05)。Nek2基因沉默后,与两对照组比较,SKOV3细胞内cyclinB1和CDK1的蛋白表达水平明显下降,P27的蛋白表达水平明显上调,SKOV3细胞内ERK1/2磷酸化水平明显下降(P<0.05)。结论沉默Nek2基因,可阻止卵巢癌SKOV3细胞启动有丝分裂,从而抑制其增殖。

Nek2基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力的影响

目的研究RNA干扰Nek2表达对卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力的影响以及相关的分子机制。方法设计合成3条针对Nek2基因的siRNA,转染至SKOV3细胞中,采用Real-time RT-PCR和Western blot技术筛选出抑制效率最高的Nek2-siRNA序列,用Transwell方法检测转染该序列的SKOV3细胞侵袭能力的改变,并用Western blot方法检测Nek2-siRNA转染后SKOV3细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表达的变化。结果①RNA干扰序列2对SKOV3细胞中Nek2的抑制效果最明显;②与未转染组和阴性对照组相比,转染了Nek2-siRNA的SKOV3细胞侵袭能力明显下降(P<0.01);③Western blot检测表明,与未转染组和阴性对照组相比,Nek2-siRNA转染48 h后SKOV3细胞中MMP-2、MMP-9的表达明显下调,而TIMP-1的表达明显上调(P<0.01)。结论 Nek2-siRNA能有效得沉默SKOV3细胞中Nek2的表达,通过下调MMP-2、MMP-9的表达,上调TIMP-1的表达,从而抑制SKOV3细胞的侵袭转移。

芍药苷通过JNK/NEK7/NLRP3通路缓解脓毒症相关急性肾损伤

目的:基于细胞焦亡和JNK/NEK7/NLRP3通路,研究芍药苷(PF)对小鼠脓毒症相关急性肾损伤(SA-AKI)的作用和机制。方法:腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠SA-AKI模型。雄性6~8周龄C57BL/6J小鼠24只,随机数字表法分为4组:对照(control,Con)组(在相同时间腹腔注射等量含DMSO的PBS);LPS组(腹腔注射LPS 15 mg/kg);LPS+PF组(造模前30 min腹腔注射PF 50 mg/kg),LPS+PF+anisomycin组(造模前30 min腹腔注射PF 50 mg/kg和JNK激动剂anisomycin 20 mg/kg)。造模后24 h取材,HE染色观察肾组织病理变化,进行肾损伤Paller评分;ELISA检测肾损伤标志物:血肌酐(Scr)、肾损伤分子1(KIM-1)和炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18水平;Western blot检测磷酸化JNK(p-JNK)、NIMA相关激酶7(NEK7)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)、gasdermin D的N端片段(GSDMD-N)蛋白变化。结果:相较于Con组,LPS组HE染色显示肾组织发生充血水肿,肾小管扩张管腔内出现颗粒或细胞样管型,肾间质出现充血水肿,Paller评分升高,Scr、血清KIM-1水平升高(P<0.05),肾组织IL-1β、IL-18水平升高(P<0.05),p-JNK、NEK7、NLRP3、GSDMD-N表达上升(P<0.05)。相较于LPS组,LPS+PF组HE染色及肾损伤Paller评分显示肾组织病理损伤情况减轻,Scr、血清KIM-1水平降低(P<0.05),肾组织IL-1β、IL-18水平降低(P<0.05),p-JNK、NEK7、NLRP3、GSDMD-N蛋白表达下降(P<0.05)。相较于LPS+PF组,LPS+PF+anisomycin组HE染色及肾损伤Paller评分显示肾组织病理损伤加重,Scr、血清KIM-1水平升高(P<0.05),肾组织IL-1β、IL-18水平升高(P<0.05),p-JNK、NEK7、NLRP3、GSDMD-N表达上升(P<0.05)。结论:芍药苷可能通过抑制JNK/NEK7/NLRP3信号通路,减轻细胞焦亡和炎症反应,改善SA-AKI。

食管鳞状细胞癌KIF4A、NEK2和CDC20的表达及临床意义

目的探究食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)驱动蛋白超家族成员4A(KIF4A)、丝/苏氨酸激酶NIMA相关激酶2(NEK2)、细胞分裂周期蛋白20(CDC20)的表达及临床意义。方法选取2016年3月至2018年5月于邯郸市第一医院进行根治性手术治疗的91例食管鳞癌患者,术中取癌组织和癌旁组织(距癌组织3 cm),采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测不同组织中KIF4A、NEK2和CDC20的表达,分析三者表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。结果癌组织中KIF4A、NEK2和CDC20mRNA水平及蛋白表达评分均高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。不同临床分期和淋巴结转移情况的KIF4A表达比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同临床分期、分化程度和淋巴结转移情况的NEK2和CDC20表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。随访3年,Kaplan-Meier生存曲线结果表明,KIF4A、NEK2和CDC20阳性表达者生存时间分别短于KIF4A、NEK2和CDC20阴性表达者,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析显示,低分化程度、存在淋巴结转移及CDC20阳性表达是影响食管鳞癌患者预后存活的独立危险因素(P<0.05)。结论食管鳞癌患者癌组织中KIF4A、NEK2和CDC20阳性表达率异常升高,可为食管鳞癌病理状态和预后判定提供参考。

NEK2基因rs10494938、rs10158205位点多态性与肝细胞癌家系遗传易感性的关系

目的探讨丝/苏氨酸激酶NIMA相关激酶2(NEK2)基因rs10494938、rs10158205位点多态性与肝细胞癌(简称肝癌)家系遗传易感性的关系。方法选取广西扶绥县肝癌高发地区20个肝癌家系,包括肝癌患者20例及其直系亲属59例;另选10个正常家系(健康人群)进行对照,共40例。各家系均符合Hardy-Weinberg遗传平衡,均具有人群代表性。采用质谱方法检测NEK2基因rs10494938和rs10158205位点基因型分布频率;采用非条件Logistic回归分析法分析各家系人群等位基因及基因型分布频率的差异。结果 NEK2基因rs10494938位点存在CC和CG两种基因型,其中CC基因型114例、CG基因型5例;rs10158205位点存在CC、CT和TT三种基因型,其中CC基因型69例、CT基因型45例、TT基因型5例。肝癌家系中肝癌患者及其直系亲属、正常对照家系NEK2基因rs10494938位点CC、CG基因型及等位基因G、C分布频率比较差异均无统计学意义(P均>0.05),rs10158205位点CC、CT、TT基因型及等位基因T、C分布频率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 NEK2基因rs10494938、rs10158205位点多态性与广西扶绥县肝癌家系遗传易感性之间无相关性。

NEK家族在细胞周期调控中的作用

NIMA相关激酶(NIMA-related kinases,NEKs)是丝氨酸/苏氨酸激酶,在细胞周期调控中发挥着重要的作用,参与了中心体分离、纺锤体组装、染色质凝集、核膜破裂、纺锤体组装检验点信号、胞质分裂、纤毛形成及DNA损伤反应等多种细胞活动。本文结合近年来在该激酶家族的相关研究,从NEK家族的组成、结构特征及其在有丝分裂和减数分裂过程中的作用等多个方面展开综述,以期为进一步研究NEKs在细胞周期调控中的作用提供重要基础,也为肿瘤的临床诊断和治疗提供理论依据。

NEK7的生物学功能及其在疾病中的研究进展

NEK7属于NIMA相关激酶家族,是该家族最小的成员之一。NEK7是一种多功能激酶,影响中心体复制、线粒体调节、细胞内蛋白质转运、DNA修复和有丝分裂纺锤体组装等。迄今,NEK7的生理和病理作用已被广泛报道,且相关研究主要集中在有丝分裂调控和NLRP3炎症小体激活中,但具体调节机制仍有待进一步明确。文章主要概述了NEK7在有丝分裂和炎症相关的生物学特征,及其在炎症相关性疾病和恶性肿瘤中的研究进展,探讨了其作为疾病治疗靶点的可能性及其潜在应用前景。

NEK2在胃癌中的表达及其与化疗药物敏感性之间的关系

目的:研究丝/苏氨酸蛋白激酶NIMA相关激酶2(NEK2)在胃癌组织中的表达及其与化疗药物敏感性之间的关系。方法:免疫组织化学及蛋白印迹法检测胃癌组织中NEK2的表达情况,体外原代培养胃癌细胞,MTT法检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,分析NEK2的表达与药物敏感性之间的关系。结果:NEK2在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。NEK2在胃癌组织中的表达与患者的年龄、性别、肿物大小比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与分化程度、TNM分期和淋巴结转移比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。NEK2与5-FU的药物敏感性无显著关系(P>0.05),而顺铂耐药组NEK2蛋白的表达量显著增高(P<0.05)。结论:NEK2在胃癌组织中表达上调,与肿瘤的进展程度及顺铂耐药有关。

过表达miR-151a-3p抑制PC-3前列腺癌细胞增殖和迁移

目的研究上调微小RNA-151a-3p(miR-151a-3p)对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响和机制。方法采用实时荧光定量PCR检测PC-3M、C4-2B、22RV1、DU-145、PC-3、LNCaP人前列腺癌细胞和RWPE-1人正常前列腺上皮细胞中miR-151a-3p的表达量。以miR-151a-3p表达量最低的PC-3细胞为研究对象,生物信息学预测并采用双荧光素酶报告基因实验检验miR-151a-3p的潜在靶基因。转染miR-151a-3p模拟物或阴性对照微小RNA(miR-NC)至PC-3细胞。实时荧光定量PCR检测miR-151a-3p和潜在靶基因mRNA的表达量,Western blot法检测靶基因及下游信号通路蛋白表达量。采用MTT法检测PC-3细胞的增殖,Transwell^(TM)实验检测PC-3细胞的迁移能力。结果 miR-151a-3p在前列腺癌细胞的表达量明显低于RWPE-1人正常前列腺上皮细胞,其中PC-3细胞中的表达量最低。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验表明NIMA相关激酶2(NEK2)是miR-151a-3p的潜在靶基因。转染miR-151a-3p模拟物后,PC-3细胞中miR-151a-3p的表达量明显上升,NEK2基因的表达量明显降低,NEK2基因下游磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K-AKT-mTOR)信号通路蛋白水平降低。上调miR-151a-3p明显抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移。结论miR-151a-3p在前列腺癌细胞中表达降低,上调miR-151a-3p的表达可通过降低NEK2基因及下游PI3K-AKT-mTOR信号通路蛋白的表达抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移。

miR-219-5p对人肾癌细胞增殖和迁移、侵袭的影响及其作用机制

目的探讨微小RNA-219-5p(miR-219-5p)对人肾癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-219-5p和NIMA相关激酶6(NEK6)蛋白在肾癌组织和肾癌细胞786-O、ACHN中的表达。建立过表达miR-219-5p的细胞,观察其对肾癌细胞786-O、ACHN增殖、迁移和侵袭的影响。生物信息学预测结合双荧光素酶报告实验分析miR-219-5p与NEK6的靶向关系。在786-O、ACHN细胞中转染si-NEK6,噻唑蓝(MTT)和细胞克隆实验检测细胞存活和克隆数,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、P21、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、NEK6蛋白表达。共转染miR-219-5p和pcDNA3.1-NEK6,观察过表达NEK6对miR-219-5p诱导的786-O和ACHN细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁组织或肾上皮细胞比较,肾癌组织或肾癌细胞786-O、ACHN中miR-219-5p表达量明显减少,NEK6蛋白表达量显著增加(P<0.05)。过表达miR-219-5p明显减低786-O、ACHN细胞存活率、克隆数、迁移细胞数、侵袭细胞数、Cyclin D1、MMP-2蛋白表达量,提高P21、E-cadherin蛋白水平(P<0.05)。miR-219-5p靶向调控NEK6表达。抑制NEK6明显减少786-O、ACHN细胞中NEK6、Cyclin D1、MMP-2蛋白表达量、细胞存活率、克隆数、迁移细胞数和侵袭细胞数,显著提高P21、E-cadherin蛋白水平(P<0.05)。过表达NEK6逆转了miR-219-5p对786-O、ACHN细胞增殖、迁移、侵袭、Cyclin D1、MMP-2蛋白表达的抑制作用,以及逆转了其对P21、E-cadherin蛋白表达的促进作用。结论miR-219-5p通过靶向调控NEK6表达抑制肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

Nek2与肿瘤及其耐药性研究进展

Nek2是NIMA相关蛋白激酶家族中一个成员,是一种特殊的染色体不稳定(chromosomal instability,CIN)基因,Nek2蛋白是调节有丝分裂进程关键的蛋白,在中心体分离、纺锤体形成和有丝分裂进程中起重要作用。笔者分别从Nek2在肿瘤染色体不稳定、有丝分裂纺锤体组装监控点、中心体分裂和肿瘤耐药性中所起的作用来阐述Nek2与肿瘤的关系。

NEK7/NLRP3信号通路在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用

目的:评价NIMA相关激酶7/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NEK7/NLRP3)信号通路在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用。方法:健康成年雄性C57BL/6小鼠150只,8~12周龄,体重20~25 g,采用随机数字表法分为5组(n=30):假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、脓毒症+NLRP3抑制剂MCC950组(CLP+MCC950组)、脓毒症+NEK7 siRNA组(CLP+NEK7 siRNA组)和脓毒症+NC siRNA组(CLP+NC siRNA组)。采用经典的盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型。术后连续3 d,CLP+MCC950组每天腹腔注射MCC95010 mg/kg,Sham组每天腹腔注射等量生理盐水。分别于术毕即刻和术后第3天,CLP+NEK7 siRNA组脑室注射NEK7 siRNA 3 nmol/20 g,Sham组脑室注射相同剂量NC siRNA。术后第4天记录小鼠生存情况。分别于术后第4和7天,每组取10只小鼠行Y迷宫空间识别实验。术后第7天,每组随机处死5只小鼠,麻醉后取海马组织,采用ELISA法检测IL-1β、IL-18和TNF-α含量;每组随机处死6只小鼠,取海马组织,采用Western blot法检测NEK7、NLRP3、活化的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(cleaved-caspase-1)和凋亡相关点样蛋白(ASC)的表达。结果:术后第4天,Sham组、CLP组、CLP+MCC950组和CLP+NEK7 siRNA组、CLP+NC siRNA组小鼠生存率分别为100%、50%、73%、60%、53%。与Sham组相比,CLP组术后第4和7天时新异臂进入频次减少,停留时间缩短,术后第7天海马组织IL-1β、IL-18和TNF-α含量升高,NEK7、NLRP3、cleaved-caspase-1和ASC表达上调(P<0.05);与CLP组相比,CLP+MCC950组和CLP+NEK7 siRNA组术后第4和7天新异臂进入频次增多,停留时间延长,术后第7天海马组织IL-1β、IL-18和TNF-α含量降低,CLP+MCC950组海马组织NLRP3、cleaved-caspase-1和ASC表达下调,CLP+NEK7 siRNA组海马组织NEK7、NLRP3、cleaved-caspase-1和ASC表达下调(P<0.05),CLP+NC siRNA组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NEK7/NLRP3信号通路参与了小鼠SAE的过程,其机制可能与促进炎症反应有关。