基于蛋白激酶NEK9/MTA2信号通路泛素化修饰探讨胃癌的转移机制

目的:基于永离有丝分裂基因A相关激酶9(NEK9)/转移相关肿瘤基因家族2(MTA2)信号通路泛素化修饰探讨胃癌(GC)的转移机制。方法:使用癌症基因组图谱(TCGA)和Kaplan-Meier Plotter数据库分析NEK9表达与GC分期、预后之间的关联。体外实验中,将GC细胞分为:对照组、shNC组、shNEK9组、shNC+NC-OE组、shNEK9+NC-OE组和shNEK9+MTA2-OE组。分别采用MTT和Transwell法测定细胞的增殖、迁移和侵袭,并通过Western blot检测NEK9、MTA2、上皮间充质转化(EMT)标记和PI3K/AKT信号通路蛋白表达。结果:TCGA数据库分析显示,NEK9 mRNA在肿瘤组织中的表达明显上调,并且与TNM分期较晚和NEK9高表达者的预后较差密切相关。此外,NEK9在7个GC细胞系中的表达明显高于正常胃上皮GES-1细胞(P<0.05)。与对照组相比,shNEK9组细胞活力、相对集落形成、EdU阳性细胞数、侵袭和迁移细胞数均显著降低(P<0.05)。此外,在shNEK9组细胞中,E-钙粘蛋白水平上调(P<0.05),波形蛋白水平下调(P<0.05)。通过免疫共沉淀试验证明NEK9与MTA2有相互作用。NEK9敲低加速了HGC-27细胞中MTA2的降解,并且MTA2泛素化在NEK9沉默的细胞中增加。与shNEK9+NC-OE组组相比,shNEK9+MTA2-OE组相对集落形成、EdU阳性细胞数和迁移和侵袭数均显著增加(P<0.05)。结论:NEK9在GC中明显上调,其敲低在体外抑制GC细胞的生长和转移。NEK9可能通过去泛素化途径稳定MTA2进而激活PI3K-AKT信号通路来对GC细胞产生促癌影响。

宫颈癌患者高危型HPV感染状况与血清M2型丙酮酸激酶、巨噬细胞集落刺激因子表达的相关性

目的 研究宫颈癌患者高危型人乳头状病毒(HPV)感染状况及其与血清M2丙酮酸激酶(M2-PK)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平之间的相关性。方法 将113例单一高危型HPV阳性宫颈癌患者(宫颈癌组)、106例单一高危型HPV阳性宫颈上皮内瘤变患者(CIN组)及60例健康妇女(对照组)作为研究对象,分别检测其血清M2-PK和GM-CSF水平,比较不同HPV亚型宫颈癌患者以及不同宫颈病变级别患者的血清M2-PK和GM-CSF水平,采用Spearman线性相关分析宫颈癌患者血清M2-PK及GM-CSF与高危HPV感染宫颈癌之间的关系。结果 宫颈癌和CIN患者高危HPV分型分布比较差异情况无统计学意义(P>0.05)。CIN以及宫颈癌组患者血清M2-PK及GM-CSF水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);且宫颈癌组患者血清M2-PK及GM-CSF水平高于CIN组,差异具有统计学意义(P<0.05);且随着宫颈上皮内瘤变程度的加重,CIN患者血清M2-PK及GM-CSF水平呈依次上升趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌不同HPV分型患者血清M2-PK及GM-CSF水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman线性相关分析结果显示,血清M2-PK和GM-CSF水平与宫颈上皮内瘤病变级别均呈正相关(γ=0.53,0.61,P均<0.001)。结论 血清M2-PK及GM-CSF水平在宫颈癌患者中异常升高,且与宫颈上皮内瘤病变级别呈正相关,提示M2-PK及GM-CSF可能共同参与了宫颈癌发病机制。

肿瘤组织Ki-67、NEK2表达对食管鳞状细胞癌患者预后的影响分析

目的探讨肿瘤组织Ki-67、细胞周期相关蛋白激酶2(NEK2)表达对食管鳞状细胞癌患者预后的影响。方法选取156例食管鳞状细胞癌患者,采用免疫组化染色法检测Ki-67、NEK2表达,分析Ki-67、NEK2表达与临床病理特征的关系,以及与患者无进展生存期的关系。结果低分化组织Ki-67和NEK2阳性表达率为97.78%和93.33%,明显高于中高分化组织(P<0.05);TNM分期Ⅲ期组织Ki-67和NEK2阳性表达率分别为97.73%和73.21%,明显高于Ⅰ~Ⅱ期组织(P<0.05);有淋巴结转移组织Ki-67和NEK2阳性表达率为94.12%和86.27%,明显高于无淋巴结转移组织(P<0.05);肿瘤直径≥2 cm组织NEK2阳性表达量为76.12%,明显高于肿瘤直径<2 cm组织(P<0.05);食管鳞状细胞癌组织Ki-67与NEK2表达呈正相关(r=0.372,P<0.05);Ki-67和NEK2阳性表达、Ki-67或NEK2单一阳性表达患者无进展生存期分别为33个月(95%CI:31.29~34.71)和32个月(95%CI:30.14~33.86),明显少于Ki-67和NEK2阴性表达患者48个月(95%CI:45.60~51.75),差异比较有统计学意义(P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌组织Ki-67、NEK2表达与临床病理特征以及患者无进展生存期有一定关系,值得进一步研究。

ROCK2和KLF6在急性缺血性脑卒中的表达变化及其与病情程度和预后的相关性

目的探究Rho相关蛋白激酶2(ROCK2)和Krüppel样因子6(KLF6)在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清表达变化及其与病情程度和预后的相关性。方法选取2021年1月至2023年3月在我院确诊的117例AIS患者作为研究组,另选120例在我院同期体检健康者作为对照组。根据美国国立卫生院神经功能缺损(NIHSS)评分,将患者分为轻度(46例)、中度(40例)、重度(31例)组。根据改良Rankin量表将患者分为预后良好(74例)和预后不良(43例)组。酶联免疫吸附试验测定血清ROCK2和KLF6水平。Spearman分析ROCK2和KLF6水平与NIHSS评分的关系;多因素Logistic回归分析AIS患者预后不良的危险因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ROCK2和KLF6水平对AIS患者预后不良的预测价值。结果与对照组相比,研究组ROCK2和KLF6水平显著增加(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组ROCK2和KLF6水平及NIHSS评分显著增加(P<0.05),与中度组相比,重度组ROCK2和KLF6水平及NIHSS评分显著增加(P<0.05)。相关性分析结果显示,ROCK2和KLF6水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.605,0.632,P<0.001)。与预后良好组相比,预后不良组患者ROCK2和KLF6水平显著增加(P<0.05)。ROCK2、KLF6单独及联合预测AIS患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.886(95%CI 0.822~0.949)、0.850(95%CI 0.770~0.930)、0.954(95%CI 0.919~0.988)。预后良好组与预后不良组患者总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平及NIHSS评分比较差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示TG水平、NIHSS评分、ROCK2和KLF6是AIS患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论AIS患者ROCK2和KLF6表达上调,其水平与病情程度及预后不良密切相关。

鼻咽癌组织中JAK2、STAT3表达及与其临床病理特征的相关性分析

目的分析Janus激酶2(JAK2)、信号传导和转录激活因子3(STAT3)在鼻咽癌组织内的表达及与其临床病理特征的关系。方法选取59例鼻咽癌患者,采集其癌组织与癌旁正常组织(距肿瘤组织边缘≥3 cm)分别纳入观察组与对照组,采用免疫组化法测定两组的JAK2、STAT3表达;另收集患者的年龄、性别等资料,分析JAK2、STAT3表达与其临床病理特征的关系。结果观察组JAK2、STAT3阳性表达率高于对照组,有统计学差异(P<0.05);JAK2、STAT3表达与鼻咽癌患者年龄、性别、吸烟史无关(P>0.05);与鼻咽癌临床分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05);JAK2、STAT3阳性表达患者的生存率低于JAK2、STAT3阴性表达患者,有统计学差异(P<0.05)。结论JAK2、STAT3在鼻咽癌组织内呈异常的高表达,两者与患者的临床分期、分化程度、淋巴结转移存在紧密联系,且其表达越高,患者生存率越低。

肿瘤相关巨噬细胞PKM2表达对食管癌细胞恶性表型的影响

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associated macrophages,TAMs)中M2型丙酮酸激酶(Pyruvate kinase M2,PKM2)表达对食管癌细胞迁移、侵袭恶性表型的影响。方法慢病毒转染PKM2敲低/过表达质粒至THP-1细胞并诱导分化为TAMs,随机分为PKM2敲低组(PKM2 KD组)、PKM2敲低对照组(PKM2 KD NC组)、PKM2过表达组(PKM2 OE组)和PKM2过表达对照组(PKM2 OE NC组)。qRT-PCR检测PKM2及巨噬细胞表型标志物的表达;进一步与食管癌KYSE150细胞共培养后,Transwell实验检测食管癌细胞迁移和侵袭能力变化。将共培养细胞混合接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型,免疫组化检测PKM2和CD163的表达,ELISA检测葡萄糖和乳酸水平。结果与PKM2 KD NC组相比,PKM2 KD组TAMs细胞内PKM2表达水平显著降低,NOS2表达上调(P均<0.05),CD163轻微下调(P>0.05),CCL5表达下调(P<0.05);与PKM2 OE NC组相比,PKM2 OE组TAMs细胞内PKM2表达水平显著升高,NOS2表达下调(P均<0.05),CD163轻微上调(P>0.05),CCL5表达上调(P<0.05)。共培养后,与PKM2 KD NC组相比,PKM2 KD组KYSE150细胞迁移和侵袭能力均显著下降(P均<0.001);与PKM2 OE NC组相比,PKM2 OE组KYSE150细胞迁移和侵袭能力均显著增强(P均<0.01)。细胞混合接种后,与CO-PKM2 KD NC组相比,CO-PKM2 KD组裸鼠皮下移植瘤体积和重量均减小(P>0.05),瘤体内PKM2和CD163表达下降(P均>0.05),血清葡萄糖和乳酸水平显著下降(P均<0.05);与CO-PKM2 OE NC组相比,CO-PKM2 OE组裸鼠皮下移植瘤体积和重量均增大(P>0.05),瘤体内PKM2和CD163表达上调(P均>0.05),血清葡萄糖和乳酸水平显著升高(P均<0.05)。结论PKM2表达变化影响TAMs细胞表型分化,而TAMs细胞中PKM2的表达可能通过无氧糖酵解作用,影响食管癌细胞的恶性表型。

基于TCGA数据分析NEK2基因在恶性胸膜间皮瘤中的表达及预后意义

目的 分析永不有丝分裂基因A相关激酶2(NEK2)基因在恶性胸膜间皮瘤(MPM)中的表达及预后意义。方法 下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库MPM基因表达数据、临床病理数据和生存状态数据;使用perl软件和R语言的limma、timeROC等程序包作NEK2基因在MPM中的差异分析、临床病理相关性分析、COX单因素和多因素分析以及基因富集分析,并绘制ROC曲线;利用TIMER2.0数据库分析MPM中NEK2表达与常见的免疫细胞浸润的相关性。选取12例MPM组织和6例非MPM胸膜组织,通过RT-qPCR的方法验证NEK2基因在MPM与非瘤组织中的表达情况。结果 与正常肺组织相比,NEK2在MPM组织中高表达(P<0.001)。NEK2基因mRNA表达量与MPM淋巴结分期具有显著相关性(P<0.05);NEK2高表达与MPM患者预后不良相关(P<0.001);NEK2基因表达与MPM中B淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞浸润水平呈正相关(P<0.05),并在细胞周期、DNA复制、剪接体、mRNA监测等通路显著富集。在收集到的病例样本中,与非MPM胸膜组织相比,NEK2基因在MPM组织中的表达量显著增高(P<0.01)。结论 NEK2在MPM组织中高表达,且NEK2在MPM中高表达提示预后不良,可能成为治疗MPM的潜在靶点。

M2型丙酮酸激酶、自噬相关基因2B蛋白与乳腺浸润性导管癌分子亚型的关系

目的探究M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)、自噬相关基因2B(autophagy related gene 2B,ATG2B)蛋白与乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)分子亚型及临床病理特征的关系。方法选择2018年9月至2019年12月合肥市第二人民医院收治的IDC患者63例为研究对象,采用免疫组织化学法检测患者癌组织及癌旁组织PKM2、ATG2B表达,分析癌组织PKM2、ATG2B表达与临床病理特征及分子亚型的关系;所有患者均随访3年,根据其生存情况分为死亡组及生存组,分析癌组织PKM2、ATG2B表达、临床病理特征及分子亚型对患者预后的影响。结果IDC癌组织PKM2蛋白阳性表达率高于癌旁组织,ATG2B蛋白阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05);不同月经状态、肿瘤直径、临床分期、分化程度及不同淋巴结转移、脉管侵犯情况IDC患者的PKM2阳性表达率对比差异有显著性,不同临床分期、分化程度及不同淋巴结转移、脉管侵犯情况IDC患者的ATG2B阳性表达率比较,差异有显著性(P<0.05);Luminal A型IDC患者癌组织PKM2蛋白阳性表达率高于三阴型,ATG2B蛋白阳性表达率低于三阴型(P<0.05);死亡组中临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为低分化、存在淋巴结转移、脉管侵犯的人数比例及PKM2蛋白阳性表达率高于生存组,ATG2B蛋白阳性表达率低于生存组(P<0.05);临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为低分化、存在淋巴结转移、脉管侵犯的人数比例及PKM2蛋白阳性是影响IDC患者预后的危险因素(P<0.05)。结论IDC癌组织PKM2蛋白阳性表达与临床病理特征及分子亚型有关,且PKM2蛋白阳性是影响IDC患者预后的危险因素。

紫草素对糖尿病周围神经病变大鼠的治疗作用及对腺苷酸活化蛋白激酶/核因子E2相关因子2信号通路的影响

目的:探究紫草素对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠的治疗作用及对腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响。方法:构建DPN模型,将建模成功的48只大鼠随机分为模型组、紫草素低剂量组、紫草素高剂量组和甲钴胺片组,每组12只。另取12只大鼠作为对照组。紫草素低、高剂量组大鼠分别给予12.5、25 mg/kg紫草素灌胃,甲钴胺片组大鼠给予0.14 mg/kg甲钴胺片灌胃,对照组和模型组大鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,每日给药1次,连续8周。观察各组大鼠坐骨神经病理学变化。检测大鼠坐骨神经感觉神经传导速度(SNCV)和运动神经传导速度(MNCV),血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β,坐骨神经超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平。结果:对照组大鼠坐骨神经结构正常;模型组大鼠坐骨神经髓鞘变薄,出现白色结缔物质,间隙加宽,可见明显炎症细胞浸润;紫草素低、高剂量组大鼠坐骨神经病变程度依次减轻;甲钴胺片组和紫草素高剂量组大鼠坐骨神经病理学变化无明显差异。与对照组比较,坐骨神经SNCV和MNCV、血清SOD水平以及坐骨神经AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平显著降低,血清TNF-α、IL-6及坐骨神经MDA水平显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,坐骨神经SNCV和MNCV、血清SOD水平以及坐骨神经AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平依次升高,血清TNF-α、IL-6及坐骨神经MDA水平依次降低(均P<0.05)。甲钴胺片组和紫草素高剂量组上述各项指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:紫草素能抑制DPN大鼠炎症反应和氧化应激,保护大鼠坐骨神经,其机制可能与激活AMPK/Nrf2信号通路有关。

IgA肾病患者血清Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2、视黄醇结合蛋白4表达水平及在评估病情和预测预后中的价值研究

目的检测IgA肾病(immunoglobulin A nephropathy,IgAN)患者血清Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(rho associated coiled coil containing protein kinase 2,ROCK2)、视黄醇结合蛋白4(retinol-binding protein 4,RBP4)表达水平,分析二者在评估患者病情及预测预后中的价值。方法选取2016年6月至2019年6月98例中国贵航集团302医院已确诊收治的IgAN患者为IgAN组,其中轻度IgAN 36例、中度IgAN 32例、重度IgAN 30例;同期选择在中国贵航集团302医院体检的健康者100名为对照组。酶联免疫吸附法检测血清中ROCK2、RBP4水平;采用Kaplan-Meier生存曲线分析ROCK2、RBP4表达水平与IgAN患者预后的关系;Pearson相关性分析ROCK2与RBP4表达相关性;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析ROCK2、RBP4对IgAN的诊断价值;比例风险回归模型法分析IgAN患者预后的影响因素。结果IgAN组血清中ROCK2、RBP4表达水平分别为(24.25±5.31)μg/L、(59.70±9.43)μg/L,显著高于对照组的(15.57±4.16)μg/L、(32.14±7.82)μg/L,差异具有统计学意义(t=12.818、22.404,均P<0.001);轻度、中度、重度IgAN患者血清中ROCK2水平分别为(18.69±4.36)μg/L、(23.75±5.31)μg/L、(31.46±5.62)μg/L,RBP4表达水平分别为(45.37±7.86)μg/L、(62.48±8.12)μg/L、(73.94±8.65)μg/L。随着病情的加重,IgAN患者血清ROCK2、RBP4表达水平逐渐升高,差异具有统计学意义(F=51.854、102.234,均P<0.05);IgAN患者血清中ROCK2、RBP4表达水平与Lee氏分级、IgA/C3比值、病情程度有关(P<0.05);ROCK2、RBP4高表达组患者预后生存率分别为60.00%、74.19%,均显著低于低表达组的89.71%、91.67%,差异具有统计学意义(log rankχ^(2)=4.674,P=0.031);ROC曲线结果显示,血清ROCK2诊断IgAN的曲线下面积(area under curve,AUC)为0.889,敏感度为80.61%,特异性为80.00%,截断值为18.79μg/L;RBP4诊断IgAN的AUC为0.986,敏感度为96.94%,特异性为95.00%,截断值为41.31μg/L;二者联合检测的AUC为0.997,敏感度为98.98%,特异性为94.86%。Pearson相关性分析显示,IgAN患者血清ROCK2与RBP4表达水平呈显著正相关(r=0.701,P<0.001);多因素比例风险回归模型法分析表明,IgA/C3(OR=2.683,95%CI:1.060~6.794)、ROCK2(OR=1.831,95%CI:1.027~3.264)、RBP4(OR=1.517,95%CI:1.104~2.084)均是IgAN患者预后生存的影响因素(均P<0.05)。结论ROCK2、RBP4在IgAN患者血清中高表达,二者与IgAN患者的临床病理特征、病情严重程度及预后关系密切,ROCK2、RBP4表达水平对IgAN的诊断具有一定的价值。

中药千金子二萜醇对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白2的影响

目的探讨中药千金子二萜醇对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白(Skp)2表达的影响。方法建立肾癌786-0细胞移植瘤裸鼠模型,分为对照组和实验组,每组8只。对照组移植瘤裸鼠灌胃等体积的生理盐水,实验组移植瘤裸鼠灌胃20 mg/kg千金子二萜醇溶液,21 d后处死裸鼠,取出瘤体,然后采用免疫组化(SP)法检测Skp2的表达。结果两组Skp2在裸鼠的瘤体中表达率差异显著(P=0.04)。结论中药千金子二萜醇对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白2的表达有一定的抑制作用。

宫颈癌组织中NEK2和circPITX1的表达水平与放疗敏感度及预后的相关性研究

目的探讨宫颈癌组织中中心体相关激酶2(never in mitosis geneA related kinase-2,NEK2)和环状RNA配对同源结构域基因1(circRNA paired homology domain gene 1,circPITX1)表达与放疗敏感度及预后的关系。方法选取2017年1月~2018年1月四川大学华西三亚医院接受放疗治疗的82例宫颈癌患者为研究对象。依据放疗后病灶退缩情况评价放疗疗效,分为放疗抵抗组(n=51)和放疗敏感组(n=31)。应用免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHCS)检测宫颈癌癌组织和癌旁组织中NEK2蛋白表达。采用荧光实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测circPITX1mRNA和NEK2mRNA表达。统计学分析癌组织中circPITX1mRNA和NEK2 mRNA与放疗敏感度、临床病理特征的关系。采用KaplanMeier生存曲线分析宫颈癌患者circPITX1mRNA和NEK2 mRNA表达水平与患者生存预后的关系。COX回归分析宫颈癌患者预后不良的危险因素。结果宫颈癌癌组织中NEK2蛋白表达阳性率[85.37%(70/82)]高于癌旁组织[12.20%(10/82)],差异有统计学意义(χ^(2)=87.857,P<0.05)。癌组织中circPITX1mRNA(1.92±0.24),NEK2 mRNA表达(2.04±0.31)高于癌旁组织(0.81±0.20,0.93±0.27)表达,差异均有统计学意义(t=32.174,24.450,均P<0.05)。宫颈癌组织中NEK2 mRNA与circPITX1mRNA表达呈显著正相关(r=0.618,P<0.05)。FIGO分期ⅢA~ⅢB期宫颈癌患者NEK2 mRNA(2.54±0.23),circPITX1mRNA(2.33±0.19)表达明显高于IIB期患者(1.17±0.40,1.21±0.30)表达,差异均有统计学意义(t=19.730,20.710,均P<0.05)。宫颈癌放疗抵抗组NEK2 mRNA(2.39±0.38),circPITX1mRNA(2.50±0.21)均显著高于放疗敏感组(1.83±0.28,0.97±0.28),差异有统计学意义(t=7.109,28.149,均P<0.05)。NEK2 mRNA[(48.78%(20/41)]和circPITX1mRNA[54.76%(23/42)]高表达组的三年总生存率显著低于NEK2 mRNA[90.24%(37/41)],circPITX1 mRNA低表达组[85.00%(34/40)],差异均有统计学意义(χ^(2)=5.118,4.890,均P<0.05);NEK2 mRNA[(26.10±3.62)个月]和circPITX1mRNA[(25.87±3.81)个月]高表达组的平均生存时间显著短于NEK2 mRNA[(33.25±4.09)个月]和circPITX1mRNA低表达组[(32.02±4.02)个月],差异均有统计学意义(t=8.382,7.140,均P<0.05)。FIGO分期ⅢA~ⅢB(HR=3.754,95%CI:1.621~8.694),NEK2 mRNA高表达(HR=2.874,95%CI:2.504~3.497),circPITX1mRNA高表达(HR=2.679,95%CI:2.485~3.184)是宫颈癌患者预后不良的独立危险因素(均P均<0.05)。结论NEK2和circPITX1在宫颈癌组织中表达升高,可成为放疗敏感度及预后预测的标志物。

2种Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶对经皮冠状动脉介入治疗无复流的预测价值

目的探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)1和ROCK2对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)无复流的预测价值。方法选取168例接受PCI的STEMI患者作为研究对象,根据是否发生无复流分为无复流组和血流正常组,并分别根据ROCK1、ROCK2表达情况分为高表达组和低表达组。使用酶联免疫吸附试剂盒检测患者血清ROCK1、ROCK2水平,分析无复流组与血流正常组的血清ROCK1、ROCK2水平差异,分析STEMI患者PCI无复流的危险因素,并分析ROCK1、ROCK2对STEMI患者PCI无复流的预测价值。结果168例STEMI患者中,46例发生无复流,发生率为27.38%。无复流组的Killip分级、发病至入院时间、未使用预防性无复流药物者占比、血清ROCK1水平、血清ROCK2水平高于或长于血流正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROCK1高表达组的无复流发生率高于ROCK1低表达组,ROCK2高表达组的无复流发生率高于ROCK2低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logsitic回归分析显示,Killip分级为Ⅲ~Ⅳ级、发病至入院时间较长、未使用预防性无复流药物、血清ROCK1水平较高、血清ROCK2水平较高均为STEMI患者PCI无复流的独立危险因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线显示,ROCK1、ROCK2对STEMI患者PCI无复流的预测价值较高,且两者联用后预测价值提升,曲线下面积为0.789(95%CI:0.711~0.867)。结论血清ROCK1、ROCK2水平较高是STEMI患者PCI无复流的危险因素,两者联合检测对PCI无复流具有较高的预测价值。

S期激酶相关蛋白2、CD147及穿膜蛋白1在骨肉瘤中的表达及与疾病恶性程度及与疾病恶性程度、预后的关系

目的 分析S期激酶相关蛋白2(SKP2)、CD147及穿膜蛋白1(DLK1)在骨肉瘤中的表达及与疾病恶性程度和预后的关系。方法 检测103例骨肉瘤患者骨肉瘤组织与癌旁组织中SKP2、CD147及DLK1的表达情况,并分析SKP2、CD147及DLK1表达与骨肉瘤患者临床特征和预后的关系。结果 骨肉瘤组织中SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随着骨肉瘤患者临床分期逐渐增高,SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均逐渐升高。血管扩张型骨肉瘤患者SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均高于软骨母细胞型和骨母细胞型患者,软骨母细胞型骨肉瘤患者SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均高于骨母细胞型患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。预后良好与预后不良骨肉瘤患者肿瘤转移、肿瘤分型及SKP2、CD147、DLK1表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多元Logistic回归分析结果显示,SKP2、CD147、DLK1阳性表达及肿瘤转移均是骨肉瘤患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.01)。结论 SKP2、CD147、DLK1在骨肉瘤中呈高表达,且对疾病恶性程度、预后有较大的评估价值,可进一步研究证实。

S期激酶相关蛋白2在胃癌患者中的表达及其与疾病进展的关系探讨

目的:探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)在胃癌患者中的表达情况,分析其与胃癌疾病进展的相关性。方法:选取2020年2月—2021年10月宜兴市人民医院收治的70例胃癌患者为胃癌组,选取同期20名正常体检者为正常组。采用免疫组化染色方式对两组的Skp2 mRNA的表达量进行检测,对比两组患者组织中的Skp2蛋白阳性表达率及两组的Skp2 mRNA表达量。结果:①胃癌组的Skp2 mRNA的表达量显著高于正常组(P<0.05),且处于进展期的胃癌患者,其Skp2 mRNA的表达量多于早期胃癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);②胃癌组的Skp2阳性表达率高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);③经分析显示,在是否发生淋巴结转移,不同组织学分化程度,不同肿瘤TNM分期、不同肿瘤浸润程度的胃癌组织中的Skp2阳性表达率相比具有显著的差异(P<0.05)。结论:S期激酶相关蛋白2在胃癌患者中具有较高的表达量,并且在胃癌转化过程中具有重要的参与作用。

金合欢素调节Sirt1/AMPK/Nrf2信号通路对糖尿病白内障大鼠氧化应激损伤的影响

目的探讨金合欢素对糖尿病白内障(DC)大鼠氧化应激损伤的影响及其对沉默调节蛋白1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的调控作用。方法60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组、金合欢素+Sirt1抑制剂(EX527)组,除对照组以外均构建DC大鼠模型,其中,金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组大鼠分别经颈部皮下注射10 mg·kg^(-1)、20 mg·kg^(-1)的金合欢素,金合欢素+EX527组大鼠经颈部皮下注射20 mg·kg^(-1)金合欢素,均为每天2次,同时金合欢素+EX527组大鼠经皮下埋入渗透微型泵每天泵入3.5 mg·kg^(-1)EX527,其余组别均泵入等量生理盐水,给药持续4周。给药结束后,测量血压和空腹血糖(FBG),裂隙灯照射法观察大鼠晶状体混浊状况,HE染色观察晶状体组织病理学变化,ELISA测定血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量,Western blot检测Sirt1、p-AMPK、AMPK、Nrf2蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠晶状体上皮细胞呈片状、条索状,发生迁移性聚集,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P<0.05);与模型组比较,金合欢素低、高剂量组大鼠晶状体上皮细胞迁移性聚集现象改善,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均降低,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均升高(均为P<0.05);与金合欢素高剂量组比较,金合欢素+EX527组晶状体上皮细胞形态改变和聚集现象加重,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P<0.05)。结论金合欢素可能通过激活Sirt1/AMPK/Nrf2通路保护DC大鼠免受氧化应激损伤。

马钱苷调节AKT/AMPK/Nrf2通路改善氧葡萄糖剥夺/复氧诱导的神经元铁死亡的机制研究

目的:探讨马钱苷通过调节蛋白激酶B(AKT)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子-E2相关因子2(Nrf2)通路改善氧葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经元铁死亡的机制。方法:将神经元分为对照组、OGD/R组、OGD/R+L-马钱苷组、OGD/R+M-马钱苷组、OGD/R+H-马钱苷组、OGD/R+H-马钱苷+ML385组。透射电子显微镜观察神经元线粒体形态;检测铁含量、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)活性、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)/氧化型谷胱甘肽(GSSG),还原型辅酶Ⅱ(NADPH)/辅脱氢酶Ⅱ(NADP^(+))及乳酸脱氢酶(LDH)含量;使用CM-H2DCFDA、C11-BODIPY581/591分别检测细胞内和脂质活性氧(ROS)水平;四唑盐(MTT)试剂盒检测细胞活性;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)、剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)/AKT、磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)/AMPK、Nrf2蛋白表达。结果:OGD/R组神经元线粒体出现碎片化现象,嵴减少,线粒体膜密度有所增加。与对照组比较,OGD/R组GSH/GSSG、NADPH/NADP^(+)、SOD、GPX4相对活性、细胞活力以及Bcl-2水平、p-AKT/AKT、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平下降(P<0.05),Fe^(2+)含量、细胞内ROS水平、脂质ROS水平以及4-HNE、MDA水平、LDH释放量、Bax以及cleaved Caspase-3水平上升(P<0.05);马钱苷处理后神经元线粒体中的线粒体嵴变得较为完整,碎片化现象消失,OGD/R+L-马钱苷组、OGD/R+M-马钱苷组、OGD/R+H-马钱苷组较OGD/R组GSH/GSSG、NADPH/NADP^(+)、SOD、GPX4相对活性、细胞活力以及Bcl-2水平、p-AKT/AKT、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平上升(P<0.05),Fe^(2+)含量、细胞内ROS水平、脂质ROS水平以及4-HNE、MDA水平、LDH释放量、Bax以及cleaved Caspase-3水平下降(P<0.05),且随着马钱苷剂量的增加,改善效果更显著;OGD/R+H-马钱苷+ML385组以上指标与OGD/R组趋势一致。结论:马钱苷可能通过调节AKT/AMPK/Nrf2通路改善OGD/R诱导的神经元铁死亡。

穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型PLA2R和IgG4表达的影响及其机制

目的 分析穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠肾组织M型磷脂酶A2受体(Phospholipase A2 receptor, PLA2R)和免疫球蛋白G亚型4(Immunoglobulin G4,IgG4)表达影响及可能机制。方法 将40只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、贝那普利组(10 mg/kg)、低和高剂量穿山龙总皂苷组(80 mg/kg、160 mg/kg),每组各8只。除对照组,其余4组采用Border法制备膜性肾病模型,造模成功后,贝那普利组灌胃给予贝那普利10 mg/(kg·d),低和高剂量穿山龙总皂苷组分别灌胃给予穿山龙总皂苷80 mg/(kg·d)、160 mg/(kg·d),对照组、模型组灌胃给予10 ml/(kg·d)生理盐水。连续给药4周后,检测24 h尿蛋白、白蛋白、血肌酐、血尿素氮、尿酸水平,HE染色观察肾脏病理改变,蛋白免疫印迹法检测肾脏中M型PLA2R、IgG4、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphorylated phosphoinositide 3-kinase, p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase B,p-AKT)、核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶(Heme oxygenase-1,HO-1)表达水平。结果 与模型组比较,贝那普利组、高剂量穿山龙总皂苷组白蛋白水平明显升高,血肌酐、血尿素氮、尿酸水平明显降低,差异均有统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,贝那普利组、低剂量和高剂量穿山龙总皂苷组肾脏病理改变明显改善,24 h尿蛋白水平及肾脏中M型PLA2R、IgG4、p-PI3K、p-AKT表达水平明显降低,肾脏中Nrf2、HO-1表达水平明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 穿山龙总皂苷对膜性肾病大鼠的肾脏具有保护作用,其机制可能与降低PLA2R、IgG4表达,抑制PI3K/AKT通路,激活Nrf2/HO-1通路相关。

AR、SKP2、SOX10、PD-L1及TIL表达在三阴性乳腺癌中的意义

目的:探索雄激素受体(androgen receptor,AR)、S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,SKP2)、性别决定区Y相关的HMG盒含因子10(sry-related HMG box-containing factor 10,SOX10)、程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)及肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)表达与临床病理特征和预后的关系。方法:根据苏木精-伊红染色(hematoxylineosin, HE)染色切片评判109例TNBC瘤巢内TIL的比例,采用Leica Bond-Max全自动免疫组化仪检测TNBC组织中AR、SKP2、SOX10、PD-L1的表达。分析以上各生物指标与临床病理特征间的关系,并采用kaplan-Meier、Log-rank进行生存分析。结果:95例患者获得随访,中位随访时间为48个月,中位无病生存时间(disease-free survival, DFS)为42个月,中位总生存时间(overall survival, OS)48个月。在TNBC中,AR阳性表达与淋巴结转移阴性(P=0.009)、肿瘤最大径<2 cm(P=0.008)相关,TIL高表达与低级别TNBC相关(P=0.007),SKP2阳性表达与神经/脉管侵犯阳性(P=0.011)、高级别TNBC相关(P=0.002),SOX10阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.022)、高级别TNBC(P=0.005)相关,PD-L1阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.020)、神经/脉管侵犯阳性(P=0.006)、高级别TNBC(P=0.042)相关。生存分析显示,SKP2、SOX10阳性表达与更差的DFS(P=0.007、P<0.001)和OS(P=0.013、P<0.001)相关,TIL高表达与更好的DFS(P=0.016)及OS(P=0.004)相关。在生物表志物的联合表达中,AR+/SKP2-、AR+/SOX10-与更好的DFS(P=0.004、P<0.001)及OS(P=0.007、P=0.001)相关,SOX10+/低TIL、PD-L1+/低TIL与更差的DFS(P<0.001、P=0.008)及OS(P=0.001、P=0.002)相关,AR-/低TIL者具有更差的OS(P=0.014)。SKP2(HR=4.143,95%CI为1.578~10.875)、SOX10(HR=7.578,95%CI为2.067~27.782)的阳性表达是影响TNBC患者DFS的独立预后因子,SKP2(HR=3.758,95%CI为1.400~10.084)、SOX10(HR=5.131,95%CI为1.316~20.000)及TIL(HR=0.375,95%CI为0.154~0.917)的阳性表达是TNBC患者OS的独立预后因子(P均<0.05)。结论:在TNBC中,AR阳性、TIL高表达与具有更好预后的临床病理特征相关,SKP2、SOX10和PD-L1与具侵袭性的临床病理特征相关。SKP2、SOX10及TIL表达与TNBC预后相关,提示这些生物指标可能成为TNBC新的预后因子,同时它们也有可能成为潜在的治疗靶点。

子宫肌瘤组织中MMP-2、MLCK、SULT1A3表达及与子宫肌瘤发生的相关性

目的:分析基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和硫酸基转移酶1A3(SULT1A3)在子宫肌瘤组织中的表达及与子宫肌瘤发生发展的可能关系。方法:收集2019年1月-2021年6月在本院行手术切除治疗的子宫肌瘤患者60例子宫肌瘤组织和正常子宫组织,分别采用RT-PCR技术和免疫组化法测定MMP-2、MLCK、SULT1A3的mRNA及蛋白表达,分析各指标表达与子宫肌瘤发生的相关性。结果:子宫肌瘤组织MMP-2(1.61±0.23)、MLCK(11.87±1.60)的mRNA相对表达量均高于正常子宫组织(1.05±0.09、6.14±1.02),SULT1A3的mRNA相对表达量(0.69±0.11)低于正常子宫组织(1.65±0.44);子宫肌瘤组织中MMP-2蛋白阳性率(68.3%)、MLCK蛋白阳性率(76.7%)均高于正常子宫组织(25.0%、26.7%),子宫肌瘤组织SULT1A3蛋白阳性率(61.7%)低于正常子宫组织(100.0%)(均P<0.05)。mRNA表达,MMP-2与MLCK呈正相关,MMP-2、MLCK与SULT1A3均呈负相关性;蛋白表达,MMP-2与MLCK蛋白表达呈正相关,MMP-2、MLCK与SULT1A3蛋白表达均呈负相关性(均P<0.05)。结论:子宫肌瘤组织中MMP-2、MLCK呈高表达,SULT1A3呈低表达,且各指标具有相关性,这种异常表达可能与子宫肌瘤的发生有关。