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基因沉默番木瓜环斑病毒复制酶基因(PRSV-Nib)获得抗病毒病番木瓜的研究
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作者 吴清铧 贾瑞宗 +5 位作者 郭静远 杨牧之 胡玉娟 郝志刚 赵辉 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期837-846,共10页
番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistanc... 番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistance,PDR)”的抗病育种策略获得成功广泛应用。然而依赖于序列同源性的抗病性与病毒突变导致多样性增加之间的矛盾成为番木瓜育种科学家的新挑战。本研究拟采用RNAi策略针对复制酶(nuclear inclusion b.Nib)获得广谱抗PRSV番木瓜新种质。通过团队已建立的胚性愈伤诱导-农杆菌介导转化-再生苗诱导的番木瓜遗传转化体系,共获得经过抗性筛选的再生苗52株,通过特异性PCR进行筛选共计获得24株转基因阳性植株。通过对T0代田间自然发病试验中,转基因番木瓜株系抗病性明显高于非转基因对照,其中NibB5-2田间抗病性最优。通过hiTAIL-PCR方法确定NibB5-2插入位点位于第2号染色体supercontig_30的1976766的位置。T1代接种试验中,无病毒积累且无发病症状,初步确认具有良好的病毒抗性,为番木瓜抗病育种提供新思路。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 nib基因 RNA介导的病毒抗性
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cDNA cloning and sequence analysis of NIb gene of soybean mosaic virus 被引量:2
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作者 刘俊君 彭学贤 莽克强 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1995年第2期160-168,共9页
cDNA of soybean mosaic virus (Beijing isolate, SMV-BJ) has been synthesized, using viralgenomic RNA as template and random hexanucleotides as primers. Based on the sequences of SMV-BJ coat protein (CP) gene as well as... cDNA of soybean mosaic virus (Beijing isolate, SMV-BJ) has been synthesized, using viralgenomic RNA as template and random hexanucleotides as primers. Based on the sequences of SMV-BJ coat protein (CP) gene as well as SMV- and WMV-II-related regions, oligonucleotides were made as primers for polymerase chain reaction (PCR). NIb gene of SMV-BJ was amplified by PCR, and cloned into pBluescript SK. The complete sequence was determined. The comparison of NIb genes between SMV-BJ and WMV-II . (USA) shows that similarities for nucleotide sequence reach 80.3%, and the deduced amino acid sequence. 91 3%. In consideration of the high identities in between the CP gene and the 3'-non-coding region between them, WMV-II might be considered as a watermelon strain of SMV Besides, some unexpected sequences were found in the 3'-region of 2 NIb gene clones. Following modification and splicing, a binary vector of NIb gene has been constructed for its expression in higher plant for the purpose of studying the possible replicase-mediated resistance in potyviruses. 展开更多
关键词 SMV nib gene SEQUENCE comparison.
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TuMV-Nib反义基因对大白菜的遗传转化研究 被引量:7
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作者 于占东 赵双宜 +4 位作者 何启伟 王翠花 牟晋华 刘春香 康静 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期1093-1095,共3页
以‘福山包头’大白菜子叶为试材,以Anti-TuMV-Nib为目的基因,利用根癌农杆菌介导法,建立了大白菜再生转化体系,获得转化植株。经PCR-Southern杂交、RT-PCR及ELISA检测,证明外源TuMV-Nib基因已整合到大白菜核基因组中并获得了表达。
关键词 大白菜 芜菁花叶病毒 复制酶基因 遗传转化
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土传线状小麦黄花叶病毒浦江分离物NIb基因的克隆及序列分析 被引量:1
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作者 程晔 陈炯 +1 位作者 杨建平 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 1999年第3期109-113,共5页
根据已发表的日本小麦黄花叶病毒(wheatyelowmosaicbymovirus,WYMV)RNA1核苷酸序列,设计了一对引物NIb01/NIb02,用来扩增浙江浦江土传线状小麦黄花叶病毒分离物NIb基因的全长序列... 根据已发表的日本小麦黄花叶病毒(wheatyelowmosaicbymovirus,WYMV)RNA1核苷酸序列,设计了一对引物NIb01/NIb02,用来扩增浙江浦江土传线状小麦黄花叶病毒分离物NIb基因的全长序列。以表现典型病症的小麦植株病叶总RNA为模板,Oligod(T)18为引物合成第一链cDNA,用RTPCR法扩增浦江分离物NIb全长基因,并将此基因直接克隆到pGEMT质粒中,进行全序列测定。结果表明该分离物与日本WYMV相应序列具有很高的同源性,而与小麦梭条斑花叶病毒(WSSMV)存在很大的差异,因此认为浦江病毒分离物为WYMV。 展开更多
关键词 小麦黄花叶病毒 nib基因 克隆 序列测定
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番木瓜环斑病毒复制酶(亚基)基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建 被引量:8
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作者 刘俊君 彭学贤 莽克强 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期283-287,共5页
近二年报道,在TMV、PVX、PEBV和CMV等病毒中,利用病毒编码的复制酶(亚基)基因或相关cDNA片段转化烟草,工程植株获得绝对或极高的病毒抗性。大量研究认为:马铃薯Y病毒组的核内含体大分子量蛋白(NIb)是依赖于RNA的RNA复制酶(或核心亚基),... 近二年报道,在TMV、PVX、PEBV和CMV等病毒中,利用病毒编码的复制酶(亚基)基因或相关cDNA片段转化烟草,工程植株获得绝对或极高的病毒抗性。大量研究认为:马铃薯Y病毒组的核内含体大分子量蛋白(NIb)是依赖于RNA的RNA复制酶(或核心亚基),NIb与上述病毒的复制酶有广泛的同源保守区。 展开更多
关键词 番木瓜 环斑病毒 复制酶基因
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玉米矮花叶病毒北京分离物复制酶基因的克隆及序列分析 被引量:2
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作者 陈红运 范在丰 +1 位作者 邓丛良 李怀方 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期33-36,共4页
以 MDMV北京分离物 RNA为模板 ,采用 RT- PCR方法扩增了含复制酶 (NIb)基因的 DNA片段 ,将其克隆到 p UC18载体上并进行序列分析。结果表明 :NIb基因由 15 6 3个碱基组成 ,编码 5 2 1个氨基酸并含有高度保守基序 GDD。NIa/ NIb和 NIb/ C... 以 MDMV北京分离物 RNA为模板 ,采用 RT- PCR方法扩增了含复制酶 (NIb)基因的 DNA片段 ,将其克隆到 p UC18载体上并进行序列分析。结果表明 :NIb基因由 15 6 3个碱基组成 ,编码 5 2 1个氨基酸并含有高度保守基序 GDD。NIa/ NIb和 NIb/ CP交界处的蛋白酶切割位点分别为 Q/ C和Q/ S。 NIb基因 (北京分离物 )在碱基数目上与保加利亚分离物完全一致 ,二者的核苷酸及氨基酸序列同源性分别为 70 .6 %和 76 .6 % ,而与 SCMV- SC的核苷酸及氨基酸序列同源性则高达 81.3%和92 .1%。 展开更多
关键词 玉米 矮花叶病毒 复制酶基因 克隆 序列分析
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马铃薯Y病毒复制酶基因的转基因烟草对PVY的抗性 被引量:4
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作者 孙启达 张友谊 +2 位作者 赵文明 项瑜 彭学贤 《西北农业学报》 CAS CSCD 1996年第2期56-60,共5页
将农杆菌LBA4404/pAL4404、pBin438双元载体上的NIb基因正义序列、反义序列、5′-缺失序列及新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)转入烟草品种NC89的染色体,获得抗卡那霉素的转化再生烟草植株。经抗性筛... 将农杆菌LBA4404/pAL4404、pBin438双元载体上的NIb基因正义序列、反义序列、5′-缺失序列及新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)转入烟草品种NC89的染色体,获得抗卡那霉素的转化再生烟草植株。经抗性筛选、PCR检测、无性扩繁和大量重复抗病鉴定,结果表明,转化烟草植株DNA中整合了外源目的基因;NIb基因正义序列、5′-缺失序列转化再生植株中,均出现抗10μg/mlPVY侵染的植株;NIb基因反义序列转化再生植株仅部分抗5μg/mlPVY侵染。ELISA分析认为抗性植株无病毒累积。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 转基因烟草 抗病性 基因工程
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