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和厚朴酚增强NK-92细胞对KG-1a细胞的杀伤作用及机制研究 被引量:5
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作者 张海鹏 陈景 +5 位作者 陈秀云 叶汉深 李军 张普山 佘妙容 李晓红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期475-480,共6页
目的:观察和厚朴酚是否增强NK-92细胞对人急性髓细胞白血病KG-1a细胞的杀伤作用,并探讨其机制。方法:CCK8法检测和厚朴酚对KG-1a细胞的毒性作用,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测NK-92细胞对KG-1a细胞的杀伤作用,流式细胞... 目的:观察和厚朴酚是否增强NK-92细胞对人急性髓细胞白血病KG-1a细胞的杀伤作用,并探讨其机制。方法:CCK8法检测和厚朴酚对KG-1a细胞的毒性作用,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测NK-92细胞对KG-1a细胞的杀伤作用,流式细胞术检测和厚朴酚对KG-1a细胞凋亡的影响以及KG-1a细胞表面自然杀伤细胞2族成员D(natural killer group 2,member D,NKG2D)配体ULBP1、ULBP2和ULBP3的表达。结果:CCK8实验结果显示,随着和厚朴酚浓度的增高,KG-1a细胞的活力逐渐降低,但24 h后KG-1a细胞活力仍大于40%。LDH实验表明,10μmol/L的和厚朴酚处理KG-1a细胞24 h后,NK-92细胞对KG-1a细胞的杀伤率比用药前显著提高(P<0.01)。流式细胞术结果证实,和厚朴酚处理24 h后,在效靶比为5∶1时,NK-92细胞诱导KG-1a细胞的凋亡率显著高于未处理组(P<0.01)。同时,KG-1a细胞表面NKG2D配体(ULBP1、ULBP2和ULBP3)的表达显著高于未处理组(P<0.05)。结论:和厚朴酚可以通过上调KG-1a细胞表面NKG2D配体的表达增强NK-92细胞对KG-1a细胞的杀伤作用。 展开更多
关键词 和厚朴酚 KG-1a细胞 nk-92细胞 nkG2D配体 急性髓细胞白血病
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靶向PSCA的CAR-NK-92细胞对宫颈癌的抗瘤作用
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作者 马欢 张贤雨 +5 位作者 张飞 李锦秋 卢秀荣 原娜 郝晓慧 张志林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1345-1350,共6页
目的:构建并验证靶向前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的NK-92细胞对宫颈癌的抗瘤活性。方法:构建PSCA靶向的CAR慢病毒表达载体,利用慢病毒感染法获得PSCA CAR-NK... 目的:构建并验证靶向前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的NK-92细胞对宫颈癌的抗瘤活性。方法:构建PSCA靶向的CAR慢病毒表达载体,利用慢病毒感染法获得PSCA CAR-NK-92细胞。用流式细胞术及Western blotting实验检测宫颈癌细胞中PSCA的表达水平。通过体外效靶细胞共孵育实验以及体内裸鼠移植瘤模型中的治疗情况,验证PSCA CAR-NK-92细胞对宫颈癌Hela及MS751细胞杀伤能力及其裸鼠移植瘤生长的抑制能力。结果:成功构建PSCA CAR-NK-92细胞,PSCA在宫颈癌细胞中高表达(均P<0.01)。体外共孵育结果显示,PSCA CAR-NK-92细胞可以以剂量依赖的方式裂解PSCA+的宫颈癌细胞;体内抗肿瘤数据表明,PSCA CAR-NK-92细胞较转染空载体的NK-92细胞显著抑制宫颈癌移植瘤的生长(P<0.01),并且可以有效地浸润肿瘤组织并高水平分泌TNF-α和IFN-γ(均P<0.01)。结论:靶向PSCA的CAR-NK-92细胞在体内外都显示出了良好的对PSCA+肿瘤细胞的杀伤能力,有潜力成为一种针对宫颈癌的潜在治疗策略。 展开更多
关键词 前列腺干细胞抗原 宫颈癌 nk-92细胞 裸鼠移植瘤 免疫治疗
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肿瘤细胞表面NK细胞配体的表达及其对NK-92细胞的敏感性
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作者 朱慧芬 黄宏 +4 位作者 符明鹏 郭子龙 雷萍 沈关心 何勇 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期383-387,共5页
目的分析肿瘤细胞表面NK细胞配体的表达及其对NK-92细胞的敏感性,以期获得对不同肿瘤的最佳治疗效果。方法采用半定量RT-PCR方法,测定8种肿瘤细胞(K562、Raji、U937、Molt-4、Jurkat、HepG2、Hela、PC3)的9种NK配体(MICA、MICB、ULBP1、... 目的分析肿瘤细胞表面NK细胞配体的表达及其对NK-92细胞的敏感性,以期获得对不同肿瘤的最佳治疗效果。方法采用半定量RT-PCR方法,测定8种肿瘤细胞(K562、Raji、U937、Molt-4、Jurkat、HepG2、Hela、PC3)的9种NK配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、CD58、Nectin-2、CD155、LLT-1、HLA-E)。通过羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)和碘化丙啶(PI)双标记测定NK-92细胞对这些肿瘤细胞的杀伤活性。结果根据肿瘤细胞对NK-92的敏感性将肿瘤细胞分为两组(敏感组和中度敏感组),K562、Raji、U937、Molt-4对NK-92细胞敏感性高,Jurkat、HepG2、Hela、PC3对NK-92细胞中度敏感。CD58和HLA-E的转录水平在两组之间的差异具有统计学意义(P值分别为0.002和0.006),CD58的表达在敏感组高于中度敏感组,而HLA-E的表达在敏感组低于中度敏感组。结论 CD58hi或HLAElow的肿瘤细胞对NK-92的杀伤作用更敏感,因此,肿瘤细胞CD58和HLA-E的表达测定可以作为临床NK细胞治疗的肿瘤检测标志。 展开更多
关键词 nk-92细胞 肿瘤细胞系 nk激活性受体 nk抑制性受体 细胞毒性
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Ad5F11p-GFP对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响 被引量:1
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作者 徐赞美 陆颖 +4 位作者 赵兰君 刘金 胡显文 吴祖泽 段海峰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期873-877,共5页
目的:研究Ad5F11p载体对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响,预测Ad5F11p载体在免疫治疗中的应用。方法:用Ad5F11p-GFP以不同的MOI(转染复数)转染原代免疫细胞CIK和免疫细胞系NK-92,并以未转染病毒的两种免疫细胞作为阴性对照... 目的:研究Ad5F11p载体对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响,预测Ad5F11p载体在免疫治疗中的应用。方法:用Ad5F11p-GFP以不同的MOI(转染复数)转染原代免疫细胞CIK和免疫细胞系NK-92,并以未转染病毒的两种免疫细胞作为阴性对照;用流式细胞术检测荧光阳性细胞比例,用显微镜观察形态学变化,用台盼蓝染色计数分析细胞的增殖,并用LDH法检测NK-92对白血病细胞系K562和HL-60的杀伤作用。结果:25MOI的Ad5F11p-GFP对NK-92的转染效率可以达到大约90%,200 M OI的Ad5F11p-GFP对CIK转染效率不到40%,同一M OI在48 h和96 h时转染效率基本不变;转染Ad5F11p-GFP的免疫细胞容易聚团,增殖减慢,IFN-γ的释放增加并且对肿瘤的杀伤活性增强。结论:Ad5F11p载体修饰的NK-92在过继性免疫治疗中有较好的应用前景。 展开更多
关键词 Ad5F11p-GFP CIK细胞 nk-92细胞 过继性免疫治疗 转染效率
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靶向PD-L1的嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞具有抗A549肺癌细胞增殖活性 被引量:1
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作者 代雯文 王梁 石雪峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期212-217,共6页
目的 探究靶向程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)的嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞在肺癌中的抗肿瘤活性。方法利用慢病毒感染获得嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞(pCAR-92);使用γ干扰素(IFN-γ)诱导肿瘤细胞过表达PD-L1,通过检测乳酸脱氢酶(LDH... 目的 探究靶向程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)的嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞在肺癌中的抗肿瘤活性。方法利用慢病毒感染获得嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞(pCAR-92);使用γ干扰素(IFN-γ)诱导肿瘤细胞过表达PD-L1,通过检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放水平表征pCAR-92细胞对靶细胞A549细胞的细胞毒性,流式细胞术检测pCAR-92细胞中CD107a以及IFN-γ的水平来反映激活状态,通过IFN-γ诱导后的A549细胞NCG小鼠皮下移植建立异种移植瘤模型以验证pCAR-92细胞的体内抗肿瘤活性。结果 流式细胞术检测pCAR-92细胞的感染阳性率为70%~80%,与对照组相比,LDH结果显示pCAR-92细胞可以显著裂解经过IFN-γ诱导的A549细胞,此外,CD107a表达显著上调;pCAR-92细胞与IFN-γ诱导的A549细胞共孵育后;与对照组相比,pCAR-92细胞具有更强的抗移植瘤生长能力,且经pCAR-92细胞治疗后肿瘤部位PD-L1的表达降低,肿瘤浸润自然杀伤(NK)细胞的数量增加。结论 靶向PD-L1的嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞具有明显抗肿瘤效果。 展开更多
关键词 肺癌 A549细胞 嵌合抗原受体(CAR) nk-92细胞 程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)
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靶向MUC16的嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞对卵巢癌的抗肿瘤活性 被引量:1
6
作者 王慧峰 王海琳 +3 位作者 范颖芳 王文娣 高文娟 王顺英 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期232-238,共7页
目的:探索靶向MUC16的嵌合抗原受体修饰的NK-92(CARNK-92)细胞对卵巢癌的抗肿瘤活性。方法:通过免疫组化法及流式细胞术检测庆阳市中医医院妇产科卵巢癌外科手术15例患者的肿瘤组织及4种卵巢癌细胞系中MUC16的表达情况。通过全基因合成... 目的:探索靶向MUC16的嵌合抗原受体修饰的NK-92(CARNK-92)细胞对卵巢癌的抗肿瘤活性。方法:通过免疫组化法及流式细胞术检测庆阳市中医医院妇产科卵巢癌外科手术15例患者的肿瘤组织及4种卵巢癌细胞系中MUC16的表达情况。通过全基因合成的方法合成MUC CAR序列并构建重组慢病毒表达载体,利用慢病毒感染的方式制备靶向MUC16的CARNK-92细胞(MUC-BBz)。通过流式细胞术检测MUC-BBz中CD107a的表达,以LDH释放法检测该工程细胞的激活及对靶细胞SKOV3的细胞毒性。建立SKOV3细胞裸鼠移植瘤模型,用来检测MUC-BBz的体内抗肿瘤活性。结果:卵巢癌患者肿瘤组织及人卵巢癌细胞中都高表达MUC16。通过慢病毒感染NK-92细胞成功构建MUC-BBz,其阳性率为(42.79±2.58)%。MUCBBz可以被过表达MUC16的肿瘤细胞特异性激活,与效靶细胞共孵育后,MUC-BBz中CD107a的表达量显著升高(P<0.01)、细胞因子IFN-γ以及穿孔素的分泌能力明显增加(均P<0.01);LDH法检测显示,随着效靶比的增加,对4种卵巢癌细胞hey、COC1、SKOV3、A2780的杀伤作用均显著提高(均P<0.01)。体内移植瘤模型实验结果显示,输注MUC-BBz可以显著抑制裸鼠体内SKOV3细胞移植瘤的生长(P<0.01)。结论:构建的CARNK-92细胞可以在体内外显著抑制卵巢癌细胞的增殖,为进一步评估其临床治疗能力提供重要依据。 展开更多
关键词 卵巢癌 SKOV3细胞 嵌合抗原受体 nk-92细胞 MUC16 干扰素-γ CD107a 穿孔素
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杨梅苷对NK-92细胞活性调节作用
7
作者 吴晓萍 黄璐 刘春宇 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2016年第10期20-22,共3页
目的:研究杨梅苷对NK-92细胞活性的调节作用。方法:除对照组外,5、10、20μM杨梅苷分别培养NK-92细胞,采用MTT法检测杨梅苷对NK-92细胞增殖活性的影响;以人慢性髓原白血病细胞(K-562)为靶细胞,观察杨梅苷对NK-92细胞杀伤活性的影响。采... 目的:研究杨梅苷对NK-92细胞活性的调节作用。方法:除对照组外,5、10、20μM杨梅苷分别培养NK-92细胞,采用MTT法检测杨梅苷对NK-92细胞增殖活性的影响;以人慢性髓原白血病细胞(K-562)为靶细胞,观察杨梅苷对NK-92细胞杀伤活性的影响。采用流式细胞仪检测NK-92细胞表型CD56、CD16、CD25、CD69的表达,NK-92细胞表面活化受体NCR1、NCR2、NCR3的表达。结果:杨梅苷(5、10、20μM)培养36、48 h后,NK-92细胞的增殖活性与对照组相比明显增高;杨梅苷(10、20μM)培养48 h后,NK-92细胞的杀伤活性也明显比对照组高。杨梅苷(10、20μM)刺激后,NK-92细胞表面CD16、CD69表达无明显变化,CD56的表达强度有明显增加,CD25的阳性率和表达强度都有明显增高。同时,杨梅苷给药组中NCR2的表达强度明显高于对照组。结论:杨梅苷对NK-92细胞有增殖作用,可明显增强NK-92细胞对K-562细胞的体外杀伤活性,同时杨梅苷能明显增强CD56、CD25、NCR2的表达。 展开更多
关键词 杨梅苷 nk-92细胞 活性 表面分子
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HIL-15基因修饰的NK-92细胞治疗黑色素瘤
8
作者 于淮海 孙雨飞 +2 位作者 刘祥 金昌洙 付强 《解剖学杂志》 CAS 2019年第2期152-154,160,共4页
目的:研究hyper-IL-15(HIL-15,包含白介素-15及其受体)基因修饰后的NK-92细胞(HIL-15NK-92细胞)是否可以促进NK-92细胞的增殖并增强其对小鼠体内黑色素瘤的杀伤作用。方法:用CCK-8法检测NK-92细胞和HIL-15NK-92细胞增殖的差异;设立空白... 目的:研究hyper-IL-15(HIL-15,包含白介素-15及其受体)基因修饰后的NK-92细胞(HIL-15NK-92细胞)是否可以促进NK-92细胞的增殖并增强其对小鼠体内黑色素瘤的杀伤作用。方法:用CCK-8法检测NK-92细胞和HIL-15NK-92细胞增殖的差异;设立空白对照组、PBS组、NK-92治疗组和HIL-15NK-92治疗组4组体内实验,每组4只C57BL/6雄鼠,皮下接种B16-F10黑色素瘤细胞,观察不同组B16-F10黑色素瘤小鼠肿瘤的生长状况及生存时间。结果:HIL-15基因修饰后的NK-92细胞比NK-92细胞增殖活性显著增强;HIL-15基因修饰后的NK-92细胞治疗组小鼠比NK-92细胞治疗组小鼠的生存期显著延长。结论:HIL-15基因修饰可以促进NK-92细胞的增殖并延长黑色素瘤小鼠的生存期。 展开更多
关键词 nk-92 细胞 基因修饰 细胞增殖 免疫治疗
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磁性搅拌珠制备及在NK-92细胞体外扩增中的应用
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作者 刘洋洋 周乐豪 +2 位作者 郝梦洋 蔡海波 谭文松 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第4期683-689,共7页
悬浮细胞的生长对剪切力较敏感,在搅拌式生物反应器中采用球体搅拌可减少流体剪切力对细胞扩增的影响。为此,研究采用两步法制备海藻酸钠/壳聚糖双组分磁性搅拌珠并将其运用于磁力搅拌瓶,用于NK-92细胞的动态培养。结果显示,当海藻酸钠... 悬浮细胞的生长对剪切力较敏感,在搅拌式生物反应器中采用球体搅拌可减少流体剪切力对细胞扩增的影响。为此,研究采用两步法制备海藻酸钠/壳聚糖双组分磁性搅拌珠并将其运用于磁力搅拌瓶,用于NK-92细胞的动态培养。结果显示,当海藻酸钠质量浓度达到25 mg×mL^(-1)时,磁性搅拌珠的力学性能最佳;用于NK-92细胞扩增时,在保证细胞活性的同时,总细胞扩增倍数以及扩增后的细胞杀伤活性分别可达到(72.63±7.80)倍和(85.57±3.69)%,显著高于T 25培养瓶静态培养时的(22.41±1.46)倍(p<0.05)和(70.53±1.72)%(p<0.05)。研究结果为悬浮细胞动态培养设备的设计提供了新的思路,为免疫细胞的体外扩增提供了技术支持。 展开更多
关键词 nk-92细胞 磁性搅拌珠 海藻酸钠 体外扩增 生物反应器
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IL -15、IL-21和4-1BBL 增强NK-92细胞增殖和细胞毒性的实验研究
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作者 闵静婷 黄艳平 +3 位作者 樊红莲 赵报 汪洪涛 李正红 《现代肿瘤医学》 CAS 2020年第13期2189-2193,共5页
目的:探讨IL-15、IL-21和4-1BBL组成的不同培养体系,对体外扩增的NK-92细胞毒活性的影响。方法:以三质粒系统包被携带IL-15、IL-21和4-1BBL基因的慢病毒,用慢病毒感染的方式制备2组饲养层细胞;筛选后经MMC处理分5组体外扩增NK-92细胞(NK... 目的:探讨IL-15、IL-21和4-1BBL组成的不同培养体系,对体外扩增的NK-92细胞毒活性的影响。方法:以三质粒系统包被携带IL-15、IL-21和4-1BBL基因的慢病毒,用慢病毒感染的方式制备2组饲养层细胞;筛选后经MMC处理分5组体外扩增NK-92细胞(NK-92组:NK-92细胞;K562组:K562细胞+NK-92细胞;IL-15组:表达IL-15和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞;IL-21组:表达IL-21和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞;IL-15+IL-21组:表达IL-15和4-1BBL的K562细胞、表达IL-21和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞);通过CCK-8法,乳酸脱氢酶释放法检测体外扩增后NK-92细胞的细胞毒性;ELISA检测NK-92细胞上清中IFN-γ的水平,以评估NK-92细胞的抗肿瘤效应。结果:两组转染后的HEK293FT细胞以及慢病毒感染的K562细胞携带绿色荧光,两组饲养层细胞成功表达目的基因;各组饲养层细胞都能刺激NK-92细胞大量增殖;随着效靶比的逐渐增加,IL-15组扩增后的NK-92细胞毒性显著高于其余各组(P<0.05);效靶比为5∶1和10∶1时,IL-15组NK细胞IFN-γ的释放量显著高于其余各组(P<0.05)。结论:膜结合型IL-15、IL-21与4-1BBL联合都能引起NK-92细胞的大量增殖,且IL-15与4-1BBL联合运用扩增的NK-92细胞有更强的杀伤肿瘤细胞的能力。 展开更多
关键词 nk-92细胞 白细胞介素-15 白细胞介素-21 4-1BB配体 饲养层
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靶向卵巢癌叶酸受体α的CAR-NK-92细胞构建及功能鉴定 被引量:1
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作者 杨宇 敖翔 +7 位作者 李伟强 郭韡 谭燕 敖罗权 何敏 王证程 徐祥 郭建新 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2021年第1期14-19,共6页
目的卵巢叶酸受体α(αFR)在上皮性卵巢癌中高表达。文章拟构建靶向αFR的嵌合抗原受体(CAR)修饰NK-92细胞(NK-92-αFR-CAR),并验证其对αFR阳性靶细胞的杀伤效能,为卵巢癌的临床治疗提供新策略。方法选择偏爱密码子技术设计人源化抗αF... 目的卵巢叶酸受体α(αFR)在上皮性卵巢癌中高表达。文章拟构建靶向αFR的嵌合抗原受体(CAR)修饰NK-92细胞(NK-92-αFR-CAR),并验证其对αFR阳性靶细胞的杀伤效能,为卵巢癌的临床治疗提供新策略。方法选择偏爱密码子技术设计人源化抗αFR抗原的CAR分子基因;构建慢病毒表达载体pLenti-αFR-CAR;包装慢病毒并感染NK-92细胞;Western blot、qPCR及流式细胞术检测αFR-CAR分子在NK-92细胞中的表达效率。LDH释放实验和ELISA检测NK-92-αFR-CAR细胞对αFR阳性卵巢癌细胞的杀伤活性。结果双酶切pLenti-αFR-CAR重组质粒可见分子质量和αFR-CAR分子一致的基因片段。Western blot和qPCR证明αFR-CAR分子在NK-92细胞中确有表达,并且经嘌呤霉素筛选后,αFR-CAR的表达效率超过90%。NK-92-αFR-CAR细胞对卵巢癌细胞的杀伤效应及细胞因子分泌水平呈抗原依赖性,即肿瘤细胞表面αFR表达水平越高,NK-92-αFR-CAR细胞对其杀伤效应越强。NK-92-αFR-CAR细胞与SK-OV-3细胞或A2780细胞共培养后,其IFN-γ分泌水平(5007.81±180.37、2668.30±180.37)较NK-92细胞(360.80±8.44、285.86±12.39)和NK-92-EV细胞(378.75±21.76、292.10±21.76)表达更高(P<0.01);TNF-α分泌水平(964.27±74.95、585.73±83.53)较NK-92细胞(247.92±5.96、231.03±10.47)和NK-92-EV细胞(230.04±13.66、215.13±7.89)表达更高(P<0.01)。但与A-431细胞共培养,3种细胞中IFN-γ和TNF-α表达差异无统计学意义(P<0.05)。结论NK-92-αFR-CAR细胞具有分泌大量IFN-γ和TNF-α细胞因子并特异杀伤αFR阳性卵巢癌细胞的能力,这为NK-92-αFR-CAR细胞进入后续的临床前和临床研究奠定了基础。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体修饰nk-92细胞 卵巢癌 叶酸受体Α 肿瘤免疫
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靶向MSLN的CAR-NK-92细胞在胃癌中的抗肿瘤活性研究 被引量:1
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作者 张军 董雅璐 《中国医药导报》 CAS 2020年第19期11-15,F0004,共6页
目的 探索靶向间皮素(MSLN)嵌合抗原受体改造的NK-92细胞在胃癌中的抗肿瘤活性.方法 构建靶向MSLN的二代嵌合抗原受体,利用慢病毒转染的方式将其导入NK-92细胞中得到MSLN CAR-NK-92细胞.通过免疫组化分析、流式细胞术及Western blot实... 目的 探索靶向间皮素(MSLN)嵌合抗原受体改造的NK-92细胞在胃癌中的抗肿瘤活性.方法 构建靶向MSLN的二代嵌合抗原受体,利用慢病毒转染的方式将其导入NK-92细胞中得到MSLN CAR-NK-92细胞.通过免疫组化分析、流式细胞术及Western blot实验检测人胃癌肿瘤组织、人胃癌细胞中MSLN的表达情况.通过体外激活及体内肿瘤抑制实验研究CAR-NK-92细胞的特异性识别能力和抗肿瘤活性.结果 人胃癌肿瘤组织及肿瘤细胞中高表达MSLN.CAR-NK-92细胞可以特异性激活并裂解肿瘤细胞.与转染空载体的NK-92细胞比较,CAR-NK-92细胞可以明显抑制胃癌肿瘤的生长(P<0.01).结论 构建的靶向MSLN的CAR-NK-92在体内外都展现出显著的特异性杀伤MSLN+的胃癌细胞的活性,将有可能在胃癌的治疗中提供新的思路. 展开更多
关键词 胃癌 间皮素 nk-92细胞 免疫治疗
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17β-雌二醇通过microRNA-29b调节NK细胞干扰素γ的分泌 被引量:2
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作者 李鹏飞 郭葳 +3 位作者 赵俊丽 王亚平 胡娅莉 侯亚义 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期418-423,共6页
目的:研究17β-雌二醇(E2)对人自然杀伤细胞株NK92中干扰素γ(IFN-γ)分泌的影响及其可能的机制。方法:用E2和poly I:C处理NK92细胞,分别在4、8、12和24小时后用实时定量PCR、酶联免疫吸附法和流式细胞术测定NK92细胞中IFN-γ的表达情况... 目的:研究17β-雌二醇(E2)对人自然杀伤细胞株NK92中干扰素γ(IFN-γ)分泌的影响及其可能的机制。方法:用E2和poly I:C处理NK92细胞,分别在4、8、12和24小时后用实时定量PCR、酶联免疫吸附法和流式细胞术测定NK92细胞中IFN-γ的表达情况,用实时定量PCR检测microRNA-29b(miR-29b)的变化。进一步,构建含有IFN-γ3'UTR的pEGFP-C1质粒,并转染pre-29b和pEGFP-IFN-γ3'UTR质粒至HEK293A细胞中,用流式细胞术检测绿色荧光蛋白(GFP)的变化。结果:E2抑制NK92细胞的IFN-γ分泌和上调miR-29b的表达;miR-29b能够直接靶向调节IFN-γ3'UTR mRNA。结论:E2可能通过调节NK92的miR-29b而影响IFN-γ的分泌水平,进而影响其免疫功能。 展开更多
关键词 17Β-雌二醇 nk92 miR-29b IFN-Γ
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DNMT1基因沉默增强NK-92对Jurkat细胞杀伤作用及其机制
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作者 武坤 马晓波 +3 位作者 程沈菊 杨金荣 贺振新 郭翀 《现代免疫学》 CAS 2024年第4期295-301,共7页
为了探讨沉默DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)增强NK-92对Jurkat细胞杀伤作用及机制,检测2020年1月-2021年12月35例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓标本的DNMT1水平。si-DNMT1被转染至NK... 为了探讨沉默DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)增强NK-92对Jurkat细胞杀伤作用及机制,检测2020年1月-2021年12月35例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓标本的DNMT1水平。si-DNMT1被转染至NK-92细胞,并与Jurkat细胞共培养,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测对Jurkat细胞的杀伤作用,流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡及NKG2D膜表达。ELISA检测细胞因子IFN-γ水平,Western blotting测定NK-92细胞Syk、ZAP70、p-Syk、p-ZAP70、穿孔素、颗粒酶B表达。结果显示,ALL患者DNMT1水平明显高于对照组(P<0.05);DNMT1对ALL具有诊断价值(AUC:0.692,95%CI:0.533-0.851,P=0.033)。高DNMT1组患者PFS明显低于低DNMT1组患者(P<0.05)。转染si-DNMT1后,NK-92细胞对Jurkat细胞杀伤率、Jurkat细胞凋亡率明显高于si-NC组(P<0.05),分泌NKG2D,及表达穿孔素、颗粒酶B能力明显升高(P<0.05)。si-DNMT1组NK-92细胞生成IFN-γ水平明显高于si-NC组(P<0.05),其p-Syk、p-ZAP70明显高于si-NC组(P<0.05)。综上,DNMT1在ALL中高表达,沉默DNMT1可增强NK-92细胞对Jurkat细胞杀伤作用,其机制可能与增强NK-92细胞记忆功能、激活Syk/ZAP70通路相关。 展开更多
关键词 DNA甲基转移酶1 急性淋巴细胞白血病 nk-92细胞 JURKAT细胞
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免疫细胞联合腺病毒Ad205-IL-15对肝癌细胞的杀伤研究
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作者 徐科 胡贲 +6 位作者 苏虹 胡徐庞 刘佳 杨智 刘立 钱程 魏旭斌 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2012年第1期99-102,共4页
在已有腺病毒Ad205-IL-15的基础上尝试与过继免疫细胞CIK、NK92等联合开展对肝癌细胞的杀伤性研究。首次通过荧光化学发光的原理构建出携带表达萤光素酶报告基因的肝癌细胞系Huh7-Luc、MHCC97H-Luc来检测细胞的存活率。结果表明:免疫细... 在已有腺病毒Ad205-IL-15的基础上尝试与过继免疫细胞CIK、NK92等联合开展对肝癌细胞的杀伤性研究。首次通过荧光化学发光的原理构建出携带表达萤光素酶报告基因的肝癌细胞系Huh7-Luc、MHCC97H-Luc来检测细胞的存活率。结果表明:免疫细胞联合Ad205-IL-15对Huh7-Luc、MHCC97H-Luc两株肝癌细胞表现出了较高协同杀伤作用。证明将免疫细胞与腺病毒联合可以相互弥补各自治疗的不足之处,提高了抗肿瘤效果。同时,由于操作方便,荧光素酶报告基因测定法也为检测细胞存活率提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 腺病毒Ad205-1L-15 CIK nk92 过继免疫 荧光素酶报告基因
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Berberine enhances the anti-hepatocellular carcinoma effect of NK92-MI cells through inhibiting IFN-gamma-mediated PD-L1 expression
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作者 Kunyuan Wang Chengxin Gu +9 位作者 Ganxiang Yu Jiaen Lin Zhilei Wang Qianting Lu Yangzhi Xu Dan Zhao Xiaofeng Jiang Weijian Mai Shiming Liu Hui Yang 《Liver Research》 CSCD 2022年第3期167-174,共8页
Background and aims:Berberine is one of the most promising clinically tested natural alkaloids,and immunotherapy using natural killer(NK)cells is a potentially effective treatment for hepatocellular carcinoma(HCC).Thi... Background and aims:Berberine is one of the most promising clinically tested natural alkaloids,and immunotherapy using natural killer(NK)cells is a potentially effective treatment for hepatocellular carcinoma(HCC).This study aims to elucidate the effect of berberine on the anti-HCC effect of NK92-MI cells.Materials and methods:Human HCC SMMC-7721 and Hep3B cells were co-incubated with NK92-MI cells,berberine(60 or 80 mmol/L),or their combination for 36 h.To evaluate the killing effect of NK92-MI cells on HCC cells,the release of lactate dehydrogenase(LDH)in HCC cells was measured.The anti-tumor effects of berberine,NK92-MI cells,and their combinations were evaluated by MTS,EdU,Tunel,and Western blot assays.A male BALB/c nude mouse subcutaneous tumor model was used to investigate the anti-HCC effect of berberine and NK92-MI cells in vivo.Results:The LDH assay showed that berberine enhanced the cytotoxicity of NK92-MI cells on HCC cells.The combination of berberine and NK92-MI cells demonstrated more obvious anti-HCC effect than did the berberine or NK92-MI single treatment in inhibiting cell proliferation and inducing apoptosis both in vitro and in vivo.Mechanistically,the expression of programmed cell death-ligand 1(PD-L1)in HCC cells was upregulated after co-culture with NK-92MI cells.PD-L1 expression was knocked down,thereby inhibiting the proliferation and promoting apoptosis of HCC cells,and inhibited by berberine that blocked the secretion of interferon gamma(IFN-g),thereby enhancing the anti-tumor effect of NK92-MI cells.Conclusions:Current data show that the immunomodulatory role of berberine is to enhance the cytotoxic effect of NK92-MI cells and inhibit tumor immune escape by reducing the expression of PD-L1.Our study provides a rationale for the clinical application of berberine in combination with NK cells for the treatment of HCC. 展开更多
关键词 BERBERINE Hepatocellular carcinoma(HCC) nk92-MI cells Interferon gamma(IFN-g) Programmed cell death-ligand 1(PD-L1)
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Differential recognition of MHC class I molecules of xeno-/allo-endothelial cells by human NK cells 被引量:1
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作者 冯志民 张晓峰 +1 位作者 王宏芳 丰美福 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2000年第2期176-182,共7页
Using human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and porcine aortic endothelial cells (PAEC) as target cells, human peripheral blood NK cells (PBNK) and NK92 cells as effector cells, the differential cytotoxicitie... Using human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and porcine aortic endothelial cells (PAEC) as target cells, human peripheral blood NK cells (PBNK) and NK92 cells as effector cells, the differential cytotoxicities of NK cells to allo- and xeno-endothelial cells were studied. The influence of MHC class I molecules on the cytotoxicity of human NK cells was assayed using acid treatment, and blockades of MHC class I antigens, CD94 and KIR (NKB1). The results indicated that the killing of PAEC by the two kinds of NK cells is higher than that of HUVEC. After acid-treatment, the cytotoxicity of the two kinds of NK cells to PAEC and HUVEC is significantly enhanced, but the magnitude of the enhancement is different. The enhancement of NK killing to acid treated HUVEC is much greater than that to PAEC. Blockade of CD94 mAb did not alter the NK cytotoxicity, while blockade of NKB1 mAb enhanced the cytotoxicity of PBNK to HUVEC and PAEC by 95% and 29% respectively. The results above suggested that the differential recognition of MHC I molecules of xeno-endothelial cells by human NK cells could be the major reason for higher NK cytotoxicity to PAEC. KIR might be the primary molecule that transduced inhibitory signals when endothelial cells were injured by NK cells. 展开更多
关键词 human UMBILICAL vein ENDOTHELIAL cellS (HUVEC) porcine aortic ENDOTHELIAL cellS (PAEC) peripheral blood natural KILLER cellS (PBnk) nk92 acid treatment MHC class I MOLECULES cytotoxicity.
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HLA-G在卵巢癌组织中的表达及对NK细胞杀伤活性的影响 被引量:4
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作者 王斌梁 章霞 +2 位作者 许惠惠 颜卫华 林爱芬 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期456-461,共6页
通过免疫组织化学法(IHC)检测卵巢癌组织中HLA-G的表达;克隆编码全长HLA-G1cDNA,将该基因通过真核表达载体pVITRO2-mcs转染至HLA-G阴性的HO-8910、OVCAR-3细胞株,采用RT-PCR、流式细胞术(FACS)及Westernblot鉴定、分析转染细胞中HLA-G的... 通过免疫组织化学法(IHC)检测卵巢癌组织中HLA-G的表达;克隆编码全长HLA-G1cDNA,将该基因通过真核表达载体pVITRO2-mcs转染至HLA-G阴性的HO-8910、OVCAR-3细胞株,采用RT-PCR、流式细胞术(FACS)及Westernblot鉴定、分析转染细胞中HLA-G的mRNA及蛋白质表达;LDH释放法检测卵巢癌细胞表达HLA-G后对NK细胞杀伤功能的影响。结果显示,66.7%(22/33)卵巢癌组织表达HLA-G分子,而正常组织未见其表达;基因转染后,HLA-G在HO-8910及OVCAR-3细胞表面获得稳定表达。细胞毒实验结果显示,HLA-G能显著抑制NK-92对卵巢癌细胞的杀伤活性(P<0.01);HLA-G特异性抗体87G阻断后,能明显恢复NK-92细胞对HO-8910-G、OVCAR-3-G的杀伤功能。本研究结果提示,卵巢癌细胞通过表达HLA-G分子抑制NK细胞的杀伤活性,在卵巢癌细胞逃避宿主的免疫监视中起重要作用。 展开更多
关键词 卵巢癌 HO-8910 OVCAR-3 HLA-G nk-92细胞
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介导穿孔素短发夹RNA重组腺病毒的构建及其生物学作用
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作者 赵莉琳 刘阳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期291-293,共3页
目的:采用腺病毒介导的RNAi技术对穿孔素(PF)的功能进行体外研究,以期为深入研究PF的作用机制奠定基础。方法:构建腺病毒介导的穿孔素shRNA(Ad-shPF)。首先通过mRNA水平验证所设计的pShuttle-shPF序列的有效性,有效后包装Ad-shPF,验证其... 目的:采用腺病毒介导的RNAi技术对穿孔素(PF)的功能进行体外研究,以期为深入研究PF的作用机制奠定基础。方法:构建腺病毒介导的穿孔素shRNA(Ad-shPF)。首先通过mRNA水平验证所设计的pShuttle-shPF序列的有效性,有效后包装Ad-shPF,验证其对NK-92细胞穿孔素mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:转染pShuttle-shPF(1-3)的干扰效率分别为(74.2±4.1)%、(43.2±3.2)%、(61.7±2.6)%。干扰效果明显,其中又以pShuttle-shPF1的干扰效果最佳。成功包装Ad-shPF1,感染NK-92细胞,mRNA表达水平降至对照组的32%;Western blot分析表明Ad-shPF1处理后可在蛋白水平上明显抑制PF的表达。结论:PF shRNA重组腺病毒可以在mRNA和蛋白水平抑制NK-92细胞中PF的表达。 展开更多
关键词 穿孔素 腺病毒nk-92细胞 短发夹RNA
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中药甘黄注射液在异种排斥反应中作用初探 被引量:1
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作者 石斌 殷惠军 +2 位作者 黄秀英 吉瑞瑞 孙方臻 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期357-362,共6页
目的 :研究中药甘黄注射液在异种排斥反应中的作用。方法 :通过RT PCR技术检测甘黄注射液对猪血管内皮细胞 (porcineendothelialcells,PECs)激活相关基因表达的影响及采用51Cr释放法检测其对NK细胞杀伤与粘附作用的影响。结果 :未灭活... 目的 :研究中药甘黄注射液在异种排斥反应中的作用。方法 :通过RT PCR技术检测甘黄注射液对猪血管内皮细胞 (porcineendothelialcells,PECs)激活相关基因表达的影响及采用51Cr释放法检测其对NK细胞杀伤与粘附作用的影响。结果 :未灭活人血清及人NK 92细胞可以上调猪血管内皮细胞E selectin和IL 1α基因的mRNA表达 ,具有激活PECs作用 ;甘黄注射液可抑制人血清处理和NK细胞处理的PECs激活相关基因的表达。细胞毒实验结果认为 ,该中药也可以抑制NK细胞对PECs细胞毒作用 ,而且具有剂量依赖关系 ,这与该药抑制NK细胞对PECs的粘附作用是一致的。结论 :甘黄注射液不仅可抑制超急性排斥反应中血清对内皮细胞激活作用 ,而且可抑制延迟性排斥反应中NK细胞的作用。 展开更多
关键词 中药 甘黄注射液 异种排斥反应 作用 血管内皮细胞
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