NK细胞联合Treg细胞对慢性粒细胞白血病患者酪氨酸激酶抑制剂停药的预测价值

目的探讨NK细胞及Treg细胞在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)应用酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)停药患者中的变化及二者对TKI停药的预测价值。方法随机选取确诊为CML的患者200例,分为停药组(n=100)和未停药组(n=100),停药组患者进一步分为复发组(n=41)和未复发组(n=59),对患者的临床资料及随访资料进行回顾性分析。Logistic回归分析各变量对停药后结局的影响,探讨患者停药后复发的独立影响因素。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析NK细胞及Treg对TKI停药后结局的预测价值。结果停药组中应用干扰素治疗的患者比例显著高于未停药组(P<0.05),而前者NK细胞(P<0.05)及Treg细胞(P<0.01)的数量显著高于后者。与复发组患者相比,未复发组患者中应用干扰素的比例显著高于前者(P<0.05),TKI治疗时间及深度分子学反应(deep molecular response,DMR)持续时间均显著大于复发组患者(P<0.05)。未复发组的NK细胞及Treg细胞的数量显著高于复发组(P<0.01)。Logistic回归分析发现,是否应用干扰素(OR=1.25,95%CI:1.11~2.03,P<0.001)、DMR持续时间(OR=1.16,95%CI:1.08~1.92,P<0.05)、NK细胞(OR=1.64,95%CI:1.14~2.28,P<0.01)、Treg细胞(OR=1.83,95%CI:1.15~2.42,P<0.01)均是停药后患者是否复发的关键影响因素。ROC曲线分析结果表明,NK细胞联合Treg细胞预测TKI停药后是否复发的AUC=0.892(95%CI:0.857~0.927,P<0.001)。结论NK细胞和Treg细胞在TKI停药未复发的患者中显著增加,二者联合对于CML患者停药是否复发具有良好的预测作用。

基于NK相关基因的急性髓细胞白血病预后风险评估模型的建立

目的:通过分析NK细胞相关基因(NRGs)在急性髓细胞白血病(AML)中的表达模式及其与预后的关系,构建新型风险评分模型以评估AML患者的预后。方法:基于生物信息学的方法下载TCGA数据库中AML转录组数据。根据NRGs的表达不同,通过无监督聚类将AML患者分组,并分别分析不同亚组AML患者的生存差异、基因功能富集情况和免疫相关分析。根据亚组的差异表达基因,通过Cox生存分析以及LASSO回归分析构建基于NRGs的预后评估模型。最后收集AML患者的骨髓样本进行转录组测序,进一步验证预后评估模型中各基因与AML的相关性。结果:单因素Cox筛选与预后相关的NRGs,并根据其表达情况将AML患者分成3个亚组。生存分析以及富集分析、免疫浸润分析、免疫检查点分析均发现亚组2具有更好的临床预后,并且免疫微环境明显重塑。进一步根据三个亚组的差异表达基因,通过Cox联合LASSO回归分析构建风险评分模型,此风险评分模型与AML的临床预后显著相关。临床病例的转录组测序结果表明,风险模型的6个AML危险基因中,ADGRG1、LSP1、PDE7B在复发患者中的表达量较缓解患者上调,保护基因TBX1的表达量则下调。结论:本研究构建的AML患者风险评分模型可作为一种新的预后评估手段,具有较好的预测价值。

NK细胞在异基因造血干细胞微移植治疗急性髓系白血病中的作用研究

目的:探讨异基因造血干细胞微移植(MST)治疗急性髓系白血病(AML)患者中NK细胞的作用。方法:回顾性分析本中心2013-2018年接受MST治疗的93例AML患者的数据。诱导方案为蒽环类药物与阿糖胞苷联合粒细胞集落刺激因子动员后的外周血造血干细胞(GPBSC)输注,获得完全缓解(CR)后给予2-4个疗程的中大剂量阿糖胞苷联合GPBSC强化治疗。分析移植前未达CR的42例患者经1个疗程、2个疗程MST诱导治疗后的效果。多因素COX回归模型分析供者NK细胞数量与KIR基因型包括KIR配体错配、2DS1、单倍型和HLA-Cw配体对患者生存的影响。结果:42例患者接受MST诱导治疗1个疗程后CR率为57.1%,2个疗程后CR率为73.7%。多因素分析结果显示,中、高剂量NK细胞与患者较长的无病生存(DFS)时间显著相关(HR=0.27,P=0.005;HR=0.21,P=0.001),高剂量NK细胞与患者的较长的总生存(OS)时间显著相关(HR=0.15,P=0.000)。供者2DS1阳性显著提高患者的OS(HR=0.25,P=0.011)。对于60岁以下高危患者,供受者KIR配体错配组患者的DFS长于非错配组(P=0.036);供者2DS1阳性显著延长患者的OS(P=0.009)。结论:NK细胞剂量、KIR配体错配与2DS1能够影响MST的治疗效果,改善AML患者的生存。

NK系白血病免疫表型特征

本研究目的是探讨NK细胞系白血病的的免疫表型。应用流式细胞术检测了297例急性白血病,并就发现的6例NK细胞系白血病病例分析其免疫表型特点。结果表明:297例急性白血病中CD56阳性43例,占14.5%,CD56阳性率21.4%-98.8%。43例中6例为NK细胞系白血病,其余37均为急性髓系白血病伴CD56表达;6例NK细胞系白血病中1例急性前髓系/NK细胞白血病(myeloid/NK cell precursor acute leukemia);1例伴有早幼粒细胞样形态的急性髓系/NK细胞白血病;2例原始NK细胞白血病(blastic NK cell leukemia),1例NK样T细胞淋巴瘤/白血病(NK-like T-cell lymphoma/leukemia);1例大颗粒淋巴细胞白血病。结论:伴CD56阳性急性白血病,绝大部分是急性髓系白血病伴CD56表达。NK细胞系白血病免疫表型各异,表现从多能造血干细胞经历髓系抗原阳性的T/NK双向祖细胞,分化为NK系祖细胞,再进一步分化为成熟NK细胞。对不同发育阶段的抗原表达特点,应仔细辨别。

钝顶螺旋藻多糖对急性白血病病人NK细胞的作用

目的 探讨螺旋藻多糖 ( SPP)对白血病患者免疫功能的作用 ,观察了 SPP对正常人及急性白血病患者外周血 NK细胞的影响。结果 SPP可提高不同病期白血病患者 NK细胞活性 ,但不影响正常人 NK细胞活性 ,毒性试验表明 SPP对白血病细胞无毒性作用。结论 SPP作为生物反应调节剂用于白血病治疗可提高 NK细胞活性 ,值得进一步研究、开发、应用。

侵袭性NK细胞白血病的实验室特征及诊疗进展

侵袭性NK细胞白血病(ANKL)是一种少见的NK细胞增殖性疾病。发病急,病情重,进展快,且预后差,当合并噬血细胞综合征(HPS)时,短时间内可出现弥漫性血管内凝血(DIC),导致多脏器衰竭,危及生命。近年来,ANKL的病因及发病机制研究得到进一步阐明,其临床及实验室特征在诊断、疗效监测中愈来愈引起重视。因此,本综述总结了近年来ANKL的病因及发病机制,强调了该疾病的诊断标准及相关治疗的进展。

冬虫夏草对白血病NK细胞影响的体外研究

为探讨冬虫夏草(以下简称虫草)对白血病的作用及抑癌机制,观察了虫草水提液对正常人及白血病患者外周血NK细胞的影响,发现虫草可提高正常人及白血病NK细胞活性,在所使用的剂量范围内(1.56～25mg/ml)呈剂量-效应依赖性(r=0.984,P<0.01;r=0.988,P<0.01)。同时发现虫草可促进淋巴细胞表面CD_(16)抗原的表达,提高与K_(562)细胞的结合率。毒性试验表明对血细胞无毒性作用。认为虫草作为生物反应调节剂用于急性白血病治疗以提高NK细胞活性,值得进一步研究、开发与利用。

苦参碱对白血病细胞NKG2D配体表达的作用研究

本研究旨在探讨人白血病细胞表面NK细胞活化性受体NKG2D配体分子的表达水平及中药苦参碱对白血病细胞NKG2D配体表达的作用。流式细胞术检测白血病细胞表面MICA/B和ULBP1、2、3四种NKG2D配体的表达。苦参碱处理白血病细胞株K562、OUN-1、U937和K562/AO2及原代培养的人白血病细胞,流式细胞术分析药物处理后细胞表面NKG2D配体的表达改变。结果表明,几株常见人白血病细胞及原代人白血病细胞表面均有NKG2D配体分子的表达,多数有ULBP分子的高表达或ULBP表达明显高于MICA/B,但不同细胞表面NKG2D配体的表达模式明显不同。苦参碱处理可上调白血病细胞表面部分NKG2D配体的表达水平,提示苦参碱对不同白血病细胞NKG2D配体分子的表达调节不同。K562细胞表面NKG2D配体ULBP2和ULBP3分子的高表达可能是介导NK细胞对其高杀伤性的重要原因。结论:人白血病细胞及原代人白血病细胞表面均有NKG2D配体的表达,但不同细胞NKG2D配体的表达模式不同。苦参碱可上调白血病细胞表面部分NKG2D配体分子的表达。

AS_2O_3对CD34^+白血病细胞NKG2D配体表达及NK杀伤活性的影响

目的:观察AS2O3对CD34+早期急性髓系白血病细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响。方法:流式细胞仪检测KG1a细胞表面CD34抗原表达率,MTT法确定AS2O3的基本工作浓度,以不同浓度的AS2O3处理KG1a细胞,流式细胞仪测定处理前后KG1a细胞NKG2D配体的表达情况;MACS法分离5例健康个体的NK细胞,LDH释放法检测NK细胞对AS2O3处理前后KG1a细胞的杀伤活性。结果:10nmol/ml的AS2O3作用KG1a细胞后,能使KG1a细胞表面ULBP1的表达水平显著上调(P<0.05),同时也激发了NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:AS2O3能上调CD34+白血病细胞表面NKG2D配体的表达水平,诱导NK细胞对其的杀伤活性,启示AS2O3可与NK细胞组成过继性免疫化疗方案,提高急性白血病的疗效。

外周血NK细胞亚群检测在恶性血液病患者中的应用研究

目的探讨外周血自然杀伤细胞(NK)亚群检测在恶性血液病患者中的应用价值。方法选择2014年3月至2016年4月于该院接受治疗的100例恶性血液病患者作为观察组,其中急性期50例,平缓期50例,并在同一时段内选择100例体检健康者作为对照组,比较各组间外周血NK细胞数及亚群的变化。结果急性期白血病及淋巴瘤患者NK细胞绝对数及相对数均远低于对照组,而平缓期白血病及淋巴瘤NK细胞绝对数及相对数高于急性期,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,白血病及淋巴瘤患者NK细胞绝对数及相对数均高于治疗前,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗前,白血病及淋巴瘤患者CD56^(bright)及CD56^(dim)水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两类患者CD56^(bright)及CD56^(dim)水平明显改善,治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论恶性血液病患者外周血NK细胞数量降低,细胞功能受损。NK细胞亚群检测在评价恶性血液病患者预后及疗效方面有一定的指导意义。

急性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞水平检测及临床意义

目的:研究急性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞水平变化及临床意义。方法:采用流式细胞仪对32例急性白血病患者(急性髓细胞性白血病23例、急性淋巴细胞性白血病9例)及18例正常人外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞水平进行检测。结果:初治急性白血病组与正常对照组比较,CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值及NK细胞下降(P<0.05),CD8+细胞略升高(P>0.05)。化疗后12例取得完全缓解,再次检测上述指标接近正常对照组(P>0.05)。初诊急性淋巴细胞性白血病组CD4+细胞及CD4+/CD8+比值低于初诊急性髓细胞性白血病组(P<0.05)。结论:急性白血病患者细胞免疫功能明显异常。与急性髓细胞性白血病相比,急性淋巴细胞性白血病细胞免疫功能更为低下。T细胞亚群及NK细胞水平检测在评价急性白血病疗效及判断预后方面具有一定的临床价值。

流式细胞术在NK细胞肿瘤诊断中的应用并文献复习

目的侵袭性NK细胞白血病和结外NK/T细胞淋巴瘤-鼻型是成人最主要的EBV病毒相关的T细胞和NK细胞增殖性疾病,目前针对NK细胞的检测手段,主要包括细胞形态学、免疫组织化学,以及流式细胞术,本文主要探讨流式细胞术的优越性。方法本文报道2例成人NK细胞肿瘤的诊断及治疗过程,其中1例患者合并继发性噬血细胞综合征。结果流式细胞术的应用在他们的诊断中发挥了重大作用。结论单纯细胞形态学难以判断NK细胞克隆性。病理免疫组织化学通常被认为是诊断"金标准",但是通常NK细胞恶性肿瘤患者呈侵袭性病程,可能无法耐受活检手术或者组织取材不满意而使得诊断证据不足。流式细胞术可以尽可能多地、快速地获取靶向细胞,并进行细胞大小、胞浆颗粒度及分化抗原的综合高效分析。

NK细胞抑制CD34^+早期急性髓系白血病细胞克隆形成

目的探讨同种异体NK细胞对CD34+早期急性髓系白血病细胞的克隆抑制效应。方法免疫磁珠法分离5例健康个体NK细胞,甲基纤维素克隆形成实验检测NK细胞对KG1a细胞杀伤后的克隆形成,同时与NK杀伤敏感细胞株K562比较。结果急性髓系白血病细胞株KG1a中CD34抗原表达率为(98.0±1.1)%,分选后的NK细胞(CD3-CD16+CD56+细胞)纯度为(93.2±3.7)%。不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞均能抑制其克隆形成。随着效靶比的增高,其克隆抑制率随之增高(P<0.05)。同一效靶比时,NK细胞对KG1a的克隆抑制率低于K562,差异有显著性(P<0.05)。结论同种异体NK细胞对CD34+早期急性髓系白血病细胞的克隆形成具有一定的抑制作用。

上调急性淋巴细胞白血病中细胞因子信号传导抑制因子3的表达促进NK细胞杀伤活性的机制研究

目的:检测细胞因子信号传导抑制因子3(SOCS3)在急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达水平,并探讨NK细胞对过表达SOCS3细胞系Jurkat细胞的杀伤作用。方法:采用RT-PCR技术检测20例ALL患儿及20例健康体检儿童(正常对照组)外周血单个核细胞中SOCS3 mRNA表达水平。免疫磁珠分选健康人外周血NK细胞,采用流式细胞术检测其纯度。慢病毒载体感染Jurkat细胞使之过表达SOCS3,RT-PCR检测慢病毒感染后细胞中SOCS3 mRNA表达情况。将NK细胞与Jurkat细胞共培养,LDH释放法检测杀伤活性,ELISA检测TNF-α和IFN-γ浓度。流式细胞术检测过表达SOCS3后Jurkat细胞表面NKG2D配体MICA与MICB的表达。Western blot检测过表达SOCS3对Jurkat细胞中STAT3蛋白磷酸化水平的影响。结果:ALL患儿外周血单个核细胞中SOCS3 mRNA表达水平较正常对照组显著降低。流式细胞术检测分离NK细胞纯度可达70%以上。慢病毒感染的Jurkat细胞中SOCS3 mRNA表达显著增加。过表达SOCS3的Jurkat细胞可显著促进NK细胞对其杀伤能力,且可上调NK细胞TNF-α和IFN-γ的分泌。流式细胞术检测结果显示,过表达SOCS3后Jurkat细胞表面NKG2D配体MICA与MICB表达水平均显著增加。Western blot结果显示,过表达SOCS3后可显著降低Jurkat细胞中JAK/STAT信号通路中STAT3蛋白的磷酸化水平。结论:在ALL中SOCS3 mRNA表达显著降低,而过表达SOCS3可能通过负性调控JAK/STAT信号通路上调Jurkat细胞表面NKG2D配体MICA与MICB的表达,进而促进NK细胞的杀伤能力。

NK细胞活化受体及配体在急性白血病患者外周血中的表达和脱离

本研究旨在从NK细胞活化性受体NKG2D及其相应配体——MICA/B、ULBP-1、2、3的表达和血清中脱离情况来探讨急性白血病患者NK细胞免疫防御功能损伤的可能机制。选择30例初发未治疗的急性白血病患者作为观察对象,10例健康者作为对照,应用流式细胞术检测白血病细胞表面MICA/B,ULBP-1、2、3表达水平,用ELISA法检测血清可溶性MICA、MICB(sMICA,sMICB)及可溶性ULBP1-3(sULBP1-3)水平。结果表明,急性白血病患者NK细胞NKG2D的表达低于正常对照组;急性白血病患者白血病细胞表面不表达或弱表达MICA/B、ULBP1-3;急性白血病患者血清中游离的sMICA和sMICB水平均高于对照组,差异有统计学意义(p<0.01),血清sULBP1-3水平与对照组无明显差异。结论:急性白血病细胞表面MICA和MICB的脱离及ULBP表达缺乏可能是急性白血病细胞发生免疫逃逸的机制之一。

地西他滨增强allo-NK细胞杀伤白血病干细胞敏感性研究

目的:探讨地西他滨增强allo-NK细胞杀伤白血病干细胞(LSC)的作用及其机制。方法:应用免疫磁珠法从KG1a细胞中分选LSC。从健康供者的外周血分离纯化同种异体反应性自然杀伤(allo-reactive natural killer,a1-Io-NK)细胞;LDH法检测allo-NK细胞对LSC的杀伤作用,流式细胞术检测allo-NK细胞诱导LSC凋亡及LSC表面NKG2D配体MICA/B和ULBP1-3的表达。结果:地西他滨10μmol/L处理LSC 24 h后,allo-NK细胞对LSC的杀伤率明显增高,在效靶比为5:1、10:1、20:1时分别为(60.52%±3.52%vs 22.08%±2.07%、73.93%±2.33%vs 28.99%±3.13%、83.08%±1.32%vs 36.44%±2.40%),差异有统计学意义(P<0.05);地西他滨10μmol/L处理LSC 24 h后,在效靶比为10:1时,allo-NK细胞诱导LSC的凋亡率为7.84%±0.34%,明显高于LSC未处理组(3.33%±0.64%),差异有统计学意义(P<0.05);地西他滨10μmol/L处理LSC 24 h后,LSC表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达上调,高于未处理组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:地西他滨可能通过上调NKG2D配体增强allo-NK细胞对LSC的杀伤作用。

EB病毒相关的T/NK细胞淋巴增殖性疾病的研究进展

EB病毒相关的T/NK细胞淋巴增殖性疾病(EBV-T/NK LPD)包括慢性活动性EBV感染(CAEBV)、EBV相关的噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(EBV-HLH)和T/NK恶性疾患等。以T或NK细胞的异位感染为特征,发病的潜在机制复杂,包括T或NK细胞遗传学异常。频繁的致死转归是由于EBV感染的T/NK细胞恶性转化和发生HLH和CAEBV。治疗策略尚需进一步探讨和完善。

急性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞表达情况分析

目的研究急性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞表达情况的改变,进一步探讨细胞免疫功能在急性白血病发病机制中的作用,为急性白血病疗效观察和预后判断提供一定的依据。方法用流式细胞术检测30例急性白血病患者及30例健康体检者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞表达情况。结果急性白血病患者化疗前CD3^+、CD4^+、CD8^+T细胞、NK细胞数量和比例与化疗缓解后及对照组相比均偏低(均P<0.01),处于持续缓解状态的患者病程初期T淋巴细胞亚群及NK细胞数量和比例均较非缓解状态的患者高(均P<0.01),而化疗缓解组与对照组之间无统计学差异(P>0.05)。结论细胞免疫功能低下是急性白血病发病的一个重要因素,动态观察患者T淋巴细胞亚群及NK细胞表达情况有助于疾病疗效观察和预后判断。

急性早幼粒细胞白血病联合治疗后NK细胞和T细胞膜表面CD95L的表达

目的探讨急性早幼粒细胞白血病患者化疗前后外周血中单个核细胞膜表面TLR2、TLR4对NK细胞和T细胞上CD95L表达的影响。方法运用流式细胞术,对NK细胞和CD14+细胞进行设门,检测急性早幼粒细胞白血病患者和健康对照组单个核细胞膜表面TLR2+、TLR4+、CD3+CD95L+、NK+CD95L+,进行比较分析。结果与对照组比较,治疗前组CD3+细胞明显增加,NK+CD95L+、CD3+CD95L+细胞数下降,统计学上有显著性差异(P<0.05);治疗后组CD14+、TLR2+、TLR4+、NK+、CD3+CD95L+细胞明显减少,有显著性差异(P<0.05)。与治疗前组相比,治疗后组CD14+、TLR2+、TLR4+、CD3+细胞明显减少,NK+CD95L+细胞明显增加,有显著性差异(P<0.05)。结论 APL患者外周血中单核细胞上TLR2、TLR4的表达影响NK细胞的CD95L诱导凋亡的能力,在抗肿瘤逃避机体免疫中是一种有益尝试。

地西他滨联合常规化疗方案治疗急性白血病合并T/NK细胞淋巴瘤的效果分析

目的探讨地西他滨联合常规化疗方案治疗急性白血病合并T/NK细胞淋巴瘤的治疗效果及对患者凝血指标的影响。方法选取我院收治的急性白血病合并T/NK细胞淋巴瘤患者40例,按照随机数字法分为对照组(n=20)和研究组(n=20),对照组应用常规化疗方案进行治疗,研究组在对照组的基础上联合地西他滨治疗。观察两组患者的临床治疗效果、不良反应以及治疗前后凝血功能指标的变化。结果研究组患者近期疗效明显优于对照组(P<0.05);研究组患者感染、恶心呕吐、骨髓抑制等非血液学不良反应的发生率明显低于对照组(P<0.05);研究组患者外周白细胞及血小板计数减少量明显低于对照组,并且血液学感染的发生率明显低于对照组(P<0.05);治疗前,两组患者的凝血功能指标无明显差异(P>0.05),治疗后,研究组患者PT、APTT、FIB、TT等凝血功能指标的改善情况明显优于对照组(P<0.05)。结论应用地西他滨联合常规化疗方案治疗急性白血病合并T/NK细胞淋巴瘤,可降低患者血液学及非血液学不良反应的发生率,明显改善患者的凝血功能,提高患者的生活质量,整体治疗效果较为理想,临床上可进一步推广应用。