NK细胞联合Treg细胞对慢性粒细胞白血病患者酪氨酸激酶抑制剂停药的预测价值

目的探讨NK细胞及Treg细胞在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)应用酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)停药患者中的变化及二者对TKI停药的预测价值。方法随机选取确诊为CML的患者200例,分为停药组(n=100)和未停药组(n=100),停药组患者进一步分为复发组(n=41)和未复发组(n=59),对患者的临床资料及随访资料进行回顾性分析。Logistic回归分析各变量对停药后结局的影响,探讨患者停药后复发的独立影响因素。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析NK细胞及Treg对TKI停药后结局的预测价值。结果停药组中应用干扰素治疗的患者比例显著高于未停药组(P<0.05),而前者NK细胞(P<0.05)及Treg细胞(P<0.01)的数量显著高于后者。与复发组患者相比,未复发组患者中应用干扰素的比例显著高于前者(P<0.05),TKI治疗时间及深度分子学反应(deep molecular response,DMR)持续时间均显著大于复发组患者(P<0.05)。未复发组的NK细胞及Treg细胞的数量显著高于复发组(P<0.01)。Logistic回归分析发现,是否应用干扰素(OR=1.25,95%CI:1.11~2.03,P<0.001)、DMR持续时间(OR=1.16,95%CI:1.08~1.92,P<0.05)、NK细胞(OR=1.64,95%CI:1.14~2.28,P<0.01)、Treg细胞(OR=1.83,95%CI:1.15~2.42,P<0.01)均是停药后患者是否复发的关键影响因素。ROC曲线分析结果表明,NK细胞联合Treg细胞预测TKI停药后是否复发的AUC=0.892(95%CI:0.857~0.927,P<0.001)。结论NK细胞和Treg细胞在TKI停药未复发的患者中显著增加,二者联合对于CML患者停药是否复发具有良好的预测作用。

细胞因子诱导的记忆样NK细胞与实体瘤免疫治疗的研究进展

自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)是一种先天性淋巴细胞,在抵御病毒感染和肿瘤侵袭中发挥着关键作用,是先天免疫系统的重要组成部分。NK细胞不具有抗原特异性,而近期的研究表明,NK细胞在半抗原暴露、病毒感染或联合细胞因子的激活后,表现出适应性和记忆样特征,后者可通过IL-12/15/18的短暂刺激诱导来实现。与正常NK细胞相比,这些细胞因子诱导的记忆样NK细胞能够长期增殖、存活,并且IFN-γ的产生及对肿瘤细胞的细胞毒性的效应器功能都得以增强,这使其成为肿瘤免疫治疗的优选细胞。在复发性/难治性急性髓系白血病的临床研究证明,细胞因子诱导的记忆样NK细胞过继性治疗是安全并有效的。细胞因子诱导的记忆样NK细胞已经开始肝癌等实体瘤的临床前研究,本文综述目前关于细胞因子诱导的记忆样NK细胞在实体瘤中的临床前研究的最新进展,为实体瘤免的疫治疗提供新思路。

Anti-GM1影响裸鼠NK细胞分化和杀伤活性研究

目的研究抗单唾液酸神经节苷脂抗体(Anti-GM1)通过调节自然杀伤(NK)细胞分化,抑制裸鼠NK细胞的自然杀伤活性。方法多重免疫荧光染色鉴定人肾癌组织中NK细胞的分型特点。选择雄性BALB/c小鼠6只,GM1皮下注射每周1次,一共三周,以此来免疫小鼠制备Anti-GM1。选取6只BALB/c-Nude裸鼠,采用随机数字表法将裸鼠分为对照组(CON组)及实验组(Anti-GM1组),CON组用IgG连续腹腔注射7 d;Anti-GM1组用Anti-GM1连续腹腔注射7 d。7 d后经颈椎脱臼法处死裸鼠,取裸鼠脾脏并制成单细胞悬液,将脾细胞与YAC-1细胞共培养4 h。用LDH法检测NK细胞的杀伤活力。使用流式细胞术进行检测,根据CD27和CD11b表达来界定NK细胞亚群,同时检测CD107a的表达情况。ELISA检测NK细胞的γ干扰素(IFN-γ)及颗粒酶B(GzmB)分泌水平。结果人肾癌组织标本中有明显的NK细胞浸润现象,并且GzmB也呈现阳性表达。Anti-GM1可以显著抑制NK细胞的杀伤活力。与CON组相比,Anti-GM1组可以促进NK细胞向成熟亚群进行分化。Anti-GM1组NK细胞的CD107a水平显著下降。Anti-GM1组NK细胞的IFN-γ及GzmB分泌水平较CON组下降。结论NK细胞可以浸润在人肾癌组织中,并且能够分泌GzmB,发生自然杀伤作用。Anti-GM1可以促进NK细胞的成熟,但抑制NK细胞的杀伤活力,与其抑制NK细胞CD107a表达和抑制NK细胞的IFN-γ及GzmB分泌有关。

参附汤联合同种异体NK细胞促进移植小鼠造血恢复的实验研究

目的观察参附汤联合同种异体NK细胞(alloreactive naturall killer cells,alloNK)对移植小鼠术后外周血象、骨髓有核细胞计数(nucleated cell counts,NCC)、骨髓造血组织容量(hematopoietic volume of bone marrow,HV)及骨髓病理的影响。方法BALB/c小鼠经过13.0 Gy剂量的全身照射(total body irradiation,TBI),4 h内经尾静脉注入供鼠骨髓单个核细胞(mononuclear cells,MNCs)8×10^(6)/kg,制作移植小鼠模型,然后随机分为模型组、alloNK组、参附汤组、参附+alloNK组4组,分别给予生理盐水、单用alloNK、单用参附汤和参附汤联合alloNK灌胃,观察治疗前及治疗后第7、14、30天,小鼠外周血象、骨髓NCC、HV及组织病理的变化。结果移植前及移植后第7天各组小鼠外周血象、骨髓NCC、HV无显著性差异。移植后第14天,模型组小鼠白细胞仍处于粒缺期,而单纯alloNK组和参附组小鼠的白细胞均有所上升,参附联合alloNK组小鼠上升幅度高于其他组。移植后第30天,模型组、alloNK组及参附组小鼠白细胞、骨髓NCC、HV均较前回升,但仍低于移植前水平,而参附联合alloNK组小鼠的白细胞、骨髓NCC、HV恢复至移植前水平,与其他组相比差异显著。结论参附汤可保护骨髓免受放射损伤、促进造血功能恢复、缩短粒细胞缺乏时间,而联合alloNK细胞促进造血功能恢复的作用更明显。

鼻内EB病毒感染相关T/NK细胞淋巴组织增生性疾病1例

患者男性,23岁。因左侧鼻部肿胀伴血涕1个月余于2023年5月就诊于河北省沧州中西医结合医院。体检发现左侧脸面肿胀,触之疼痛,无发热恶寒等不适,外院抗感染后效果不佳。实验室检查示:血象及炎性指标正常,男性肿瘤标记物正常,乳酸脱氢酶升高。EB病毒DNA 83 800 copies/mL,抗EB病毒衣壳抗体IgG 99.5 U/mL,抗EB病毒衣壳抗体IgM1.56 U/mL,抗EB病毒早期抗体IgM 0.04 COI,抗EB病毒核抗体IgG 70.6 U/mL。

IRE1α/Xbp1s靶向调控NKp46改善NK细胞杀伤功能清除HIV感染细胞的思路探析

自然杀伤细胞的杀伤活性无MHC限制,不依赖抗体,是抵御肿瘤和病毒感染的第一道防线。肿瘤或慢性病毒感染后,固有免疫NK细胞与适应性免疫T细胞共同发挥免疫功能对抗肿瘤及感染,但由于免疫系统无法迅速根除病灶,免疫细胞内质网稳态被打破,使其无法发挥正常的免疫杀伤及清除功能,导致病情迅速恶化甚至死亡。NKp46是仅表达在NK细胞上的特异性活化受体,它直接影响NK细胞的活化程度与杀伤作用的强弱。艾滋病是一种目前无法根治的慢性传染病之一,病毒持续感染引起NK细胞内质网应激,IRE1α/Xbp1s信号通路的启动导致NKp46蛋白翻译大部分被抑制,影响NK细胞活化发挥功能,因此基于IRE1α/Xbp1s靶向调控NKp46寻求改善NK细胞杀伤功能的新靶点成为研究的新思路。

NK细胞代谢途径及其功能

NK细胞是固有免疫系统的重要成员,在免疫应答中发挥关键作用。NK细胞激活主要依赖于其表面表达的活化性受体和抑制性受体间的动态平衡。然而,在许多慢性疾病模型中,NK细胞受体表达失衡,导致杀伤活性及细胞因子产生能力降低,处于免疫失活状态。近年许多研究表明,胞内代谢对包括NK细胞在内的免疫细胞至关重要,代谢改变能够通过影响细胞发育、增殖和活性等调节免疫细胞效应功能发挥。鉴于NK细胞强大的抗肿瘤和抗病毒功能及其重要的临床应用价值,深入研究其代谢特征及机制具有重要意义。本文主要从NK细胞的代谢方式及其相关调控通路、代谢对NK细胞发育、记忆和功能的调控作用以及基于代谢的NK细胞疗法进行综述,阐述代谢对NK细胞生物合成、体内稳定及效应功能的重要作用,以及不同慢性疾病模型中NK细胞失活的代谢相关因素,为NK细胞治疗的临床应用提供坚实的研究依据。

NK细胞疗法在多发性骨髓瘤治疗中的研究进展

多发性骨髓瘤(MM)是以骨髓中单克隆浆细胞的恶性增殖为特征的血液系统肿瘤。NK细胞是一类具有强大自然杀伤活性的先天性淋巴细胞,能够识别并消灭肿瘤细胞和病毒感染细胞,其作为潜在的抗癌疗法引起关注。在MM患者中,NK细胞的数量和功能均受到抑制,导致对骨髓瘤细胞的免疫监视和清除能力降低。恢复或增强NK细胞对骨髓瘤细胞的杀伤作用是MM免疫治疗的一个重要策略,目前针对NK细胞相关治疗在临床试验中取得了一定进展。本文对NK细胞在MM免疫治疗中应用前景的最新研究进展作一综述。

黄芪含药血清对NK细胞活性、NKG2A、NKG2D及细胞因子IFN-γ表达的影响

目的探讨黄芪含药血清对自然杀伤(NK)细胞的杀伤活性和NKG2D、NKG2A、细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)表达水平的影响。方法20只SPF级SD大鼠,随机分成黄芪低、中、高剂量组(3.1、6.2、12.4 g/kg体重)和正常对照组,灌胃后制备含药血清。用NK细胞专用培养基培养NK-92MI细胞,用1640培养基培养YAC-1细胞。将NK-92MI细胞与20%不同剂量黄芪含药血清及正常对照血清孵育48 h,即分别为正常对照组、黄芪低剂量组、黄芪中剂量组以及黄芪高剂量组。通过乳酸脱氢酶(LDH)释放测定方法检测NK细胞对靶细胞YAC-1的杀伤活性,ELISA法检测IFN-γ的水平,Western blot检测NKG2D以及NKG2A蛋白表达水平。结果与正常对照组和黄芪低剂量组相比,黄芪中、高剂量组的NK细胞活性显著升高(P<0.01)。IFN-γ的表达在黄芪低、中、高剂量组中均升高,但不随浓度升高而增强。与正常对照组相比,黄芪低、中剂量组NKG2D蛋白表达水平明显升高(P<0.01),而NKG2A蛋白表达水平在各组间无明显差异(P>0.05)。结论黄芪含药血清可增强NK细胞杀伤活性、上调IFN-γ表达水平、上调NK细胞活化型受体的表达,通过调控NK细胞实现对机体的保护作用。

补中益气汤对免疫抑制小鼠NK细胞调控作用研究

目的研究补中益气汤及方中中药配伍对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠脾脏中自然杀伤细胞(NK细胞)调控作用。方法100只小鼠随机分为10组,除空白组外,其余小鼠采用腹腔注射环磷酰胺制备小鼠免疫抑制模型。免疫抑制小鼠随机分为模型组,阳性组,高、中、低剂量中药组,黄芪+白术组,黄芪+党参组,白术+党参组,黄芪+白术+党参组,连续给药17 d后,测量小鼠体质量并计算脾脏及胸腺指数,流式细胞仪检测NK细胞比例,酶标法测试NK细胞活性。结果与空白组比较,模型组小鼠脾脏指数、胸腺指数、NK细胞比例与活性明显降低(P<0.01),表明免疫抑制小鼠模型建立成功。与模型组比较,中药(补中益气汤)组可以有效提高小鼠免疫器官指数、NK细胞比例与活性(P<0.01或P<0.05),其中以中剂量中药组纠正效果最为显著,NK细胞比例高于阳性组,但不及空白组水平,表明方剂可改善免疫抑制状态。黄芪+白术组、黄芪+白术+党参组可提高小鼠免疫器官指数(P<0.01或P<0.05),白术+党参组、黄芪+白术+党参组可提高小鼠NK细胞比例与活性(P<0.01或P<0.05),表明方中主药配伍亦可一定程度提升免疫功能,但效果不及全方组(中剂量中药组)。结论补中益气汤可拮抗环磷酰胺所导致的免疫抑制,增强NK细胞的免疫功能。

NK细胞免疫治疗恶性肿瘤的研究进展

细胞免疫治疗是针对自身免疫细胞能力低下的恶性肿瘤患者进行的一种新型补充疗法,包括基于T细胞的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法、肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)疗法,基于NK细胞的嵌合抗原受体NK细胞(CAR-NK)疗法和自体细胞免疫疗法(CIK),还有基于其他免疫细胞如单核吞噬细胞,包括树突状细胞和巨噬细胞的输注治疗。其中,自然杀伤细胞(nature killer cell,NK细胞)作为机体天然免疫的重要细胞,在机体抗肿瘤、抗病毒感染、免疫调节中发挥着重要作用。它可以像T细胞一样通过工程化改造后靶向治疗肿瘤,还能够进行同种异体来源的NK细胞输注治疗,弥补了T细胞自体来源受限和异体免疫排斥的缺点。研究证实,输注异体NK细胞的患者不会发生严重的移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)。NK细胞不仅扩大了用于细胞免疫治疗的细胞种类,还为形成较低成本的细胞免疫治疗产品提供了广阔应用前景。但是目前仍存在NK细胞质量不稳定,制备流程缺乏统一质量标准等问题,虽有部分NK细胞免疫治疗产品已经获得了美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)或国家药品监督管理局(National Medical Products Administration,NMPA)的批准,但仍然没有明确公开的NK细胞免疫治疗产品的规范生产体系。本文从NK细胞独特的免疫调节作用机制出发,综合近年研究者利用NK细胞在恶性肿瘤治疗上应用的治疗策略和临床前研究及临床试验的最新进展,最终落脚于NK细胞的体外扩增办法及活性功能维持的研究进展上,表明NK细胞有望形成质量统一的细胞免疫治疗产品。

岭南调神助孕针法联合芬吗通对早发性卵巢功能不全患者性激素及NK细胞、T淋巴细胞的影响

目的探讨岭南调神助孕针法联合芬吗通对早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency,POI)患者性激素、自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK细胞)和T淋巴细胞的影响。方法选取2022年2月—2023年2月期间就诊于广东医科大学顺德妇女儿童医院门诊的POI患者102例,采用电脑随机数字表法随机分为针刺组和西医组,每组各51例。西医组予以芬吗通口服,针刺组予以岭南调神助孕针法联合芬吗通治疗。3个疗程(3个月经周期)后观察比较两组患者临床疗效及不良反应,评价两组患者治疗前后中医证候积分、改良Kupperman量表评分变化,检测血清性激素指标雌二醇(Estradiol,E2)、卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)、抗苗勒管激素(Anti-mullerian hormone,AMH),检测外周血NK细胞与T淋巴细胞亚群(CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))变化。结果治疗后两组患者中医各项证候评分及总积分均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且针刺组中医各项积分及总积分低于西医组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者改良Kupperman评分较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且针刺组改良Kupperman评分明显低于西医组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者血清E2、AMH水平较治疗前明显升高,FSH、LH水平较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且针刺组E2、AMH水平明显高于西医组,FSH、LH水平明显低于西医组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者NK细胞、CD8^(+)较治疗前明显降低,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)较治疗前明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);且针刺组NK细胞、CD8^(+)明显低于西医组,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)明显高于西医组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后针刺组临床总有效率98.04%(50/51)明显高于西医组86.27%(44/51),差异有统计学意义(χ2=8.022,P<0.05)。治疗期间,两组患者不良反应发生率比较,差异有统计学意义(χ2=4.173,P<0.05)。结论岭南调神助孕针法联合芬吗通治疗POI能够改善患者的临床症状及性激素紊乱,调节NK细胞和T淋巴细胞亚群,改善免疫功能,从而保护患者的卵巢功能。

自体NK细胞回输在宫颈癌维持治疗中的安全性和疗效评估(3例报道)

癌症是全球每年的主要死因之一,其死亡例数和发病例数逐年上升[1]。2020年全球约有1930万新发癌症病例和近1000万癌症死亡病例。预计到2040年,全球癌症患者数量将增至2840万人[2]。预计2040年中国癌症新发病例685万例,死亡507万例[3]。宫颈癌(cervical cancer,CC)在全球发病率和癌症相关死亡率中排名第四,是中国女性生殖系统第二大常见恶性肿瘤[4]。尽管早期CC有最佳的可用治疗方案,但对于复发性或转移性CC患者的治疗效果并不乐观,5年生存率为17%[5]。晚期CC患者的预后很差,因为二线疗法有限和后期缺乏标准护理,且对铂类化疗产生耐药性[6]。急需探索新的治疗方式来弥补目前CC治疗不足的问题。

NK细胞在复发性妊娠丢失中的作用

复发性妊娠丢失病因复杂,目前仍有相当一部分原因不明。免疫、微生物等因素是不明原因复发性妊娠丢失的潜在病因之一。NK细胞是女性生殖道中的重要免疫细胞,参与妊娠抗感染免疫、滋养层侵袭和子宫螺旋动脉重塑,维持正常妊娠。在感染、内分泌异常、生殖道菌群失调等病理状态下,NK细胞可能通过破坏母胎界面免疫稳态和影响滋养层侵袭与子宫螺旋动脉重塑介导妊娠丢失发生。本文综述了人体NK细胞亚群及其作用,提出了NK细胞在复发性妊娠丢失发病中的可能参与机制,以期为复发性妊娠丢失的病因诊断和治疗提供参考。

NK细胞在异基因造血干细胞微移植治疗急性髓系白血病中的作用研究

目的:探讨异基因造血干细胞微移植(MST)治疗急性髓系白血病(AML)患者中NK细胞的作用。方法:回顾性分析本中心2013-2018年接受MST治疗的93例AML患者的数据。诱导方案为蒽环类药物与阿糖胞苷联合粒细胞集落刺激因子动员后的外周血造血干细胞(GPBSC)输注,获得完全缓解(CR)后给予2-4个疗程的中大剂量阿糖胞苷联合GPBSC强化治疗。分析移植前未达CR的42例患者经1个疗程、2个疗程MST诱导治疗后的效果。多因素COX回归模型分析供者NK细胞数量与KIR基因型包括KIR配体错配、2DS1、单倍型和HLA-Cw配体对患者生存的影响。结果:42例患者接受MST诱导治疗1个疗程后CR率为57.1%,2个疗程后CR率为73.7%。多因素分析结果显示,中、高剂量NK细胞与患者较长的无病生存(DFS)时间显著相关(HR=0.27,P=0.005;HR=0.21,P=0.001),高剂量NK细胞与患者的较长的总生存(OS)时间显著相关(HR=0.15,P=0.000)。供者2DS1阳性显著提高患者的OS(HR=0.25,P=0.011)。对于60岁以下高危患者,供受者KIR配体错配组患者的DFS长于非错配组(P=0.036);供者2DS1阳性显著延长患者的OS(P=0.009)。结论:NK细胞剂量、KIR配体错配与2DS1能够影响MST的治疗效果,改善AML患者的生存。

阿尔茨海默病NK细胞与铜死亡的相关基因分析

背景:阿尔茨海默病的免疫相关致病机制尚不明确,通过生物信息学探讨阿尔茨海默病患者NK细胞与铜死亡机制的相关性,可为研究阿尔茨海默病的发生发展提供新方向。目的:使用生物信息学分析方法筛选阿尔茨海默病患者外周血中NK细胞与铜死亡相关的关键基因,并在临床标本水平加以验证。方法:利用GEO在线数据库筛选阿尔茨海默病患者外周血转录组差异表达基因和NK细胞相关基因,与已报告的铜死亡因子取交集,获取差异表达的铜死亡相关基因;接着采用RT-qPCR技术对基因相对表达量进行实验验证,实验样本来自于安徽省立医院神经内科2021-2023年住院患者的外周血,按照纳排标准纳入疾病组30例及对照组20例。后续进一步使用在线GeneMANIA网站构建蛋白质-蛋白质互作网络;利用R语言进行免疫浸润分析;基于ENCODE数据库进行转录因子预测。结果与结论:①利用GSE63060数据集中阿尔茨海默病患者外周血转录组差异表达基因、GSE168522数据集中NK细胞相关基因、已报告的铜死亡基因,应用在线韦恩图工具、LASSO算法及随机森林机器学习方法筛选获取4个差异表达的铜死亡相关基因:铁氧还原蛋白1(ferredoxin 1,FDX1)、铜离子转运ATP酶a肽(ATPase Cu^(2+)transporting alpha polypeptide,ATP7A)、丙酮酸脱氢酶β(pyruvate dehydrogenase El subunit beta,PDHB)和二氢硫辛酰胺琥珀酰转移酶(dihydrolipoamide succinyltransferase,DLST)。②临床样本实验验证,FDX1和ATP7A在阿尔茨海默病患者外周血中表达上调(P<0.001),且在载脂蛋白E4不同基因型中呈差异性表达(P<0.01,P<0.001);PDHB和DLST在阿尔茨海默病患者外周血中表达下调(P<0.001),在载脂蛋白E4不同基因型中表达无显著性意义(P>0.05)。③蛋白质-蛋白质互作网络发现20种功能蛋白与关键基因相关联,免疫浸润分析结果验证了关键基因与12个免疫细胞具有显著相关性(以P<0.05为具有相关性)。④生物信息学分析与实验验证结果提示,FDX1,ATP7A,PDHB和DLST基因在阿尔茨海默病中存在差异性表达,这4个基因在阿尔茨海默病外周血的NK细胞中可能通过铜死亡机制参与了疾病的发生发展,文章结果为阿尔茨海默病的诊断及治疗提供了潜在的靶点。

NK细胞的发育分化及转录因子调控

自然杀伤(NK)细胞是固有免疫系统重要成员,在抗病毒以及抗肿瘤中发挥重要作用。NK细胞发育分化历经多个阶段,受多种因素调控。成年机体外周组织广泛存在的经典NK(cNK)细胞主要由骨髓造血干细胞(HSCs)经共同淋巴祖细胞(CLPs)、NK细胞前体(NKPs)阶段发育而来,转录因子在调控造血前体向NK细胞分化过程中发挥关键作用。近年随着固有淋巴细胞(ILCs)家族其他成员的发现和深入研究,揭示了NK细胞具有独立于其他ILCs亚群的发育路径,NK细胞发育分化阶段界定更为精细,一系列调控NK细胞各阶段发育分化的转录因子也逐步被发现。本文围绕NK细胞发育阶段的界定和转录因子调控方面展开论述,将有助于深入理解NK细胞的发育分化过程。

膜表达IL-21的饲养层细胞对NK细胞体外扩增的影响

目的:探究膜表达IL-21的饲养层细胞对NK细胞体外扩增的影响。方法:通过电转法构建膜表达IL-21的K562稳转细胞系,细胞灭活后与NK细胞共培养,观察NK细胞增殖情况。通过乳酸脱氢酶(LDH)和干扰素-γ(IFN-γ)释放实验检测扩增获得的NK细胞体外杀伤功能。构建NOD/SCID小鼠异种移植肠癌肿瘤模型,设置空白对照组、NK细胞组和扩增NK细胞组,检测扩增NK细胞体内肿瘤杀伤功能。结果:通过电转法成功构建了膜表达IL-21的K562细胞。与膜表达IL-21的K562细胞共培养17 d后,NK细胞的扩增倍数可达700倍,与对照组相比扩增能力明显增强(P<0.001)。体外肿瘤细胞杀伤实验检测结果显示,NK细胞和扩增后的NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用无明显差异,对小鼠体内肿瘤的杀伤效果也无明显差异。结论:膜表达IL-21的K562细胞可显著增强NK细胞的体外扩增能力,但不影响NK细胞的体内外杀伤功能,可用于后续NK细胞的体外规模化扩增。

EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路的影响

目的:基于HMGB1/Beclin-1信号通路探究EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体的作用机制。方法:40只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常(A)组、模型(B)组、二甲双胍(C)组、EPO(D)组,每组10只,对B、C、D组采用高脂饲料及链脲佐菌素进行糖尿病肾病建模。建模成功后,对C组灌胃100 mg/kg二甲双胍,对D组腹腔内注射100 U/kg EPO,A组、B组同期灌胃等体积生理盐水;另取20只大鼠建模,建模成功后,随机分为E组、F组,E组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂,F组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂和腹腔内注射100 U/kg EPO;取HK-2细胞,分为高糖+HK-2细胞(HH)组、EPO+高糖+HK-2细胞(EH)组、甘草酸苷L+高糖+HK-2细胞(LH)组,葡萄糖培养后进行细胞实验。血糖仪检测大鼠血糖,全自动生化分析仪检测大鼠生化指标,PAS染色法检测大鼠肾组织病理形态,免疫印迹法检测HMGB1/Beclin-1蛋白表达,RT-PCR及免疫组化法检测NK细胞活化性受体表达。结果:与A组比较,B组血糖及血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),体质量明显降低(P<0.05);与B组比较,C组、D组血糖及24 h尿量、血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46 mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05),体质量明显升高(P<0.05),肾脏病理学明显改善,且D组较C组变化显著(P<0.05);与A组比较,B组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达显著升高(P<0.05),与B组相比,C、D、E、F组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),且D组HMGB1/Beclin-1蛋白表达与C组相比降低明显(P<0.05),E组与D组无明显差异,F组较E组降低明显;HMGB1/Beclin-1蛋白表达与NKp30、NKp44、NKp46mRNA均呈正相关(P<0.05);与HH组相比,EH、LH组细胞增殖率显著升高(P<0.05),凋亡率及HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),而LH组与EH组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EPO可有效降低糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体表达,抑制HMGB1/Beclin-1信号通路,提示EPO可能通过调控NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路发挥作用,而NK细胞活化性受体表达与HMGB1/Beclin-1信号通路呈正相关。

人NK细胞亚群的生物学变化与机体衰老的关系

自然杀伤(Natural kill,NK)细胞是一种固有免疫淋巴样细胞(Innate lymphoid cell,ILP),是除T细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞,其特征是无需抗原预先致敏即可快速反应产生非特异性杀伤效果。NK细胞通过分泌穿孔素、颗粒酶、细胞因子和趋化因子等使靶细胞凋亡,还可表达Fc受体(CD16),介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(Antibody-dependent cell-medicated cytotoxicity,ADCC)。随着年龄增长免疫系统出现功能减退,NK细胞启动适应性免疫应答障碍,不能调动有效免疫反应等生理现象,导致与衰老有关疾病如感染和肿瘤等发生。本文就NK细胞亚群在整个生命周期中的生物学变化来探讨NK细胞与机体衰老的关系,为NK细胞的临床应用打下基础。