红细胞产生的NK细胞增强因子及其生物学作用

本文综述了红细胞浆内存在的ＮＫ细胞增强因子（ＮＫＥＦ）的发现、分子结构、基因克隆、基因重组及其生物学活性。ＮＫＥＦ是近年新发现的抗氧化剂家族中的重要成员，其在增强ＮＫ细胞毒效应、抗肿瘤。

NK4拮抗HGF促进肿瘤细胞凋亡的生物学效应

观察NK4通过拮抗肝细胞生长因子(HGF)诱导不同肿瘤细胞凋亡,研究其生物学作用及分子机制.以足叶乙甙(VP-16)诱导凋亡,分别或经HGF蛋白、NK4蛋白处理5种肿瘤细胞(B细胞淋巴瘤细胞系Raji、人急性粒细胞白血病细胞系HL-60、宫颈癌细胞系HeLa、前列腺癌细胞系PC-3、非小细胞肺癌细胞系A549),采用流式细胞术(FCM)、吖啶橙(AO)染色法、苏木素-伊红(HE)染色法定量观察5种肿瘤细胞的凋亡情况,并进行相关分析.FCM发现,经VP-16处理5种肿瘤细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.001),而HGF+VP-16组凋亡率明显下降(P<0.01),HGF+NK4+VP-16组细胞凋亡率均明显高于HGF+VP-16组(P<0.05).AO染色和HE染色结果也证实,5种肿瘤细胞经VP-16处理后凋亡率均显著增高(P<0.001,P<0.001),而HGF+VP-16组细胞凋亡率均明显低于VP-16组(P<0.001,P<0.01),HGF+NK4+VP-16组细胞凋亡率均明显高于HGF+VP-16组(P<0.001,P<0.05).此外,发现NK4+VP-16组、HGF+NK4+VP-16组、VP-16组等3组间凋亡率无统计学差异(P>0.05).以上结果提示,HGF蛋白可抵抗凋亡诱导剂VP16的作用,明显降低细胞凋亡;NK4通过竞争性抑制HGF从而促进肿瘤细胞的凋亡,具有潜在的肿瘤治疗价值.

胸膜渗液中白细胞介素2及自然杀伤细胞毒因子活性的研究

采用核素掺入法及微量酶法检测２６例结核性和肿瘤性胸膜渗液中ＩＬ—２和自然杀伤细胞毒因子（ＮＫＣＦ）活性。结果表明：结核性胸膜渗液中ＩＬ—２、ＮＫＣＦ水平分别高于肿瘤性胸膜渗液。结核组病人胸膜渗液中，ＩＬ—２水平与ＮＫＣＦ杀伤活性呈线性正相关。

穴位注射LAK细胞对Balb/C小鼠免疫功能的影响

目的:观察不同数目LAK细胞对小鼠连续多次穴位注射其免疫功能的变化,为临床应用提供客观依据。方法:30只小鼠随机分组,每组10只,设为对照组(生理盐水组),低剂量组(LAK细胞5×10~6/ml)和高剂量组(LAK细胞5×10~7/ml)。用另10只小鼠制备LAK细胞,用LAK细胞分别对2组小鼠足三里、肝俞穴位注射,每个穴位0.02ml,1次/日,连续7天,对照组注射生理盐水,注射穴位、实验相同。结果:LAK细胞低剂量组,小鼠免疫功能明显高于对照的生理盐水组,NK细胞杀伤活性,从对照生理盐水组37±2.0％增高到51±2.5％,NKCF水平从35.61％增高到48±6.3％,IL-2活性从0.3±0.07增高到0.6±0.14,经统计学处理有显著性差异。LAK高剂量组小鼠免疫功能明显高于低剂量组,NK细胞杀伤活性从低剂量组的51±2.5％增高到77±5.4％,NKCF水平从48±6.3％增高到66±10％,IL-2活性从0.6±0.14增高到1.0±0.07,经统计学处理具有显著性差异。结论:LAK细胞对小鼠足三里、肝俞进行穴位注射能明显提高小鼠的免疫功能,高剂量组明显优于低剂量组。

miR-296-5p靶向MICB促进口腔鳞癌生长的分子机制

目的:研究微小RNAmiR-296-5p对口腔鳞癌细胞存活及自然杀伤细胞因子分泌的影响,并探讨其机制。方法:运用免疫组织化学方法检测癌旁组织、口腔鳞癌组织中MICB的蛋白表达;qRT-PCR法检测组织和口腔鳞癌细胞Cal27中miR-296-5p的表达;将anti-miR-296-5p组(转染anti-miR-296-5p)、miR-296-5p组(转染miR-296-5pmimics)、pcDNA3.1-MICB组(转染pcDNA3.1-MICB)、anti-miR-296-5p+si-MICB组(anti-miR-296-5p和si-MICB共转染),均用脂质体转染至Cal27细胞;MTT法检测各组细胞的存活率;ELISA法检测各组细胞中TNF-α、IFN-γ的含量;Westernblot检测各组细胞中MICB的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与癌旁组织相比,口腔鳞癌组织中MICB的蛋白表达显著降低,miR-296-5p的表达显著升高(P<0.05);抑制miR-296-5p、过表达MICB均可显著下调Cal27细胞的存活率,上调NK细胞因子TNF-α、IFN-γ的含量;miR-296-5p可抑制野生型MICB细胞的荧光活性,且负向调控MICB的表达;敲减MICB可逆转抑制miR-296-5p对Cal27细胞存活率的下调及对NK细胞因子含量的上调作用。结论:下调miR-296-5p可抑制口腔鳞癌细胞的存活,促进NK细胞的杀伤作用,其机制可能与靶向负调控MICB有关,其可为口腔鳞癌的靶向治疗提供依据。

人参皂苷Rb1、Rg1与5-氟脲嘧啶对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:探讨人参皂甙Rb1、Rg1与5-氟脲嘧啶联合应用对荷瘤小鼠免疫功能的交互影响作用。方法:建立荷瘤小鼠模型,随机分为6组,人参皂甙Rb1和Rg1灌胃给药,每天0.2 mL/20 g,每日1次;5-氟脲嘧啶腹腔注射,每天0.2 mL/20 g,每日1次;模型组给予生理盐水0.2 mL/20 g,每日1次。10 d后检测NK细胞杀伤功能、T淋巴细胞增殖功能和腹腔巨噬细胞TNF-α含量。结果:5-氟脲嘧啶可降低NK细胞杀伤功能、T淋巴细胞增殖功能和腹腔巨噬细胞TNF-α含量(P<0.05);人参皂苷Rb1能够显著提高NK细胞功能和TNF-α含量,并可拮抗5-氟脲嘧啶的抑制作用(P<0.05),但对T淋巴细胞增殖功能无影响(P>0.05);人参皂苷Rg1能够显著提高T淋巴细胞增殖功能和TNF-α含量,并可拮抗5-氟脲嘧啶的抑制作用(P<0.05),但对NK细胞功能无影响(P>0.05)。结论:人参皂甙Rb1、Rg1可拮抗5-氟脲嘧啶对免疫功能的抑制作用。

IP-10 and fractalkine induce cytotoxic phenotype of murine NK cells

We characterized the murine NK cell subsets of the tumor microenvironment （TME） with low expressions of CD16 and NKG2D and investigated the chemokines that deter CD 16~~w NKG2Dl^w subsets. Our results demonstrated the activation of primary and KY- 1 NK cell by ligands and found that exogenous CXCL10/interferon-gamma-induced protein 10 （IP-10） and fractalkine （FKN） can up-regulate the expression of CD 16 and NKG2D. Moreover, both IP-10 and FKN are shown to facilitate migration, adhesion and cyto- toxicity of NK cell subsets of the TME, due to the up-regu- lated CD16 and NKG2D. Overall, our data provide a new path by which to enhance murine NK cell cytotoxic potential and improve the quality of NK cells of the TME.