穴位刺激联合COX-2抑制剂对乳腺癌骨转移大鼠镇痛、NK细胞活性及PK2蛋白水平的影响

目的:探究穴位刺激联合COX-2抑制剂对乳腺癌骨转移大鼠镇痛、NK细胞活性及PK2蛋白的作用机制。方法:选取50只SPF级SD雌性大鼠,随机数字表法分为正常(A)组、模型(B)组、穴位刺激(C)组、COX-2抑制剂(D)组与穴位刺激联合COX-2抑制剂(E)组,每组10只,对B、C、D与E组采用胫骨内注射乳腺癌细胞建立乳腺癌骨转移模型,A组不建立该模型,建模成功后,对C组给予穴位刺激治疗,对D组给予灌胃25 mg/kg的塞来昔布,对E组给予穴位刺激联合塞来昔布治疗,A组、B组同期给予灌胃同体积生理盐水,观察并记录大鼠疼痛情况,双能线骨密度仪检测大鼠骨密度及骨矿物质含量,HE染色法检测骨组织病理形态,免疫印迹法检测NK细胞活性,免疫组化法检测PK2蛋白表达。结果:与A组比较,B组50%PWT、TWL显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),双侧后肢负重差值显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05),与B组比较,C组、D组与E组50%PWT、TWL明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),双侧后肢负重差值显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),且D组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05),E组比D组变化明显,差异具有统计学意义(P<0.05);A组大鼠骨组织形态完整,骨小梁排列整齐,骨皮质连续,无坏死区域,骨髓腔内充满深染的血细胞,B组骨组织形态遭到破坏,骨皮质出现连续性中断,并可见大量肿瘤细胞浸润,瘤细胞形态不规则,且排列紊乱,细胞核大,异型性明显,与B组比较,C组、D组与E组病理形态明显改善;与A组比较,B组BMD、BMC显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),与B组比较,C组、D组、E组BMD、BMC显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05),且D组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05),E组比D组升高显著,差异具有统计学意义(P<0.05);与A组比较,B组大鼠胫骨组织中NKp30、NKp44、NKp46蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),与B组比较,C组、D组与E组大鼠胫骨组织中NKp30、NKp44及NKp46蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05),且D组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05),E组比D组升高显著,差异具有统计学意义(P<0.05);与A组比较,B组大鼠胫骨组织中PK2蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),与B组比较,C组、D组与E组大鼠胫骨组织中PK2蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05),且D组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05),E组比D组升高显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:穴位刺激联合COX-2抑制剂对乳腺癌骨转移大鼠具有显著的镇痛作用,并可显著改善NK细胞活性,促进PK2蛋白表达。

40例晚期非小细胞肺癌患者T细胞亚群及NK细胞活性

现代免疫学研究表明,免疫抑制一定先于和伴随可见肿瘤的发生。许多研究报道晚期肺癌患者的免疫监视功能低下。我们用小鼠抗人淋巴细胞单克隆抗体OKT_3,OKT_4,OKT_8及^(125)I释放法检测40例晚期非小细胞肺癌患者外周血,发现T细胞亚群数及NK细胞活性均显著地低于正常健康者,表明患者的免疫监视功能处于被抑制的状态。

NE系统在冷应激诱导NK细胞活性下降中的作用

目的 用 6 OHDA分别选择性地损毁外周和中枢的去甲肾上腺素 (NE)能系统 ,探讨去甲肾上腺素能系统在冷应激诱导大鼠NK细胞活性下降中的作用。方法 大鼠置于4℃的冷室 4h。腹腔和侧脑室分别注射 6 OHDA。采用YAC 1细胞51Cr释放法测定脾脏NK细胞的活性。用免疫细胞化学法观察下丘脑室旁核 (PVN)和脑干蓝斑 (LC)中的Fos表达 ,以及Fos表达阳性的神经元的性质。用放射免疫法测定血浆CORT的浓度。结果 脑室注射 6 OHDA能部分翻转冷应激诱导的血浆CORT浓度的升高 ,减少PVN和LC中Fos的表达 ,同时使脾脏NK细胞活性不再下降。同样 ,腹腔注射 6 OHDA也能翻转冷应激诱导NK细胞活性的下降 ,但对脑内Fos表达没有明显影响。另外 ,双染实验表明 ,PVN中有少量的Fos阳性的神经元同时表达精氨酸加压素 (AVP)或催产素 (OT) ,而LC中大多数Fos阳性的神经元同时表达酪氨酸羟化酶 (TH)。结论 冷应激诱导大鼠NK细胞活性下降的可能机制是 :一方面通过中枢去甲肾上腺素能系统去激活HPA轴 ;另一方面介导外周交感神经系统。最后两者共同作用于脾脏NK细胞 ,导致其活性下降。

乳酸菌源有机硒对肝损伤小鼠脾脏脂质过氧化和NK细胞活性的保护效应研究

本文通过研究乳酸菌源有机硒干预CCl_4致肝损伤小鼠脾脏NK细胞活性和脂质过氧化反应的变化,探讨该有机硒在抗损伤保护过程中的效应及其机制。分别选用60只健康成年小鼠,雌雄对半,随机分成对照组(C组),有机硒组(Se组),CCl_4组、CCl_4-有机硒保护组(CCl_4-Se组),每组15只。通过腹腔注射CCl_4诱发肝损伤后,分别在第2、4周检测脾脏NK细胞活性及其组织匀浆GSH-Px、CAT、SOD活性和MDA含量变化、结果显示,在整个实验期内,C组、Se组和CCl_4-Se组脾组织匀浆GSH—Px、CAT和SOD活性均高于或明显高于CCl_4组,Se和CCl_4-Se组与C组比较除SOD活性在第4周有明显升高外均差异不显著;CCl_4组小鼠脾脏MDA含量均显著高于C组、Se组和CCl_4-Se组,而CCl_4-Se组与C组接近,Se组较CCl_4-Se组和C组低;Se组NK细胞活性最高,第4周明显高于C组,CCl_4组最低且低于或明显低于CCl_4-Se、Se和C组,CCl_4-Se组与C组无明显差异。结果提示,乳酸菌源有机硒能够提高正常机体抗氧化能力,在干预肝损伤过程中,可以通过改善和提高脾组织抗氧化酶活性及NK细胞活性发挥积极有效的作用。

冷应激诱导的脾脏NK细胞活性下降和脑内c-fos表达

目的 :观察单一冷应激对大鼠脾脏NK细胞活性的影响以及脑内Fos表达。方法 :大鼠置于 4℃的冷室 4h。采用YAC 1细胞51Cr释放法测定脾脏NK细胞的活性。用免疫细胞化学观察脑内有关核团的Fos表达 ,以及PVN和LC中Fos表达阳性的神经元的性质。结果 :单一冷应激能使脾脏NK细胞活性明显下降 ,下丘脑室旁核 (PVN)和脑干蓝斑 (LC)出现明显的Fos表达。双染实验表明 ,PVN中有部分神经元同时表达精氨酸加压素 (AVP) ,LC中大多数神经元同时表达酪氨酸羟化酶 (TH)。结论

电针疗法对化疗患者T细胞亚群、NK细胞活性、体液免疫及白细胞计数的影响

目的 观察电针疗法对化疗患者T细胞亚群、NK细胞活性、体液免疫及白细胞计数的影响。方法 对化疗患者加用电针疗法 ,在电针治疗前 (化疗前 )和电针治疗 4个疗程后测定患者的T细胞亚群、NK细胞活性、体液免疫及白细胞计数。结果 化疗并使用电针疗法 4个疗程后 ,T细胞亚群、NK细胞活性、体液免疫及白细胞计数较治疗前无明显变化 (P>0 .0 5 )。使用电针治疗的化疗患者白细胞计数明显高于未用升白药物的对照组 (P <0 .0 1)。结论 电针疗法具有减轻化疗所致免疫损害的作用 。

慢性萎缩性胃炎和胃癌患者T细胞亚群及NK细胞活性的检测研究

本文用OKT单抗致敏血球花环法和MTT比色法对慢性萎缩性胃炎(CAG)和胃癌(GC)患者进行外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性的检测。结果显示CAG患者CD3+亚群及CD4/CD8均较健康对照明显降低(P<001),NK细胞活性显著低下(P<001)。胃癌患者术前CD3+、CD4+亚群及CD4/CD8较健康对照明显降低(P<001),CD8+亚群显著升高(P<001),NK细胞活性明显升高(P<001)。与CAG患者比较,胃癌患者术前CD3+亚群及CD4/CD8明显降低(P<005),CD8+亚群显著升高(P<001),NK细胞活性显著低下(P<001)。而术后两周,以上指标有不同程度的恢复,说明CAG患者的细胞免疫功能已处于失调状态,而胃癌患者的免疫失调更为严重,但手术切除肿瘤后病人的免疫失调能迅速恢复,一般为两周左右。

微量乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性的几个主要影响因素

对乳酸脱氢酶释放法测定小鼠脾脏 NK细胞活性中的酶促反应时间、效靶细胞比例、检测波长、细胞毒试验孵育时间、维持液中小牛血清 ( FCS)浓度等 5个重要的影响因素进行了探索。结果显示 ,酶促反应时间以 1 0 min最佳 ;效靶细胞比例以 1 5∶ 1为适宜 ;最适检测波长为 570 nm,其结果线性关系好 ;细胞毒试验孵育时间以 2 h为宜 ;维持液中小牛血清以低浓度为宜 ,其结果更接近自然杀伤百分率计算公式 ,并选用 2

雪莲虫草精对NK细胞活性IL－2活性的影响

大鼠灌服雪莲虫草精，动物抗凝血能明显提高ＮＫ细胞活性（Ｐ＜０．０５）。１．２５ｇ／ｋｇ剂量组动物血清可提高ＩＬ－２活性（Ｐ＜０．０５），但７．５、３．７５ｇ／ｋｇ剂量组作用不明显，相反有一定抑制作用。

肺气虚证患者NK细胞活性、TNF和IL-2的变化及临床意义

目的测定肺气虚证患者肺功能及免疫功能状况,为肺气虚证本质的研究提供依据。方法对58例肺气虚证患者及20例正常对照组者进行肺功能、自然杀伤(NK)细胞活性、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF)的测定。结果肺气虚证患者的肺功能、NK细胞活性、IL-2均明显低于正常对照者,而TNF则明显升高;不同程度的肺气虚证患者之间上述指标也有差异。结论肺气虚证患者存在通气功能障碍,气道阻塞;免疫功能障碍,NK细胞活性下降。

可溶性IL-2受体及NK细胞活性在噬血细胞性淋巴组织细胞增多症中的意义

本研究通过检测噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)患者外周血中可溶性IL-2受体(sCD25)及NK细胞活性,探讨它们在HLH中的意义。应用酶联免疫吸附法检测20例HLH患者、15例正常对照者、20例急性髓系白血病(AML)患者及20例系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血血清sCD25水平;用流式细胞术CD107a标记法及传统的LDH释放法检测HLH组及正常对照组外周血NK细胞活性。结果显示:HLH组血清sCD25水平较正常对照组、AML组及SLE组均明显升高(P<0.001);HLH组NK细胞活性明显低于正常对照组(P<0.05);将流式细胞术CD107a标记法与传统的LDH释放法检测NK细胞活性进行相关分析,该两种检测方法之间具有显著相关性(r=0.73,P<0.05)。结论:血清sCD25及外周血NK细胞活性检测是HLH重要的辅助诊断指标,流式细胞术CD107a标记法检测NK细胞活性简单、稳定、重复性高,有助于HLH的临床诊断。

中老年人五禽戏锻炼3个月前后NK细胞活性的变化

通过观察53名健康中老年人五禽戏锻炼3个月前后,机体NK细胞的活性变化,探讨五禽戏锻炼对中老年人机体免疫功能调节的作用机制。结果表明,经过3个月的五禽戏锻炼,受试者NK细胞活性均呈升高趋势,其中女性锻炼者升高显著(P<0.001)。结论:五禽戏锻炼为中小强度有氧运动,其能通过调节形、意、气,改善锻炼者的精神状态,一定程度上增加机体NK细胞活性,调节机体免疫平衡。

扶正消岩汤对EMT-6乳腺癌荷瘤裸鼠T细胞亚群及NK细胞活性的影响

目的:观察扶正消岩汤对EMT-6乳腺癌荷瘤裸鼠T细胞亚群及NK细胞活性的影响。方法:将造模成功后的EMT-6乳腺癌荷瘤裸鼠随机分为治疗组,对照组和模型组,每组20只。治疗组给予扶正消岩汤,对照组给予参麦注射液,模型组给予等体积的生理盐水,每日2次,连续给药14天。取小鼠眼底静脉血,检测各组小鼠外周血T细胞亚群的百分率;将各组小鼠脱颈处死取其脾脏制备脾细胞悬液,应用MTT法检测各组小鼠脾脏中NK细胞活性。结果:扶正消岩汤可明显增加乳腺癌荷瘤裸鼠外周血中CD4+T淋巴细胞百分率,提高CD4+/CD8+比值,与模型组比较具有显著性差异(P<0.05),与对照组作用相似。结论:扶正消岩汤可提高EMT-6乳腺癌荷瘤裸鼠的免疫功能,是该方剂抑制乳腺癌的作用机制之一。

全氟辛烷磺酸(PFOS)对小鼠T、B淋巴细胞增殖功能和NK细胞活性的干扰效应研究

为初步探讨全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane sulfonate,PFOS)的细胞免疫毒性,采用每天1次经口灌胃染毒的方法,研究了PFOS经口重复剂量染毒对C57BL/6小鼠淋巴细胞增殖功能和NK细胞活性的影响.选择雄性C57BL/6小鼠40只,随机分为4组.实验组PFOS染毒剂量分别为5、10、20mg·kg-1(bw),对照组给予2%Tween-80.每天1次经口灌胃染毒7d后,制备脾脏T淋巴细胞悬液,以刀豆蛋白A(ConA)和大肠杆菌脂多糖(LPS)作为刺激源,采用MTT法检测T、B淋巴细胞增殖功能,乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞活性.结果表明,10mg·kg-1和20mg·kg-1PFOS染毒组小鼠体重呈明显的下降趋势,且小鼠胸腺和脾脏指数显著低于对照组(p<0.05),而各PFOS染毒组小鼠肝脏指数均显著高于对照组(p<0.05).PFOS各染毒组T淋巴细胞的增殖功能均显著低于对照组(p<0.05);10mg·kg-1和20mg·kg-1PFOS染毒组小鼠NK细胞的活性显著降低(p<0.05).研究结果显示,PFOS暴露可降低小鼠淋巴细胞增殖功能和NK细胞活性,表明PFOS具有免疫抑制效应.

流式细胞术检测NK细胞活性在获得性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症诊断中的应用

本研究目的旨在建立一种准确、稳定的NK细胞杀伤活性检测方法,应用于获得性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症诊断。21例疑似患者及20例健康对照者纳入本研究。根据HLH-2004标准将疑似患者分为确诊组和排除组,将pEGFP-N1质粒转染人NK细胞的天然靶细胞K562,经过G418筛选后进一步单克隆,得到稳定、均一表达绿色荧光蛋白的EGFP-K562细胞,将EGFP-K562细胞与人外周血单个核细胞按10∶1的比例混合孵育2小时后,用碘化丙啶(PI)标记,用流式细胞仪分析呈红、绿色荧光的细胞数,最后计算NK细胞的杀伤效率;同时采用LDH释放法测定外周血NK细胞对单纯K562细胞的杀伤活性,并进行比较。结果表明:获得了稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP-K562细胞;流式细胞仪检测表明健康人NK细胞杀伤率与病人组之间存在明显差异,流式细胞仪技术检测NK细胞杀伤活性与传统LDH释放法检测NK细胞杀伤活性具有显著相关性。结论:EGFP-K562细胞株作为靶细胞用于流式细胞术检测NK细胞杀伤活性,无需预先染色和标记靶细胞,操作简便、省时、稳定、重复性高,可应广泛应用于获得性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症诊断。

康艾注射液对鼻咽癌首次放疗或放化疗患者外周血NK细胞活性的影响

目的探讨康艾注射液对鼻咽癌首次放疗或放化疗患者外周血NK细胞活性的影响。方法选择60例经病理确诊为鼻咽癌且拟行首次放疗或放化疗的患者,随机分为治疗组和对照组各30例。患者均接受二维或三维放疗,Ⅲ、Ⅳ期患者酌加诱导化疗和(或)同步化疗。治疗组在放疗或放化疗基础上静注康艾注射液40 mL/(次·d)×30 d,在放疗全程结束前完成。采用FACS Calibur流式细胞仪检测治疗前后患者的外周血NK细胞活性。结果治疗组治疗前后外周血NK细胞活性分别为28.5%±9.4%、34.5%±8.2%,对照组分别为29.0%±9.6%、28.5%±9.2%;治疗组治疗前后、两组治疗后NK细胞活性比较,P均<0.05。结论康艾注射液能显著提高鼻咽癌首次放疗或放化疗患者外周血NK细胞活性,改善鼻咽癌放疗或放化疗患者的免疫功能。

输血对胃癌手术患者NK细胞活性的影响

目的：探讨输血后胃癌手术患者非特异性免疫功能变化规律及其机理。方法：应用MTT法检测患者外周静脉血中NK细胞活性，随机研究了38例胃癌患者术前后第1、3、7天时NK细胞活性的动态变化，并与11例正常健康组对照。结果：胃癌患者术后一周输血组24例NK细胞活性明显下降，且恢复缓慢，与胃癌非输血组比较差异显著（P＜0．01）。结论：胃癌手术患者输血，可加重术后NK细胞活性的抑制，胃癌手术患者应尽量避免术中使用异体输血。

胃癌围手术期T细胞亚群和NK细胞活性检测的临床意义

目的 探讨胃癌围手术期细胞免疫功能的变化及与肿瘤分期的关系。方法 采用流式细胞仪测定40例胃癌患者围手术期外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性。结果 胃癌患者术前外周血CD_3^+细胞、CD_4^+细胞、CD_4^+/CD_8^+比值和NK细胞活性明显低于正常对照组,CD_8^+细胞显著升高,并与病理分期相关,分期越晚改变越大。手术后以上指标可显著改善。结论 胃癌患者细胞免疫功能低下,病理分期越晚细胞免疫功能越低,肿瘤负荷是其主要原因。

武汉地区正常人外周血T细胞亚群、NK细胞活性、诱生IFN、IL-2能力和血清IFN-α水平的研究

本文检测了武汉地区70例健康献血员(年龄:30～45岁),男女各35例)外周血T细胞亚群、NK细胞活性、诱生IFN-α、IFN-γ,IL-2能力和血清IFN-α水平。结果表明除女性受试者外周血NK细胞活性显著性地低于男性外,其他各项指标男女性别之间虽有差异,但均无显著性意义。