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和厚朴酚增强NK-92细胞对KG-1a细胞的杀伤作用及机制研究 被引量:5
1
作者 张海鹏 陈景 +5 位作者 陈秀云 叶汉深 李军 张普山 佘妙容 李晓红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期475-480,共6页
目的:观察和厚朴酚是否增强NK-92细胞对人急性髓细胞白血病KG-1a细胞的杀伤作用,并探讨其机制。方法:CCK8法检测和厚朴酚对KG-1a细胞的毒性作用,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测NK-92细胞对KG-1a细胞的杀伤作用,流式细胞... 目的:观察和厚朴酚是否增强NK-92细胞对人急性髓细胞白血病KG-1a细胞的杀伤作用,并探讨其机制。方法:CCK8法检测和厚朴酚对KG-1a细胞的毒性作用,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测NK-92细胞对KG-1a细胞的杀伤作用,流式细胞术检测和厚朴酚对KG-1a细胞凋亡的影响以及KG-1a细胞表面自然杀伤细胞2族成员D(natural killer group 2,member D,NKG2D)配体ULBP1、ULBP2和ULBP3的表达。结果:CCK8实验结果显示,随着和厚朴酚浓度的增高,KG-1a细胞的活力逐渐降低,但24 h后KG-1a细胞活力仍大于40%。LDH实验表明,10μmol/L的和厚朴酚处理KG-1a细胞24 h后,NK-92细胞对KG-1a细胞的杀伤率比用药前显著提高(P<0.01)。流式细胞术结果证实,和厚朴酚处理24 h后,在效靶比为5∶1时,NK-92细胞诱导KG-1a细胞的凋亡率显著高于未处理组(P<0.01)。同时,KG-1a细胞表面NKG2D配体(ULBP1、ULBP2和ULBP3)的表达显著高于未处理组(P<0.05)。结论:和厚朴酚可以通过上调KG-1a细胞表面NKG2D配体的表达增强NK-92细胞对KG-1a细胞的杀伤作用。 展开更多
关键词 和厚朴酚 KG-1a细胞 nk-92细胞 NKG2D配体 急性髓细胞白血病
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去甲基化处理对NK-92MI细胞系抑制性受体KIR表达的影响 被引量:3
2
作者 高晓宁 林季 +4 位作者 王莉莉 高丽 靳海杰 孙敬芬 于力 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期656-660,共5页
为分析NK细胞系NK-92MI细胞中抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immnoglobulin-like re-ceptor,KIR)的基因启动子区的甲基化模式及去甲基化处理对基因表达的影响,探讨基因kir可能的表达调控机制,采用亚硫酸氢盐测序法检测NK-... 为分析NK细胞系NK-92MI细胞中抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immnoglobulin-like re-ceptor,KIR)的基因启动子区的甲基化模式及去甲基化处理对基因表达的影响,探讨基因kir可能的表达调控机制,采用亚硫酸氢盐测序法检测NK-92MI细胞kir2DL1和kir2DL2/2DL3基因启动子区的甲基化水平,应用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞以诱导CpG岛去甲基化,RT-PCR方法检测其基因表达。结果显示:kir2DL1和kir2DL2/2DL3基因启动子区CpG二核苷酸甲基化频率依次在25%-88%、5%-80%之间;应用甲基化抑制剂5-氮胞苷可以诱导NK-92MI细胞重新表达kir2DL1基因,并使kir2DL1、kir2DL2和kir2DL3基因表达量增加。结论:启动子甲基化参与调控NK-92MI细胞基因kir表达。 展开更多
关键词 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 nk-92MI细胞系 去甲基化处理
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NK-92细胞对人卵巢癌细胞体外杀伤活性 被引量:2
3
作者 陈纲 凌斌 +5 位作者 祝怀平 赵卫东 张红雁 吴爱东 魏海明 田志刚 《安徽医科大学学报》 CAS 2004年第2期90-93,共4页
目的 研究NK 92细胞对人卵巢癌细胞的体外杀伤活性以及放射线照射后对其杀伤活性的影响。方法 以体外培养人卵巢癌细胞系HO 8910为靶细胞 ,以NK 92的敏感细胞株K5 6 2作为对照 ,应用 4h51Cr释放法检测不同效靶比情况下体外培养NK 92... 目的 研究NK 92细胞对人卵巢癌细胞的体外杀伤活性以及放射线照射后对其杀伤活性的影响。方法 以体外培养人卵巢癌细胞系HO 8910为靶细胞 ,以NK 92的敏感细胞株K5 6 2作为对照 ,应用 4h51Cr释放法检测不同效靶比情况下体外培养NK 92细胞的杀伤活性 ,并应用医用电子直线加速器对NK 92细胞进行照射处理 (0、4 0 0cGy)后再检测其杀伤活性变化。结果 NK 92细胞未照射组 ,效靶比较低时 (1∶1、5∶1)对于HO 8910细胞杀伤率为 39%~4 5 % ,随效靶比升高 ,杀伤率随之上升 ,10∶1时杀伤率显著上升为 5 9% ,2 0∶1时杀伤率仅上升了 6 % ;对于K5 6 2细胞 ,杀伤率为 5 8%~ 71%。照射后 2d ,4 0 0cGy组NK 92细胞对HO 8910细胞不同效靶比的杀伤率与 0cGy组相比有所降低 ,其总体杀伤率为 4 2 %~ 6 2 % ,对K5 6 2细胞杀伤范围在 4 4 %~ 6 1%之间。结论 NK 92细胞对人卵巢癌细胞系HO 8910具有较高的杀伤活性 ,经放射线照射后仍保留一定的杀伤活性。 展开更多
关键词 nk-92细胞 卵巢癌 体外杀伤活性 癌细胞 免疫学
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紫杉醇对NK-92MI细胞杀伤功能及凋亡的影响 被引量:1
4
作者 李建华 傅炜昕 +4 位作者 侯佳宜 秦博 贾秀坤 范世光 梁再赋 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期30-35,共6页
探讨紫杉醇对人自然杀伤细胞系NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响。用不同浓度的紫杉醇处理NK.92MI细胞后,测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;同时检测NK·92MI细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Ba】【的表达。结果表明... 探讨紫杉醇对人自然杀伤细胞系NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响。用不同浓度的紫杉醇处理NK.92MI细胞后,测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;同时检测NK·92MI细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Ba】【的表达。结果表明,紫杉醇可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK.92MI细胞的凋亡,而后者与Bcll2/Ba】【基因表达增高有关。 展开更多
关键词 紫杉醇 nk-92MI细胞 凋亡 BCL-2 BAX
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低浓度紫杉醇对NK-92MI细胞增殖及细胞毒效应的影响 被引量:2
5
作者 曹飞麟 郑瑞 +3 位作者 周申康 马兆生 林辉 徐东 《浙江医学》 CAS 2012年第6期431-434,437,共5页
目的 探讨低浓度肿瘤化疗药物紫杉醇对人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞(NK-92MI)细胞系生长及细胞毒效应的影响.方法 体外培养NK-92MI,加入不同浓度(1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03、0.015、0.008、0.004μmol/L)的紫杉... 目的 探讨低浓度肿瘤化疗药物紫杉醇对人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞(NK-92MI)细胞系生长及细胞毒效应的影响.方法 体外培养NK-92MI,加入不同浓度(1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03、0.015、0.008、0.004μmol/L)的紫杉醇培养72h,MTS法检测NK-92MI细胞的增殖;以低浓度(0.02μmol/L)的紫杉醇预培养NK-92MI细胞48h,杀伤试剂盒检测NK-92MI 细胞对K-562细胞的细胞毒效应,流式细胞术检测NK-92MI细胞表面NKG2D受体的表达,RT-PCR检测NK-92MI受体NKG2D、NKG2A/B以及效应分子颗粒酶、穿孔素及IFN-γ基因的表达,ELISA检测IFN-γ分泌的改变.结果 高浓度(0.06~1μmol/L)紫杉醇明显抑制细胞的生长(P<0.05),且呈浓度梯度依赖性;低浓度(0.008~0.06μmol/L)紫杉醇能相对促进NK-92MI细胞的增殖,但无统计学意义(P>0.05),当低于0.008μmol/L时,对NK-92MI细胞的增殖不影响(P>0.05).0.02μmol/L紫杉醇能增强NK-92MI细胞的细胞毒活性,在效靶比为10∶1、5∶1、2.5∶1、1.25∶1时,实验组细胞毒效应均明显高于对照组(P<0.05或0.01).紫杉醇处理组NK-92MI细胞高表达穿孔素、颗粒酶及IFN-γ(均P<0.05),而抑制性受体NKG2A/B基因表达下调(P<0.05),未发现表面杀伤性受体NKG2D基因和蛋白的表达上调(P >0.05).结论 低浓度紫杉醇能促进NK-92MI细胞的增殖和细胞毒活性,细胞毒活性的增强可能与紫杉醇处理后NK-92MI细胞活化能力增强以及相关基因(穿孔素和颗粒酶)的表达增强有关. 展开更多
关键词 紫杉醇 nk-92MI细胞 干扰素-γ NKG2D受体 NKG2A/B受体 颗粒酶 穿孔素
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去甲基化处理对NK-92MI细胞杀伤活力的影响 被引量:1
6
作者 高晓宁 王莉莉 +1 位作者 林季 于力 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期924-928,共5页
为观察DNA去甲基化处理对NK细胞系NK-92MI细胞抑制性KIR表达及细胞杀伤活力的影响,探讨抑制性kir基因去甲基化与NK细胞功能之间的可能联系,采用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞,采用流式细胞术检测NK-92MI细胞表面KIR3DL1、KIR2DL2... 为观察DNA去甲基化处理对NK细胞系NK-92MI细胞抑制性KIR表达及细胞杀伤活力的影响,探讨抑制性kir基因去甲基化与NK细胞功能之间的可能联系,采用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞,采用流式细胞术检测NK-92MI细胞表面KIR3DL1、KIR2DL2/KIR2DL3、KIR2DL1表达及细胞活力,并采用流式细胞仪将NK-92MI细胞分选为KIR3DL1阳性和KIR3DL1阴性细胞群,采用乳酸脱氢酶释放法检测NK-92MI细胞对白血病细胞系K562的杀伤活力。结果显示:应用终浓度为1.0、2.5和5μmol/L的5-氮胞苷作用72小时可以诱导NK-92MI细胞KIR3DL1、KIR2DL2/KIR2DL3、KIR2DL1表达增加,同时NK-92MI对K562细胞的杀伤活力降低,5-氮胞苷在1-5μmol/L范围内不影响NK-92MI的细胞活力,KIR3DL1阳性NK-92MI细胞的杀伤活力较KIR3DL1阴性细胞的杀伤活力低。结论:去甲基化处理通过诱导抑制性KIR表达增加抑制NK-92MI细胞的杀伤活力。 展开更多
关键词 细胞毒性 nk-92MI细胞 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 5-氮胞苷 DNA甲基化
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NK-92细胞的研究和应用进展 被引量:1
7
作者 罗渊 段连宁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期85-87,91,共4页
关键词 nk-92细胞 过继免疫治疗 肿瘤细胞系 肿瘤生物治疗 原代肿瘤细胞 恶性肿瘤 CIK细胞 过继性细胞
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靶向PSCA的CAR-NK-92细胞对宫颈癌的抗瘤作用
8
作者 马欢 张贤雨 +5 位作者 张飞 李锦秋 卢秀荣 原娜 郝晓慧 张志林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1345-1350,共6页
目的:构建并验证靶向前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的NK-92细胞对宫颈癌的抗瘤活性。方法:构建PSCA靶向的CAR慢病毒表达载体,利用慢病毒感染法获得PSCA CAR-NK... 目的:构建并验证靶向前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的NK-92细胞对宫颈癌的抗瘤活性。方法:构建PSCA靶向的CAR慢病毒表达载体,利用慢病毒感染法获得PSCA CAR-NK-92细胞。用流式细胞术及Western blotting实验检测宫颈癌细胞中PSCA的表达水平。通过体外效靶细胞共孵育实验以及体内裸鼠移植瘤模型中的治疗情况,验证PSCA CAR-NK-92细胞对宫颈癌Hela及MS751细胞杀伤能力及其裸鼠移植瘤生长的抑制能力。结果:成功构建PSCA CAR-NK-92细胞,PSCA在宫颈癌细胞中高表达(均P<0.01)。体外共孵育结果显示,PSCA CAR-NK-92细胞可以以剂量依赖的方式裂解PSCA+的宫颈癌细胞;体内抗肿瘤数据表明,PSCA CAR-NK-92细胞较转染空载体的NK-92细胞显著抑制宫颈癌移植瘤的生长(P<0.01),并且可以有效地浸润肿瘤组织并高水平分泌TNF-α和IFN-γ(均P<0.01)。结论:靶向PSCA的CAR-NK-92细胞在体内外都显示出了良好的对PSCA+肿瘤细胞的杀伤能力,有潜力成为一种针对宫颈癌的潜在治疗策略。 展开更多
关键词 前列腺干细胞抗原 宫颈癌 nk-92细胞 裸鼠移植瘤 免疫治疗
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肿瘤细胞表面NK细胞配体的表达及其对NK-92细胞的敏感性
9
作者 朱慧芬 黄宏 +4 位作者 符明鹏 郭子龙 雷萍 沈关心 何勇 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期383-387,共5页
目的分析肿瘤细胞表面NK细胞配体的表达及其对NK-92细胞的敏感性,以期获得对不同肿瘤的最佳治疗效果。方法采用半定量RT-PCR方法,测定8种肿瘤细胞(K562、Raji、U937、Molt-4、Jurkat、HepG2、Hela、PC3)的9种NK配体(MICA、MICB、ULBP1、... 目的分析肿瘤细胞表面NK细胞配体的表达及其对NK-92细胞的敏感性,以期获得对不同肿瘤的最佳治疗效果。方法采用半定量RT-PCR方法,测定8种肿瘤细胞(K562、Raji、U937、Molt-4、Jurkat、HepG2、Hela、PC3)的9种NK配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、CD58、Nectin-2、CD155、LLT-1、HLA-E)。通过羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)和碘化丙啶(PI)双标记测定NK-92细胞对这些肿瘤细胞的杀伤活性。结果根据肿瘤细胞对NK-92的敏感性将肿瘤细胞分为两组(敏感组和中度敏感组),K562、Raji、U937、Molt-4对NK-92细胞敏感性高,Jurkat、HepG2、Hela、PC3对NK-92细胞中度敏感。CD58和HLA-E的转录水平在两组之间的差异具有统计学意义(P值分别为0.002和0.006),CD58的表达在敏感组高于中度敏感组,而HLA-E的表达在敏感组低于中度敏感组。结论 CD58hi或HLAElow的肿瘤细胞对NK-92的杀伤作用更敏感,因此,肿瘤细胞CD58和HLA-E的表达测定可以作为临床NK细胞治疗的肿瘤检测标志。 展开更多
关键词 nk-92细胞 肿瘤细胞系 NK激活性受体 NK抑制性受体 细胞毒性
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地塞米松诱导NK-92MI细胞株凋亡机制的研究
10
作者 侯佳宜 傅炜昕 +2 位作者 贾秀坤 秦博 梁再赋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期122-125,131,共5页
目的:探讨地塞米松(DEX)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响及机制。方法:用不同浓度的DEX处理NK-92MI细胞:采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2... 目的:探讨地塞米松(DEX)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响及机制。方法:用不同浓度的DEX处理NK-92MI细胞:采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。结果:浓度为1×10-8mol/L至1×10-3mol/L的DEX作用NK-92MI细胞24、48、72小时后,对其增殖均有明显抑制作用(P<0.05);效靶比为5∶1时,1×10-8mol/L至1×10-3mol/L的DEX对NK-92MI细胞杀伤活性均有抑制作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);DEX可诱导NK-92MI细胞发生凋亡且凋亡诱导作用呈浓度时间依赖性;与对照组相比,DEX组Bcl-2基因表达降低(P<0.05),Bax基因表达增高(P<0.01)。结论:DEX可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK-92MI细胞凋亡,而后者与Bax/Bcl-2基因表达增高有关。 展开更多
关键词 地塞米松 nk-92MI细胞 凋亡 BCL-2 BAX
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CD226和9.1C3特异性抗体对NK-92细胞杀伤作用的影响
11
作者 欧阳为明 王宏芳 +3 位作者 汪蕴 王承艳 金伯泉 丰美福 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期740-742,共3页
目的 :探讨NK细胞活化型受体CD2 2 6和NK细胞抑制型受体 9 1C3分子特异性抗体对活化NK细胞系NK 92杀伤的调节作用。方法 :通过间接免疫荧光染色和FCM分析 ,鉴定CD2 2 6和 9 1C3分子在NK 92细胞的表达 ,采用51 Cr释放实验和重导向杀伤实... 目的 :探讨NK细胞活化型受体CD2 2 6和NK细胞抑制型受体 9 1C3分子特异性抗体对活化NK细胞系NK 92杀伤的调节作用。方法 :通过间接免疫荧光染色和FCM分析 ,鉴定CD2 2 6和 9 1C3分子在NK 92细胞的表达 ,采用51 Cr释放实验和重导向杀伤实验观察CD2 2 6mAb和 9 1C3mAb对NK 92杀伤作用的影响。结果 :NK 92细胞为CD2 2 6阳性 ,9 1C3弱阳性。CD2 2 6mAb和 9 1C3mAb对NK 92自然杀伤作用没有明显的调节作用。在重导向杀伤实验中 ,CD2 2 6mAb能增强NK 92对P815细胞的杀伤作用 ,而 9 1C3mAb对NK 92的自然杀伤以及CD2 2 6mAb诱导的杀伤均没有抑制作用。结论 :NK细胞活化型受体CD2 2 6分子可能参与NK 92细胞杀伤作用的正向调节 ,而NK细胞抑制受体 9 1C3分子对NK 92细胞杀伤功能的影响不大。 展开更多
关键词 CD226 9.1C3 特异性抗体 nk-92细胞 杀伤作用
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RhIL-21对NK-92MI细胞生物学活性的影响
12
作者 郑瑞 陈葆国 +3 位作者 颜卫华 李伯利 章卫国 干灵红 《医学研究杂志》 2012年第3期120-124,共5页
目的探讨rhIL-21对NK-92MI细胞免疫功能的影响。方法以不同浓度(25~100ng/ml)的rhIL-21培养NK-92MI细胞24~72h,观察NK-92MI细胞的增殖。以50ng/ml的rhIL-21处理NK-92MI不同时间后,FACS检测NK-92MI细胞的凋亡,NK-92MI细胞表面NKG2D受... 目的探讨rhIL-21对NK-92MI细胞免疫功能的影响。方法以不同浓度(25~100ng/ml)的rhIL-21培养NK-92MI细胞24~72h,观察NK-92MI细胞的增殖。以50ng/ml的rhIL-21处理NK-92MI不同时间后,FACS检测NK-92MI细胞的凋亡,NK-92MI细胞表面NKG2D受体及胞内颗粒酶-B蛋白的表达;细胞杀伤试剂盒检测NK-92MI细胞对靶细胞K-562的细胞毒效应;RT-PCR检测NK-92MI受体NKG2D,效应分子颗粒酶-B、穿孔素及细胞因子IFN-γ基因mRNA的表达;ELISA检测其分泌IFN-γ的水平。结果 RhIL-21虽能抑制NK-92 MI细胞的增殖(P<0.05),但不会促进细胞的凋亡(P<0.05)。RhIL-21能促进NK-92MI细胞穿孔素、IFN-γ、颗粒酶-B、NKG2D受体基因及相应蛋白质的表达上调(P<0.05)。rhIL-21预处理组NK-92MI对K-562细胞的细胞毒效应也明显增强(P<0.05)。结论 RhIL-21能增强NK-92 MI细胞的细胞毒效应,IL-21在肿瘤的免疫治疗中有潜在临床应用价值。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-21 nk-92MI细胞 干扰素-Γ NKG2D 颗粒酶 穿孔素
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Ad5F11p-GFP对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响 被引量:1
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作者 徐赞美 陆颖 +4 位作者 赵兰君 刘金 胡显文 吴祖泽 段海峰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期873-877,共5页
目的:研究Ad5F11p载体对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响,预测Ad5F11p载体在免疫治疗中的应用。方法:用Ad5F11p-GFP以不同的MOI(转染复数)转染原代免疫细胞CIK和免疫细胞系NK-92,并以未转染病毒的两种免疫细胞作为阴性对照... 目的:研究Ad5F11p载体对CIK和NK-92细胞的转染效率及生物学特性的影响,预测Ad5F11p载体在免疫治疗中的应用。方法:用Ad5F11p-GFP以不同的MOI(转染复数)转染原代免疫细胞CIK和免疫细胞系NK-92,并以未转染病毒的两种免疫细胞作为阴性对照;用流式细胞术检测荧光阳性细胞比例,用显微镜观察形态学变化,用台盼蓝染色计数分析细胞的增殖,并用LDH法检测NK-92对白血病细胞系K562和HL-60的杀伤作用。结果:25MOI的Ad5F11p-GFP对NK-92的转染效率可以达到大约90%,200 M OI的Ad5F11p-GFP对CIK转染效率不到40%,同一M OI在48 h和96 h时转染效率基本不变;转染Ad5F11p-GFP的免疫细胞容易聚团,增殖减慢,IFN-γ的释放增加并且对肿瘤的杀伤活性增强。结论:Ad5F11p载体修饰的NK-92在过继性免疫治疗中有较好的应用前景。 展开更多
关键词 Ad5F11p-GFP CIK细胞 nk-92细胞 过继性免疫治疗 转染效率
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嵌合抗原受体修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤 被引量:3
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作者 孔潇 秦扬 +6 位作者 李甲璐 游凤涛 朱学军 袁磊 孟会敏 安钢力 杨林 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期620-625,共6页
目的:探讨用特异性靶向HER2抗原的嵌合抗原受体(HER2-CAR)修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率。方法:通过PCR获得HER2-CAR片段,运用常规分子克隆技术,将其构建到慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒对NK-92MI细胞进行转染... 目的:探讨用特异性靶向HER2抗原的嵌合抗原受体(HER2-CAR)修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率。方法:通过PCR获得HER2-CAR片段,运用常规分子克隆技术,将其构建到慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒对NK-92MI细胞进行转染;应用流式细胞术检测细胞转染效率以及转染前后NK-92MI的IFN-γ和颗粒酶分泌差异;使用7-AAD和流式细胞术体外检测HER2-CAR-NK92MI细胞对乳腺癌细胞的杀伤效率;构建小鼠乳腺癌原位肿瘤模型进行体内细胞毒性的检测。结果:用HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌肿瘤细胞MCF-7和T47D的杀伤效率明显高于未被基因修饰的NK-92MI细胞[分别为(62.4±1.3)%vs(22.1±1.2)%和(50.0±1.9)%vs(16.9±0.6)%,P<0.01];而两者对HER2阴性的乳腺癌细胞MDA-MB-468的杀伤效率没有明显差异[(13.6±1.4)%vs(12.7±0.8)%,P>0.05]。同时,经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞相比未被基因修饰的NK-92MI细胞,IFN-γ的分泌明显升高(P<0.01)。结论:经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率明显提高,且具有特异性靶向,此为治疗乳腺癌等恶性肿瘤提供了临床依据。 展开更多
关键词 乳腺癌细胞 nk-92MI细胞 HER2嵌合抗原受体(HER2-CAR)
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冬凌草甲素对NK-92 MI杀伤THP1细胞的活性影响及机制 被引量:2
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作者 刘雁峰 贾妍 +2 位作者 贺鹏程 张梅 何群 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1374-1379,共6页
目的:观察冬凌草甲素对效应细胞NK-92 MI杀伤靶细胞THP1活性的影响并探讨其作用机制。方法:LDH释放法检测冬凌草甲素作用前后NK-92 MI对THP1的杀伤效率;应用qRT-PCR和Western blot分别检测THP1细胞表面自然杀伤细胞激活性受体D(NKG2D)... 目的:观察冬凌草甲素对效应细胞NK-92 MI杀伤靶细胞THP1活性的影响并探讨其作用机制。方法:LDH释放法检测冬凌草甲素作用前后NK-92 MI对THP1的杀伤效率;应用qRT-PCR和Western blot分别检测THP1细胞表面自然杀伤细胞激活性受体D(NKG2D)相关配体表达情况;ELISA法检测效靶细胞共培养上清中细胞因子表达变化。结果:冬凌草甲素处理后NK-92 MI在不同效靶比均可提高对THP1细胞的杀伤效率;冬凌草甲素可上调THP1细胞表面MICB、ULBP1和ULBP2表达,同时增加效靶细胞共培养上清中IFN-γ和TNF-β释放,而对MICA、ULBP3表达及TNF-α释放无明显影响。结论:冬凌草甲素通过增加MICB、ULBP1和ULBP2表达以及促进IFN-γ和TNF-β释放提高THP1细胞对NK-92 MI的杀伤敏感性。 展开更多
关键词 冬凌草甲素 nk-92 MI THP1 效靶杀伤 免疫治疗
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靶向PD-L1的嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞具有抗A549肺癌细胞增殖活性 被引量:1
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作者 代雯文 王梁 石雪峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期212-217,共6页
目的 探究靶向程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)的嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞在肺癌中的抗肿瘤活性。方法利用慢病毒感染获得嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞(pCAR-92);使用γ干扰素(IFN-γ)诱导肿瘤细胞过表达PD-L1,通过检测乳酸脱氢酶(LDH... 目的 探究靶向程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)的嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞在肺癌中的抗肿瘤活性。方法利用慢病毒感染获得嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞(pCAR-92);使用γ干扰素(IFN-γ)诱导肿瘤细胞过表达PD-L1,通过检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放水平表征pCAR-92细胞对靶细胞A549细胞的细胞毒性,流式细胞术检测pCAR-92细胞中CD107a以及IFN-γ的水平来反映激活状态,通过IFN-γ诱导后的A549细胞NCG小鼠皮下移植建立异种移植瘤模型以验证pCAR-92细胞的体内抗肿瘤活性。结果 流式细胞术检测pCAR-92细胞的感染阳性率为70%~80%,与对照组相比,LDH结果显示pCAR-92细胞可以显著裂解经过IFN-γ诱导的A549细胞,此外,CD107a表达显著上调;pCAR-92细胞与IFN-γ诱导的A549细胞共孵育后;与对照组相比,pCAR-92细胞具有更强的抗移植瘤生长能力,且经pCAR-92细胞治疗后肿瘤部位PD-L1的表达降低,肿瘤浸润自然杀伤(NK)细胞的数量增加。结论 靶向PD-L1的嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞具有明显抗肿瘤效果。 展开更多
关键词 肺癌 A549细胞 嵌合抗原受体(CAR) nk-92细胞 程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)
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靶向MUC16的嵌合抗原受体修饰的NK-92细胞对卵巢癌的抗肿瘤活性 被引量:1
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作者 王慧峰 王海琳 +3 位作者 范颖芳 王文娣 高文娟 王顺英 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期232-238,共7页
目的:探索靶向MUC16的嵌合抗原受体修饰的NK-92(CARNK-92)细胞对卵巢癌的抗肿瘤活性。方法:通过免疫组化法及流式细胞术检测庆阳市中医医院妇产科卵巢癌外科手术15例患者的肿瘤组织及4种卵巢癌细胞系中MUC16的表达情况。通过全基因合成... 目的:探索靶向MUC16的嵌合抗原受体修饰的NK-92(CARNK-92)细胞对卵巢癌的抗肿瘤活性。方法:通过免疫组化法及流式细胞术检测庆阳市中医医院妇产科卵巢癌外科手术15例患者的肿瘤组织及4种卵巢癌细胞系中MUC16的表达情况。通过全基因合成的方法合成MUC CAR序列并构建重组慢病毒表达载体,利用慢病毒感染的方式制备靶向MUC16的CARNK-92细胞(MUC-BBz)。通过流式细胞术检测MUC-BBz中CD107a的表达,以LDH释放法检测该工程细胞的激活及对靶细胞SKOV3的细胞毒性。建立SKOV3细胞裸鼠移植瘤模型,用来检测MUC-BBz的体内抗肿瘤活性。结果:卵巢癌患者肿瘤组织及人卵巢癌细胞中都高表达MUC16。通过慢病毒感染NK-92细胞成功构建MUC-BBz,其阳性率为(42.79±2.58)%。MUCBBz可以被过表达MUC16的肿瘤细胞特异性激活,与效靶细胞共孵育后,MUC-BBz中CD107a的表达量显著升高(P<0.01)、细胞因子IFN-γ以及穿孔素的分泌能力明显增加(均P<0.01);LDH法检测显示,随着效靶比的增加,对4种卵巢癌细胞hey、COC1、SKOV3、A2780的杀伤作用均显著提高(均P<0.01)。体内移植瘤模型实验结果显示,输注MUC-BBz可以显著抑制裸鼠体内SKOV3细胞移植瘤的生长(P<0.01)。结论:构建的CARNK-92细胞可以在体内外显著抑制卵巢癌细胞的增殖,为进一步评估其临床治疗能力提供重要依据。 展开更多
关键词 卵巢癌 SKOV3细胞 嵌合抗原受体 nk-92细胞 MUC16 干扰素-γ CD107a 穿孔素
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谷氨酰胺和丙酮酸钠对NK-92细胞体外扩增的影响 被引量:2
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作者 应丹妮 陈焕芸 +2 位作者 付岩 蔡海波 谭文松 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第3期728-736,共9页
为了优化免疫细胞体外培养体系实现其高效扩增,以自然杀伤细胞系(natural killer-92 cells,NK-92)为对象,通过氨基酸代谢分析及正交实验设计优化了关键代谢物浓度,并在有/无血清培养基中进行了验证。结果表明,谷氨酰胺丙酮酸钠浓度对NK... 为了优化免疫细胞体外培养体系实现其高效扩增,以自然杀伤细胞系(natural killer-92 cells,NK-92)为对象,通过氨基酸代谢分析及正交实验设计优化了关键代谢物浓度,并在有/无血清培养基中进行了验证。结果表明,谷氨酰胺丙酮酸钠浓度对NK-92细胞的体外扩增有显著影响,其最适浓度为13.0和2.5 mmol·L^-1。在此浓度下,有血清培养体系中NK-92细胞扩增15 d后,其扩增倍数可达到(3712.85±225.74)倍,显著高于优化前对照组的(2255.93±243.00)倍(p<0.05);其杀伤活性均值由57.23%提高到63.53%;无血清体系中NK-92细胞扩增15 d后,其扩增倍数可达到(3193.59±199.99)倍,明显高于对照组的(1917.16±242.87)倍(p<0.05),且显著提高了扩增后NK-92细胞中CD3-CD56+细胞比例和杀伤活性(p<0.05)。该结果可为免疫效应细胞无血清培养基的开发提供技术支持。 展开更多
关键词 丙酮酸钠 谷氨酰胺 自然杀伤细胞 体外扩增
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抗CD19嵌合受体修饰的NK-92细胞的构建及其对CD19阳性非霍奇金淋巴瘤细胞的杀伤作用 被引量:2
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作者 姜鑫 朱双阅 +1 位作者 郑海丽 刘秉宇 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期767-771,共5页
目的:构建表达CD19的二代CAR-NK-92细胞系,探讨其对CD19阳性非霍奇金淋巴瘤细胞的特异性杀伤作用。方法:构建表达CD19-CAR基因的载体并包装慢病毒颗粒,感染NK-92细胞,流式细胞术检测感染率,并进一步分选阳性细胞,Western blotting检测CD... 目的:构建表达CD19的二代CAR-NK-92细胞系,探讨其对CD19阳性非霍奇金淋巴瘤细胞的特异性杀伤作用。方法:构建表达CD19-CAR基因的载体并包装慢病毒颗粒,感染NK-92细胞,流式细胞术检测感染率,并进一步分选阳性细胞,Western blotting检测CD19-CAR在NK-92细胞中的表达;以CD19阴性骨髓瘤细胞U-266、CD19阳性的非霍奇金淋巴瘤细胞ARH-77和HS-Sultan细胞为靶细胞,以CD19CAR-NK-92为效应细胞,流式细胞术检测细胞杀伤实验中存活肿瘤细胞的绝对数量并计算杀伤率。结果:成功构建慢病毒载体p LVX-CD19-CAR并包装病毒颗粒,感染NK-92细胞后CD19CAR-NK-92细胞纯度高于90%;Western blotting分析显示CD19-CAR已经成功表达在NK-92中。CD19CAR-NK-92对ARH-77[(70.10±1.86)%vs(1.95±0.63)%,P<0.01]和HS-Sultan[(74.98±1.60)%vs(0.58±1.49)%,P<0.01]细胞的杀伤率显著高于空载体对照组Zs GreenNK-92细胞,对U266的杀伤率无显著差别(P>0.05)。结论:成功构建了表达CD19CAR的NK-92细胞系,其对CD19阳性的非霍奇金淋巴瘤细胞有特异性杀伤作用。 展开更多
关键词 非霍奇金淋巴瘤 嵌合受体 CD19 nk-92 细胞毒性
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杨梅苷对NK-92细胞活性调节作用
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作者 吴晓萍 黄璐 刘春宇 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2016年第10期20-22,共3页
目的:研究杨梅苷对NK-92细胞活性的调节作用。方法:除对照组外,5、10、20μM杨梅苷分别培养NK-92细胞,采用MTT法检测杨梅苷对NK-92细胞增殖活性的影响;以人慢性髓原白血病细胞(K-562)为靶细胞,观察杨梅苷对NK-92细胞杀伤活性的影响。采... 目的:研究杨梅苷对NK-92细胞活性的调节作用。方法:除对照组外,5、10、20μM杨梅苷分别培养NK-92细胞,采用MTT法检测杨梅苷对NK-92细胞增殖活性的影响;以人慢性髓原白血病细胞(K-562)为靶细胞,观察杨梅苷对NK-92细胞杀伤活性的影响。采用流式细胞仪检测NK-92细胞表型CD56、CD16、CD25、CD69的表达,NK-92细胞表面活化受体NCR1、NCR2、NCR3的表达。结果:杨梅苷(5、10、20μM)培养36、48 h后,NK-92细胞的增殖活性与对照组相比明显增高;杨梅苷(10、20μM)培养48 h后,NK-92细胞的杀伤活性也明显比对照组高。杨梅苷(10、20μM)刺激后,NK-92细胞表面CD16、CD69表达无明显变化,CD56的表达强度有明显增加,CD25的阳性率和表达强度都有明显增高。同时,杨梅苷给药组中NCR2的表达强度明显高于对照组。结论:杨梅苷对NK-92细胞有增殖作用,可明显增强NK-92细胞对K-562细胞的体外杀伤活性,同时杨梅苷能明显增强CD56、CD25、NCR2的表达。 展开更多
关键词 杨梅苷 nk-92细胞 活性 表面分子
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