识别乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体NK92MI细胞的制备

目的构建识别乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体(CAR)慢病毒表达载体,并使其在NK92MI细胞表达,制备识别HBsAg的CAR-NK92MI细胞。方法根据单链抗体(scFv)的序列,设计并合成CAR,构建慢病毒表达载体,将其包装、浓缩、测定滴度。然后用浓缩的慢病毒感染HEK293T细胞、Western blot法验证CD3ζ链的表达及在NK92MI细胞中的感染效率。结果成功构建识别HBsAg的CAR慢病毒表达载体,测得滴度≥10^(7)转导单位(TU)/mL。感染NK92MI细胞后,可表达CD3ζ蛋白。结论成功制备了识别HBsAg的CAR-NK92MI细胞。

接触抑制下调CD112和CD155在ECV304细胞上的表达伴有对NK细胞杀伤的抵抗

目的:研究细胞培养接触抑制条件下,ECV304细胞表面CD112和CD155表达的变化及其对NK细胞杀伤敏感性的变化。方法:以ECV304细胞接触抑制为模型,应用免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察CD112和CD155分子在对数生长状态和发生接触抑制状态ECV304细胞上表达情况的变化;采用51Cr-4 h释放试验,观察NK细胞对2种状态ECV304细胞杀伤活性的改变。结果:CD112和CD155分子在ECV304细胞发生接触抑制时表达水平明显低于对数生长期细胞。NK细胞对发生接触抑制的ECV304细胞的杀伤率比对数生长期的细胞有所下降。结论:接触抑制会使ECV304细胞对NK细胞杀伤有一定抵抗,同时伴有CD112和CD155分子表达的下调,两者间是否存在因果关系值得进一步深入探讨。