从NKG2D配体-STAT3通路探讨CIK细胞联合中药调控肿瘤细胞的分子机制

目的:探讨中药联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)调控肿瘤细胞的机制,为中药联合CIK细胞治疗癌症的机制研究提供思路。方法:检索中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数字化期刊全文数据库、PudMed文献数据库,分别查找中药和CIK细胞调控肿瘤细胞的机制,并查找及探讨两者联合调控肿瘤细胞的机制。结果:中药联合CIK细胞能更好地提高对肿瘤细胞的杀伤作用,但其具体机制的研究只针对了某个或者多个信号分子。结论:中药联合CIK细胞治疗肿瘤,可能通过NKG2D配体-STAT3介导的机制,抑制了肺癌细胞免疫逃避,增强了CIK细胞的杀伤活性。

P13K/mTOR信号通路参与调控KG1a细胞NKG2D配体的表达

目的:自然杀伤细胞活化性受体(NKG2D)配体的低表达是白血病干细胞(LSC)逃避免疫杀伤的关键因素,磷脂酰肌醇3-激酶/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/mTOR)信号通路在LSC中高度活化,探讨PI3K/mTOR信号通路是否参与调控LSC中NKG2D配体的表达。方法:采用PI3K/mTOR信号通路抑制剂NVP-BEZ235对人急性骨髓白血病细胞(KG1a细胞)进行干预后,采用细胞技术试剂盒CCK-8检测KG1a细胞增殖,采用流式细胞术检测KG1a细胞周期及凋亡,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及免疫印迹(Western blot)检测细胞中NKG2D配体MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3的表达。结果:抑制剂NVP-BEZ235显著抑制KG1a细胞的增殖,并将KG1a细胞周期阻滞于细胞周期G0/G1期;NVP-BEZ235抑制剂干预后,KG1a细胞NKG2D配体MICB信使核糖核酸(mRNA)相对表达量显著升高,ULBP1、ULBP2、ULBP3、mRNA及蛋白表达量也显著升高。结论:PI3K/mTOR调控LSC的增殖及周期,且其能够调控NKG2D的表达,该结果为通过PI3K/mTOR抑制靶向治疗耐药的LSC提供了数据支持。

AS_2O_3对CD34^+白血病细胞NKG2D配体表达及NK杀伤活性的影响

目的:观察AS2O3对CD34+早期急性髓系白血病细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响。方法:流式细胞仪检测KG1a细胞表面CD34抗原表达率,MTT法确定AS2O3的基本工作浓度,以不同浓度的AS2O3处理KG1a细胞,流式细胞仪测定处理前后KG1a细胞NKG2D配体的表达情况;MACS法分离5例健康个体的NK细胞,LDH释放法检测NK细胞对AS2O3处理前后KG1a细胞的杀伤活性。结果:10nmol/ml的AS2O3作用KG1a细胞后,能使KG1a细胞表面ULBP1的表达水平显著上调(P<0.05),同时也激发了NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:AS2O3能上调CD34+白血病细胞表面NKG2D配体的表达水平,诱导NK细胞对其的杀伤活性,启示AS2O3可与NK细胞组成过继性免疫化疗方案,提高急性白血病的疗效。

苦参碱对K562细胞NKG2D配体表达的影响及其机制研究

目的 探讨苦参碱对白血病细胞表面NK细胞活化性受体凝集素样同型二聚体（NKG2D）配体表达的影响及可能的分子机制.方法 用流式细胞术检测苦参碱处理前后慢性髓性白血病细胞系K562细胞表面NKG2D四种配体分子MICA/B、ULBP1、2、3表达的改变,观察不同浓度苦参碱作用后K562细胞对人NK细胞杀伤的敏感性.Western blot分析苦参碱处理前后K562细胞信号转导与转录活化因子3（STAT3）表达的改变.结果 与未处理组相比,苦参碱处理可显著诱导K562细胞表面ULBP1和ULBP2分子的表达,尤以ULBP2增高最为显著.0.8 mg/ml苦参碱处理后,K562细胞ULBP1和ULBP2表达平均荧光强度（MFI）由处理前的220和615分别增加至429和1 614,MICA/B和ULBP3表达则无明显改变.苦参碱（浓度分别为0.2、0.5和0.8 mg/ml）处理可增强NK细胞对K562细胞的杀伤作用.效靶比5：1时,NK细胞对K562细胞杀伤百分率由处理前的29.2％分别增加至32.8％、38.1％和40.5％.苦参碱对K562细胞STAT3总蛋白表达没有明显影响,但可显著抑制磷酸化STAT3水平.结论 苦参碱可诱导K562细胞NKG2D的配体表达上调,增强K562细胞对NK细胞杀伤敏感性,其分子机制与细胞内STAT3的活性抑制相关.

STAT3介导耐药白血病细胞抗凋亡和免疫逃逸机制的研究

目的:研究STAT3在耐药白血病细胞凋亡及免疫逃逸中的作用,并探讨白血病微小残留病引起的白血病复发的可能机制。方法:用pcDNA3.1-STAT3质粒转染K562细胞,建立耐药白血病细胞株K562/STAT3细胞。RQ-PCR和(或)Western blot检测空载质粒转染的对照细胞株K562/-细胞和K562/STAT3细胞中STAT3、BAX以及NKG2D配体的表达。流式细胞术检测K562/-细胞和K562/STAT3细胞的凋亡情况及NK细胞对K562/-细胞和K562/STAT3细胞的杀伤作用。结果:K562/STAT3细胞中总STAT3和STAT3磷酸化水平均明显升高,而且其耐药蛋白P-gp mRNA的表达明显升高(P<0.005)。与K562/-细胞相比,K562/STAT3细胞促凋亡基因BAX mRNA的表达水平明显下降(P=0.005),且多柔比星引起的K562/STAT3细胞凋亡明显减少(P=0.002);用STAT3抑制剂(SH-4-54)处理K562/STAT3细胞后,促凋亡基因BAX mRNA的表达水平明显升高(P=0.017),同时细胞凋亡也明显增加(P=0.005)。与K562/-细胞相比,K562/STAT3细胞NKG2D配体(MICA和ULBP1)mRNA的表达水平明显下降(P<0.0001),MICA和ULBP1蛋白的表达水平亦明显下降(MICA:P=0.001,ULBP1:P=0.022);用STAT3抑制剂(SH-4-54)处理K562/STAT3细胞后,MICA mRNA和蛋白表达水平升高(mRNA:P=0.001,蛋白:P=0.002),但ULBP1 mRNA和蛋白无明显改变(mRNA:P=0.137,蛋白:P=0.1905)。NK细胞对耐药K562/STAT3细胞的杀伤能力较K562/-细胞下降(P=0.002),但是STAT3抑制剂恢复了K562/STAT3细胞对NK细胞的杀伤敏感性(P=0.006)。结论:STAT3磷酸化介导了耐药白血病细胞抗凋亡,降低其对NK细胞的杀伤敏感性。STAT3抑制剂可以促进耐药白血病细胞凋亡并增加其对NK细胞的杀伤敏感性。

基础理论（081167～081181）

广州市2000～2002年恶性肿瘤的发病率与死亡率分析；趋化因子LD78p和MCP-3的抗肿瘤效果和诱导的免疫反应；NKG2D配体在13种肿瘤细胞系中的表达及意义；十字孢碱促进多柔比星诱导的多药耐药性肿瘤细胞系的凋亡；