初诊恶性肿瘤患者外周血CD3^+ CD56^+ NKT样细胞的检测

目的:探讨初次诊断为恶性肿瘤患者的外周血CD3^+ CD56^+ T淋巴细胞(NKT样细胞)及T调节细胞(regulatory T cells,Treg)的比率并分析其意义。方法:用流式细胞仪检测健康体检者(A组)、非恶性肿瘤患者(B组)、初诊恶性肿瘤患者Ⅰ~Ⅱ期(C组)、初诊恶性肿瘤患者Ⅲ~Ⅳ期(D组)4组患者外周血中CD4^+ CD25^(high)CD127^(low)细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率(Treg细胞)及CD3~ +CD56^+细胞占CD3^+T淋巴细胞的百分率(NKT样细胞)。结果:A、B、C、D 4组患者外周血中Treg细胞分别为(6.72±3.16)%、(6.49±2.83)%、(6.80±3.07)%、(7.63±3.47)%,4组之间比较差异均无显著性(均P>0.05);A、B、C、D4组患者外周血中NKT样细胞分别为(3.13±1.66)%、(2.56±1.27)%、(7.22±2.70)%、(7.72±3.10)%,A、B两组患者的外周血NKT样细胞差异无显著性(P>0.05),C、D两组患者比A、B两组患者的外周血NKT样细胞明显升高(P<0.05)。结论:初次诊断为恶性肿瘤的患者外周血中NKT样细胞有明显升高的趋势。

未治疗HIV感染者NKT样细胞活化、凋亡和增殖的相关研究

目的:研究HIV感染后NKT样细胞活化、凋亡和增殖的变化情况。方法:选取47名未治疗的HIV感染者和31名健康对照者,提取外周血细胞,用荧光标记抗体进行染色,利用流式细胞仪检测HIV感染者NKT样细胞HLA-DR、Annexin-V、Ki-67等表面分子的表达。结果:未治疗HIV感染者NKT样细胞百分数为(3.03±1.61)%,正常人NKT样细胞百分数为(8.30±7.42)%,HIV感染者NKT样细胞百分数显著低于健康对照组(P<0.05);未治疗HIV感染者HLA-DR表达为(5.40±4.10)%,健康对照组HLA-DR表达为(0.89±0.83)%,HIV感染者活化程度明显高于健康对照组(P<0.001),且活化程度与CD4+T细胞计数呈负相关(r=-0.885 7,P<0.05);未治疗HIV感染者Annexin-V表达为(30.21±13.15)%,凋亡程度明显高于健康对照组(5.40±8.05)%,(P<0.01);未治疗HIV感染者Ki-67的表达为(11.15±4.76)%,增殖能力明显低于健康对照组(27.63±18.31)%,(P<0.05)。结论:HIV感染可明显降低NKT样细胞数量及增殖能力,而其活化及凋亡能力增加。

HIV感染者NKT样细胞基线功能对疾病进程的影响

目的本实验通过检测HIV感染者NKT样细胞基线功能的变化,研究NKT样细胞对HIV感染疾病进程的影响。方法应用流式细胞术直接对HIV感染者以及健康对照外周血NKT样细胞IFN-γ分泌和CD107a表达进行研究。结果 NKT样细胞分泌IFN-γ百分比高者HIV疾病进展慢(P<0.008,P<0.001),与CD4+T细胞计数呈显著正相关(r=0.402,P=0.027),而与病毒载量呈显著负相关(r=-0.472,P=0.037)。结论 NKT样细胞功能较强,具有免疫保护作用,是延缓HIV病程的重要因素之一,可作为监测HIV疾病进展的指标。

CD3^+CD56^+NKT样细胞在急性白血病患者体内表达的研究

目的探讨CD3+CD56+NKT样细胞在急性白血病患者治疗前后体内的表达情况。方法分别取急性白血病(急性髓系白血病43例,急性淋巴细胞白血病12例,急性混合细胞白血病5例)及非恶性肿瘤(10例)患者骨髓血2ml送流式细胞仪检测,比较白血病患者治疗前后及非恶性肿瘤患者体内CD3+CD56+NKT样细胞的表达情况。结果急性白血病患者初治组与非恶性肿瘤患者对照组间比较,急性白血病患者骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例明显比对照组低(P<0.01);急性白血病患者治疗后骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例明显比治疗前高(P<0.01),且与缓解程度及时间呈正相关;急性白血病患者治疗后骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例与非恶性肿瘤对照组比较无统计学意义(P>0.05);不同类型白血病之间,急性早幼粒细胞白血病治疗后CD3+CD56+NKT样细胞比例明显较其他类型高(P<0.05),急性髓系白血病(除M3外)与急性淋巴细胞白血病之间比较CD3+CD56+NKT样细胞比值结果比较无统计学意义(P>0.05)。结论急性白血病患者CD3+CD56+NKT样细胞反映了机体的免疫功能,化疗后CD3+CD56+NKT样细胞明显增多可能是预后较好的标志之一。

HIV慢性感染者CD3^+CD56^+NKT样细胞表面Gal-9受体表达研究

目的研究Gal-9在HIV慢性感染者NKT样细胞上的表达情况。方法选取HIV慢性感染者29例和健康人21例。对外周血单个核细胞进行荧光抗体染色,利用流式细胞仪检测CD3^+CD56^+NKT样细胞Gal-9受体表达的情况,然后分析Gal-9受体在HIV感染前后的表达差异及其与CD4^+T细胞计数和病毒载量之间的关系。结果 HIV慢性感染者CD3^+CD56^+NKT样细胞占总淋巴细胞的百分比明显低于健康对照组(P=0.020)。HIV慢性感染者Gal-9^+NKT%与健康对照组相比又明显的增加(P=0.016)。正常人和感染者的NKT样细胞上Gal-9的平均荧光强度(MFI)无明显差异,而低CD4^+T细胞组(CD4^+T<350/μl)的NKT样细胞上Gal-9的MFI比正常人组显著增加(P=0.022)。Gal-9^+NKT%与CD4^+T细胞数无明显相关性,而Gal-9的MFI与CD4^+T细胞数呈负相关(P=0.025)。结论 HIV慢性感染者与正常人相比CD3^+CD56^+NKT样细胞GAL-9受体表达的百分数明显增加,Gal-9 MFI与CD4^+T细胞数成负相关,提示NKT样细胞Gal-9受体表达是HIV疾病进展的标志物之一。

CD3^+CD56^+NKT样细胞在胃癌患者外周血中的检测及其功能下降的机制

目的分析CD3^+CD56^+NKT细胞在胃癌患者外周血中的应答水平和功能特征,并初步探讨其功能下降的机制。方法采用流式细胞术检测胃癌患者外周血中CD3^+CD56^+NKT样细胞的比例及其功能,同时采用胃癌患者外周血浆刺激单个核细胞并加入抗体阻断,探讨外周血中细胞因子对CD3^+CD56^+NKT样细胞功能的影响,最后分析其功能变化与疾病进展的关联性。结果与正常对照组和胃溃疡患者组相比,胃癌患者外周血中CD3^+CD56^+NKT样细胞的比例无统计学差异;但其表达的INF-γ和TNF-α水平显著下降(P<0.05);体外刺激实验显示,胃癌患者外周血来源的TGF-β1可抑制CD3^+CD56^+NKT样细胞分泌INF-γ和TNF-α(P<0.05);晚期胃癌患者外周血中表达INF-γ和TNF-α的CD3^+CD56^+NKT样细胞水平显著低于早期胃癌患者(P<0.05)。结论胃癌患者外周血中的TGF-β1抑制了CD3^+CD56^+NKT样细胞的抗肿瘤功能,从而导致了胃癌的进展。

抗病毒治疗后HIV感染者NKT样细胞衰老和体外增殖研究

目的:研究高效抗逆转录病毒治疗(Highly active antiretroviral therapy,HAART)后NKT样细胞衰老和体外增殖情况。方法:选取未接受HAART治疗、接受HAART治疗的HIV感染者以及健康人的外周血细胞,利用流式细胞仪检测接受HAARRT治疗前后的HIV感染者NKT样细胞CD57的表达情况以及体外增殖能力。结果:HIV感染者在HAART治疗前NKT样细胞的百分数显著低于健康对照组(P<0.01),HAART治疗后恢复(P<0.05);HAART治疗前NKT样细胞CD57的表达明显高于健康对照组(P<0.01),HAART治疗后恢复(P<0.05);HAART治疗前NKT样细胞体外增殖能力明显低于健康对照组,HAART治疗后有所恢复。结论:经过HAART治疗后,HIV感染者NKT样细胞的数量、CD57表达以及体外增殖能力有所恢复。

HIV感染者自然杀伤样T细胞分泌的TGF-β和IL-10水平

目的探究HIV感染者自然杀伤样T细胞(NKT-like)分泌的TGF-β、IL-10水平及其与疾病进展的关系。方法提取正常对照者和HIV感染者外周血单个核细胞,加入IL-2(200 IU),IL-15(50 ng/ml)及IL-12(10 ng/ml)进行培养,共培养24 h后进行破膜胞内染色,FACS LSRII流式细胞仪检测NKT-like细胞TGF-β、IL-10水平。结果 HIV感染者NKT样细胞分泌的TGF-β明显高于正常对照者(P=0.017),分泌的IL-10有高于正常对照者的趋势;HIV感染者NKT样细胞分泌的TGF-β、IL-10与CD4+T细胞计数、病毒载量(log10VL)没有统计学上的相关性;NKT样细胞分泌的IL-10和TGF-β水平具有明显的正相关(r=0.663,P=0.001);体外加入r IL-10、r TGF-β可抑制NKT样细胞CD107a或IFN-γ的分泌。结论 HIV感染者NKT样细胞分泌的免疫抑制性细胞因子TGF-β、IL-10增多,可能对HIV感染者免疫功能紊乱起着促进作用。

HIV原发感染者自然杀伤样T细胞NKG2A/NKG2D变化的研究

目的深入了解人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)原发感染者(primary HIV infection,PHI)NKT样细胞表面NKG2A/NKG2D受体表达的变化。方法选取25例未经高效抗逆转录病毒治疗的HIV原发感染者和27例HIV抗体阴性健康对照,用流式细胞仪检测研究对象外周血NKT样细胞表面NKG2D和NKG2A的表达。结果 HIV原发感染者NKT样细胞绝对数和百分率显著低于健康对照(P<0.01)。HIV原发感染者NKT样细胞表面NKG2A、NKG2D受体表达与健康对照并无显著差异。HIV原发感染者病毒调定点低组NKG2A+NKT样细胞、NKG2A+NKG2D-NKT样细胞以及NKG2A+NKG2D+NKT样细胞百分率均显著低于病毒调定点高组(P<0.05);NKT细胞绝对数和百分率、NKG2D+NKT样细胞、NKG2D+NKG2A-NKT样细胞百分率在两组间相似,没有显著性差异。NKG2A+NKT细胞的百分比与病毒载量正相关(R=0.430,P=0.032)。结论 NKT样细胞数量以及其表面NKG2A受体的表达可作为HIV疾病进程的预测指标之一。

CD3^-CD56^+NK细胞及CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞在急性白血病患者中的变化

目的通过分析急性白血病患者发病时以及缓解时外周血CD3^-CD56^+NK细胞及CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞的数量以及功能变化,进一步了解急性白血病患者免疫功能状态。方法使用流式细胞分析外周血CD3^-CD56^+NK细胞及CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞的数量,同时分析上述两群细胞内的干扰素表达水平来评估细胞的功能。结果CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞数量在急性白血病发病时显著增加,经化疗获得完全缓解后数量又下降到正常健康人水平,并且无论在发病时还是缓解时CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞内干扰素水平均明显下降。CD3^-CD56^+NK细胞的变化有所不同,在发病时数量以及功能改变均不明显,而在疾病缓解时,急性淋巴细胞白血病患者CD3^-CD56^+NK细胞的数量下降明显,急性髓系白血病患者CD3^-CD56^+NK细胞的功能下降明显。结论急性白血病患者发病时可能产生免疫反应,但免疫细胞功能缺陷可能参与疾病的发生进展,其中CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞的变化可能与疾病的关系更密切,且急性髓系白血病患者免疫细胞功能异常更明显。